熒光壽命成像有什么作用?熒光壽命可以在頻域或者時(shí)間域測(cè)量。時(shí)間域測(cè)量方法涉及用短光脈沖照射樣品(比色皿、細(xì)胞或組織),然后隨時(shí)間測(cè)量發(fā)射強(qiáng)度。FLT由衰減曲線的斜率確定。有幾種熒光檢測(cè)方法可用于壽命測(cè)量,其中時(shí)間相關(guān)單光子計(jì)數(shù)(TCSPC)可實(shí)現(xiàn)簡(jiǎn)單的數(shù)據(jù)收集和增強(qiáng)的定量光子計(jì)數(shù)。頻域方法涉及高頻率入射光的正弦調(diào)制。在該方法中,發(fā)射發(fā)生在與入射光相同的頻率處,并且隨著激發(fā)光兼有相位延遲和振幅的變化(解調(diào))。壽命測(cè)量不需要波長(zhǎng)比率探針來提供眾多分析物的定量測(cè)定。壽命法通過使用光譜位移探針擴(kuò)展了分析物濃度范圍的靈敏度。熒光成像在疾病診斷,藥物分布和代謝評(píng)估以及血管生物成像中得到了普遍的應(yīng)用。湖北植...
熒光壽命成像與傳統(tǒng)的使用熒光強(qiáng)度和光譜信息作為鑒別組織異常的成像方式相比,壽命成像提供了更多的生化診斷信息。熒光壽命成像已用于骨骼和牙齒的診斷。另外,采用多光子激發(fā)可顯著提高組織體的成像深度,如對(duì)人體皮膚自體熒光進(jìn)行多光子激發(fā)熒光壽命成像,成像深度達(dá)200 um,組織體的熒光壽命分布揭示了細(xì)胞代謝狀態(tài)的變化,可用于對(duì)皮膚病的診斷。對(duì)腔體中瘤的早期臨床診斷,已開發(fā)出具有實(shí)時(shí)及壽命分辨功能的內(nèi)窺鏡,并對(duì)離體膀胱樣品進(jìn)行測(cè)試,得到了黃素分子的自體熒光壽命圖像。熒光壽命成像不但可在樣品表面,還可在樣品表面以下實(shí)現(xiàn)深度解析測(cè)量。動(dòng)物熒光壽命成像操作步驟熒光壽命取決于熒光分子所處的微環(huán)境,通過對(duì)樣品熒光壽...
用于流場(chǎng)診斷的快速熒光壽命成像系統(tǒng)及方法:熒光壽命成像具有不受染料濃度、不受光漂白、不受樣本厚度和光源噪聲的影響等諸多優(yōu)點(diǎn),通過這一技術(shù)手段可以深入地進(jìn)行功能性測(cè)量,獲取分子構(gòu)象、分子微環(huán)境變化等信息,研究分子間的相互作用。熒光共振能量轉(zhuǎn)移是一種非輻射的,距離依賴的由供體熒光基團(tuán)傳遞能量至受體熒光基團(tuán)的過程,普遍用于蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象變化,蛋白質(zhì)分子間的相互作用,分子間距離的測(cè)量等研究。熒光壽命是熒光分子停留在激發(fā)態(tài)的時(shí)間,是熒光分子的固有性質(zhì),同熒光強(qiáng)度成像相比。熒光壽命成像可以直接檢測(cè)熒光和時(shí)間分辨的熒光壽命。湖南單分子熒光壽命成像批發(fā)熒光成像技術(shù)涉及精確測(cè)量已添加到組織中的自然熒光分子或熒...
熒光壽命通常來講是一定的,不受激發(fā)光強(qiáng)度、熒光團(tuán)濃度等因素的影響,只與熒光團(tuán)所處的微環(huán)境有關(guān),因此,利用熒光壽命顯微鏡(Fluorescence lifetime imaging microscopy, FLIM)對(duì)樣品進(jìn)行熒光壽命成像,可以對(duì)樣品所在的微環(huán)境中的許多物理參數(shù)如氧壓、溶液疏水性等及生物化學(xué)參數(shù)如pH值、離子濃度等進(jìn)行定量測(cè)量。此外,熒光壽命成像技術(shù)還可以同時(shí)獲得分子狀態(tài)和空間分布的信息。因此,熒光壽命成像在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域有廣闊的應(yīng)用前景。熒光壽命成像技術(shù)是通過建立檢測(cè)到的熒光事件的直方圖來確定壽命。福建分子熒光壽命成像使用方法熒光壽命成像可以干什么?熒光壽命成像圖像中每一個(gè)像素點(diǎn)...
熒光成像技術(shù)是一種非侵入性成像方法,熒光成像技術(shù)可以實(shí)時(shí)和多維度地清晰地監(jiān)測(cè)生物分子、細(xì)胞、組織和生物生物。具有高靈敏度輸出、高時(shí)間分辨率、非侵入性和低成本。熒光成像在疾病診斷,藥物分布和代謝評(píng)估以及血管生物成像中得到了普遍的應(yīng)用。其中一些前瞻性方法在診斷和影像學(xué)引導(dǎo)療治為未來醫(yī)學(xué)發(fā)展提供更廣闊的道路。除了手術(shù)中的成像引導(dǎo),熒光成像技術(shù)還可以用于手術(shù)中神經(jīng)保護(hù),外科手術(shù)過程中神經(jīng)意外橫斷或損傷,導(dǎo)致患者部分活動(dòng)功能衰退甚至長(zhǎng)久喪失。影響熒光壽命成像測(cè)量的因素是什么?上海紅外熒光壽命成像費(fèi)用熒光壽命成像顯微術(shù)是一種利用熒光染料固有特性的成像技術(shù)。除了具有特有的發(fā)射光譜外,每個(gè)熒光分子還有特有的壽...
影響熒光壽命成像測(cè)量的因素:高濃度樣品的影響:1)當(dāng)激發(fā)光照射高濃度樣品時(shí),在激發(fā)光入口附近產(chǎn)生熒光,但這些熒光并不能進(jìn)入熒光檢測(cè)器。2)高濃度的分子之間相互作用而發(fā)生活性阻礙現(xiàn)象。3)熒光的再吸收:即熒光光譜的短波長(zhǎng)端和激發(fā)光譜的長(zhǎng)波長(zhǎng)端如果相互重疊,則發(fā)生熒光再吸收。熒光壽命成像具有200 nm的空間分辨率和皮秒量級(jí)的時(shí)間分辨率。散射光的影響: 主要是瑞利散射光和拉曼散射光的影響較大。校正辦法:先用短的激發(fā)光激發(fā),檢出溶液的拉曼峰,然后進(jìn)行熒光光譜校正。因?yàn)闊晒夤庾V不隨激發(fā)光波長(zhǎng)的改變而改變,而拉曼光卻隨之改變。熒光壽命成像具高靈敏度、可檢測(cè)人體生物樣品等優(yōu)點(diǎn)。上海紅外熒光壽命成像費(fèi)用為什...
熒光壽命成像和熒光光盤有什么區(qū)別?與熒光光譜一樣,熒光壽命也是熒光物質(zhì)的一種內(nèi)在特有性質(zhì),不受熒光物質(zhì)濃度、激發(fā)光強(qiáng)度等因素的影響。熒光壽命成像能在不受熒光強(qiáng)度影響因素影響的條件下,在納米分辨率水平對(duì)蛋白互作進(jìn)行研究,或者通過 FRET 探針研究分子環(huán)境變化,更重要的是其測(cè)量數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性高、易重復(fù)。通過熒光壽命成像還可以對(duì)樣本所處的微環(huán)境進(jìn)行檢測(cè)、對(duì)樣品組份進(jìn)行分離等等。在傳統(tǒng)的熒光強(qiáng)度和熒光光譜兩個(gè)維度的基礎(chǔ)上,又增加了熒光壽命這一新的成像維度,大幅度拓展了該系統(tǒng)的應(yīng)用范圍。熒光壽命取決于熒光分子所處的微環(huán)境。福建紅外熒光壽命成像哪里買熒光壽命成像的原理:如果分子環(huán)境刺激激發(fā)態(tài)衰變而不發(fā)射光子...
為什么說熒光壽命成像FLIM相比于熒光強(qiáng)度成像更有優(yōu)勢(shì)?通過熒光強(qiáng)度成像可以獲得熒光分子的空間分布,較為直接和簡(jiǎn)便,但是當(dāng)熒光分子具有相似的頻譜特性,或是同樣的熒光分子在不同環(huán)境下時(shí),依賴強(qiáng)度進(jìn)行成像的方案便無(wú)法準(zhǔn)確反映信息。與基于光強(qiáng)的成像方式不同,熒光壽命成像FLIM適用于測(cè)量熒光分子環(huán)境的變化,或是測(cè)量分子的運(yùn)動(dòng)情況。其結(jié)果與熒光分子濃度無(wú)關(guān),且不受影響光強(qiáng)的光散射或是光吸收影響,可以精確測(cè)量熒光淬滅過程,對(duì)生物分子微環(huán)境進(jìn)行定量測(cè)量。熒光壽命成像可以用于無(wú)法控制局部探針濃度的熒光顯微鏡中。熒光壽命成像可以用于無(wú)法控制局部探針濃度的熒光顯微鏡中。北京多色熒光壽命成像哪個(gè)牌子好熒光壽命顯微...
影響熒光壽命成像測(cè)量的因素:高濃度樣品的影響:1)當(dāng)激發(fā)光照射高濃度樣品時(shí),在激發(fā)光入口附近產(chǎn)生熒光,但這些熒光并不能進(jìn)入熒光檢測(cè)器。2)高濃度的分子之間相互作用而發(fā)生活性阻礙現(xiàn)象。3)熒光的再吸收:即熒光光譜的短波長(zhǎng)端和激發(fā)光譜的長(zhǎng)波長(zhǎng)端如果相互重疊,則發(fā)生熒光再吸收。熒光壽命成像具有200 nm的空間分辨率和皮秒量級(jí)的時(shí)間分辨率。散射光的影響: 主要是瑞利散射光和拉曼散射光的影響較大。校正辦法:先用短的激發(fā)光激發(fā),檢出溶液的拉曼峰,然后進(jìn)行熒光光譜校正。因?yàn)闊晒夤庾V不隨激發(fā)光波長(zhǎng)的改變而改變,而拉曼光卻隨之改變。熒光壽命成像的優(yōu)勢(shì)是什么?天津紅外熒光壽命成像批發(fā)熒光壽命成像的優(yōu)勢(shì)是什么?熒...
熒光壽命成像技術(shù)是怎么運(yùn)作的?通過建立檢測(cè)到的熒光事件的直方圖來確定壽命。可顯示單指數(shù)或多指數(shù)熒光衰減。數(shù)值曲線擬合表示熒光壽命和振幅(即檢測(cè)到的光子數(shù))。由于FRET減少了供體壽命,因此如果無(wú)FRET的供體壽命已知,就可以量化FRET發(fā)生的程度。該供體壽命τ作為分析FRET樣品的一定參考。因此,F(xiàn)LIM-FRET為內(nèi)部參照—這一特點(diǎn)減少了基于強(qiáng)度測(cè)量FRET時(shí)的很多缺點(diǎn)。由于其熒光壽命是染料的固有特性,因此對(duì)其他不利影響(如光漂白、圖像明暗處理、不同濃度或表達(dá)水平)具有普遍的不變性。使用基于強(qiáng)度的FRET測(cè)量的主要限制是所有可觀察的供體分子都經(jīng)歷FRET的基本假設(shè)。通常情況并非如此。熒光壽命...
熒光壽命成像技術(shù)是如何應(yīng)用在生物醫(yī)學(xué)中的?隨著近年來對(duì)蛋白及分子功能研究的不斷深入,科研工作者除對(duì)多色成像、鈣成像等功能成像的需求日漸增多之外,對(duì)熒光壽命成像的需求也逐漸增加,而熒光壽命成像能提供除熒光強(qiáng)度、熒光光譜信息之外的熒光分子的壽命信息,可用于分子間相互作用(FRET)、分子所處微環(huán)境的離子濃度(如Ca2+、pH)及細(xì)胞代謝水平的改變等測(cè)量,并可拆分光譜重疊的熒光染料及染料和自發(fā)熒光,還可以結(jié)合熒光相關(guān)光譜對(duì)單分子實(shí)現(xiàn)熒光壽命相關(guān)光譜FLCS的測(cè)量。熒光壽命成像擴(kuò)展了傳統(tǒng)熒光成像的維度,是功能成像的理想工具,在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域有廣闊的應(yīng)用前景。熒光壽命成像不但可在樣品表面,還可在樣品表面以...
熒光壽命成像這種技術(shù)相對(duì)較新,涉及到同時(shí)在圖像的每個(gè)像素處確定熒光衰減時(shí)間的空間分布。它基于熒光團(tuán)的熒光壽命取決于其分子環(huán)境而并非濃度的事實(shí)。它可以用于無(wú)法控制局部探針濃度的熒光顯微鏡中。熒光壽命成像(FLIM)可用于測(cè)量分子環(huán)境參數(shù),通過熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)進(jìn)行的蛋白質(zhì)相互作用,并可以通過細(xì)胞和組織的自發(fā)熒光來測(cè)量其代謝狀態(tài)。分子環(huán)境參數(shù)可以通過因熒光淬滅或熒光團(tuán)的構(gòu)象變化而引起的壽命變化來測(cè)量。FLIM可用于多種生物應(yīng)用,包括組織表面掃描、組織類型繪圖、光動(dòng)力治理、DNA芯片分析、皮膚成像等。熒光壽命成像擁有超快的激光技術(shù),高速、高靈敏度探測(cè)技術(shù)。福建分子熒光壽命成像哪家專業(yè)熒光壽...
熒光壽命成像可以干什么?熒光壽命成像圖像中每一個(gè)像素點(diǎn)在phasor圖上都有一個(gè)對(duì)應(yīng)的點(diǎn)。因此我們可以獲取每個(gè)像素點(diǎn)的壽命信息,也可以獲知每一壽命所對(duì)應(yīng)的圖像區(qū)域。熒光壽命成像可以提供熒光強(qiáng)度(光子數(shù))和光子壽命的空間分布,具有200 nm的空間分辨率和皮秒量級(jí)的時(shí)間分辨率。通過雙光子激發(fā)(結(jié)合飛秒脈沖和共焦顯微鏡)可以直接檢測(cè)熒光和時(shí)間分辨的熒光壽命。這種無(wú)損檢測(cè)技術(shù),無(wú)需解剖或?qū)iT制造分層樣品,不但可在樣品表面,還可在樣品表面以下實(shí)現(xiàn)深度解析測(cè)量。特別適用于新材料、光子學(xué)、光伏、光催化、生物材料、納米材料和納米復(fù)合材料以及其相關(guān)的原理探究和設(shè)計(jì)優(yōu)化。熒光壽命成像可以體現(xiàn)熒光物質(zhì)形貌信息。湖...
熒光壽命成像技術(shù)用于表征DNA壓縮和基因活性。研究團(tuán)隊(duì)發(fā)展了熒光壽命成像技術(shù)(FLIM),表征DNA壓縮的動(dòng)態(tài)過程,克服了以往方法的局限性。研究團(tuán)隊(duì)提出了兩種精確測(cè)量DNA壓縮程度的FLIM分析方法。第一種方法基于加入DNA的熒光探針的熒光壽命與其局部微環(huán)境折射率之間的逆二次方關(guān)系,熒光探針的壽命隨DNA壓縮密度而變化,從而可表征DNA壓縮程度。第二種方法是將熒光標(biāo)記的核苷酸整合到DNA鏈中,通過一種叫做熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)的技術(shù)獲得其熒光壽命值的變化,從而反映出DNA的壓縮程度的動(dòng)態(tài)變化過程。細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果證明,兩種FLIM分析方法都可以成功表征DNA壓縮的動(dòng)態(tài)過程。熒光壽命成像技術(shù)是...
熒光壽命顯微成像技術(shù)具有對(duì)生物大分子結(jié)構(gòu)、動(dòng)力學(xué)信息和分子環(huán)境等進(jìn)行高分辨高精度測(cè)量的能力,因此其重要性日漸提升,被普遍地應(yīng)用于生物學(xué)研究及臨床診斷等領(lǐng)域。熒光壽命,分子包含多個(gè)能態(tài)S0、S1、S2和三重態(tài)T1,每個(gè)能態(tài)都包含多個(gè)精細(xì)的能級(jí)。正常情況下,大部分電子處在較低能態(tài)即基態(tài)S0的較低能級(jí)上,當(dāng)分子被光束照射,會(huì)吸收光子能量,電子被激發(fā)到更高的能態(tài)S1或S2上,在S2能態(tài)上的電子只能存在很短暫的時(shí)間,便會(huì)通過內(nèi)轉(zhuǎn)換過程躍遷到S1上,而S1能態(tài)上的電子亦會(huì)在極短時(shí)間內(nèi)躍遷到S1的較低能級(jí)上,而這些電子會(huì)存在一段時(shí)間后通過震蕩弛豫輻射躍遷到基態(tài),這個(gè)過程會(huì)釋放一個(gè)光子,即熒光。隨著技術(shù)的發(fā)展...
熒光壽命是指分子受到光脈沖激發(fā)后返回基態(tài)之前在激發(fā)平均停留的時(shí)間,處于激發(fā)態(tài)的熒光分子在從激發(fā)到基態(tài)的過程中發(fā)射熒光釋放能量。熒光壽命取決于熒光分子所處的微環(huán)境,通過對(duì)樣品熒光壽命的測(cè)量和成像可以定量獲取樣品的功能信息。熒光壽命成像技術(shù)有兩種:時(shí)間域和頻率域。(1)時(shí)域FLIM:需要脈沖光源,所以一般在雙光子的系統(tǒng)上比較常見FLIM(熒光壽命成像Fluorescence Life-time imaging Microcopy簡(jiǎn)稱FLIM)。(2)頻域FLIM:需要一個(gè)相位調(diào)制的光源,有用LED調(diào)制的, FLIM對(duì)很多研究都有幫助,以下為熒光壽命成像FLIM的應(yīng)用:1)細(xì)胞體自身熒光壽命分析;2...
影響熒光壽命成像測(cè)量的因素有哪些?溫度影響:一般說來,熒光隨溫度升高而強(qiáng)度減弱,溫度升高1℃,熒光強(qiáng)度下降1~10%不等。測(cè)定時(shí),溫度必須保持恒定。PH值影響:PH 值影響物質(zhì)的熒光,應(yīng)選擇較佳PH制備樣品。光分解對(duì)熒光測(cè)定的影響: 熒光物質(zhì)吸收紫外可見光后,發(fā)生光化學(xué)反應(yīng),導(dǎo)致熒光強(qiáng)度下降。因此,熒光分析要采用高靈敏度的檢測(cè)器,而不是用增強(qiáng)光源來提高靈敏度。測(cè)定時(shí),用較窄的激發(fā)光部分的狹縫,以減弱激發(fā)光。同時(shí),用較寬的發(fā)射狹縫引導(dǎo)熒光。熒光分析應(yīng)盡量在暗環(huán)境中進(jìn)行。熒光壽命成像這種技術(shù)相對(duì)較新,涉及到同時(shí)在圖像的每個(gè)像素處確定熒光衰減時(shí)間的空間分布。熒光壽命檢測(cè)經(jīng)典方法為點(diǎn)對(duì)點(diǎn)的時(shí)間相關(guān)單光...
熒光壽命成像可以在體現(xiàn)熒光物質(zhì)形貌信息之外,還能夠靈敏地反應(yīng)熒光基團(tuán)生化特性以及周圍微環(huán)境的變化情況。將熒光壽命成像與共聚焦成像技術(shù)結(jié)合起來,實(shí)現(xiàn)人體三維熒光壽命成像,進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)人體三維功能成像奠定基礎(chǔ),有潛力應(yīng)用于瘤識(shí)別,病變?cè)\斷等領(lǐng)域。熒光壽命是熒光基團(tuán)在通過發(fā)射熒光光子返回基態(tài)之前在其激發(fā)態(tài)下保持平均多長(zhǎng)時(shí)間的量度。不同熒光基團(tuán)激發(fā)態(tài)停時(shí)間不同,大多數(shù)生物熒光素的熒光壽命時(shí)間在 0.2 - 20 ns。熒光壽命檢測(cè)經(jīng)典方法為點(diǎn)對(duì)點(diǎn)的時(shí)間相關(guān)單光子計(jì)數(shù)(TCSPC),但由于過去檢測(cè)硬件的局限和復(fù)雜的使用而沒有被普遍地應(yīng)用于科學(xué)研究。隨著技術(shù)的發(fā)展,在顯微鏡視野內(nèi)進(jìn)行超快速全像素?zé)晒鈮勖盘?hào)...
熒光壽命顯微成像(Fluorescence lifetime imaging microscopy,FLIM)是熒光壽命測(cè)量和熒光顯微技術(shù)的結(jié)合,已普遍應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究和其他領(lǐng)域。FLIM具有高特異性、高靈敏度、可定量測(cè)量微環(huán)境變化和分子間相互作用、不受探針濃度、激發(fā)光強(qiáng)度和光漂白影響等優(yōu)點(diǎn)。在過去的十年中,光學(xué)技術(shù)硬件和軟件、材料科學(xué)和生物醫(yī)學(xué)的迅速發(fā)展,共同促進(jìn)了FLIM技術(shù)及其應(yīng)用的巨大進(jìn)步。盡管經(jīng)過幾十年的技術(shù)發(fā)展,F(xiàn)LIM技術(shù)在實(shí)際應(yīng)用中仍然面臨著一些挑戰(zhàn),例如:FLIM的成像分辨率也會(huì)受到光衍射的限制,因此,在實(shí)際應(yīng)用中,我們經(jīng)常需要在成像速度、圖像質(zhì)量和微環(huán)境壽命精度之間進(jìn)行權(quán)...
用于流場(chǎng)診斷的快速熒光壽命成像系統(tǒng)及方法:熒光壽命成像具有不受染料濃度、不受光漂白、不受樣本厚度和光源噪聲的影響等諸多優(yōu)點(diǎn),通過這一技術(shù)手段可以深入地進(jìn)行功能性測(cè)量,獲取分子構(gòu)象、分子微環(huán)境變化等信息,研究分子間的相互作用。熒光共振能量轉(zhuǎn)移是一種非輻射的,距離依賴的由供體熒光基團(tuán)傳遞能量至受體熒光基團(tuán)的過程,普遍用于蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象變化,蛋白質(zhì)分子間的相互作用,分子間距離的測(cè)量等研究。熒光壽命是熒光分子停留在激發(fā)態(tài)的時(shí)間,是熒光分子的固有性質(zhì),同熒光強(qiáng)度成像相比。光壽命成像顯微技術(shù)已在生命科學(xué)領(lǐng)域中得到了普遍的應(yīng)用。上海多色熒光壽命成像制造熒光壽命成像顯微術(shù)是一種利用熒光染料固有特性的成像技術(shù)...
影響熒光壽命成像測(cè)量的因素有哪些?溫度影響:一般說來,熒光隨溫度升高而強(qiáng)度減弱,溫度升高1℃,熒光強(qiáng)度下降1~10%不等。測(cè)定時(shí),溫度必須保持恒定。PH值影響:PH 值影響物質(zhì)的熒光,應(yīng)選擇較佳PH制備樣品。光分解對(duì)熒光測(cè)定的影響: 熒光物質(zhì)吸收紫外可見光后,發(fā)生光化學(xué)反應(yīng),導(dǎo)致熒光強(qiáng)度下降。因此,熒光分析要采用高靈敏度的檢測(cè)器,而不是用增強(qiáng)光源來提高靈敏度。測(cè)定時(shí),用較窄的激發(fā)光部分的狹縫,以減弱激發(fā)光。同時(shí),用較寬的發(fā)射狹縫引導(dǎo)熒光。熒光分析應(yīng)盡量在暗環(huán)境中進(jìn)行。熒光壽命成像這種技術(shù)相對(duì)較新,涉及到同時(shí)在圖像的每個(gè)像素處確定熒光衰減時(shí)間的空間分布。熒光壽命成像有潛力應(yīng)用于瘤識(shí)別,病變?cè)\斷等...
熒光壽命成像顯微術(shù)是一種利用熒光染料固有特性的成像技術(shù)。除了具有特有的發(fā)射光譜外,每個(gè)熒光分子還有特有的壽命,它反映了熒光基團(tuán)在發(fā)射光子之前處于激發(fā)態(tài)的時(shí)間。除了標(biāo)準(zhǔn)的熒光強(qiáng)度測(cè)量外,壽命分析還可以提供其他信息。提高質(zhì)量,熒光壽命成像提供了額外的信息,有助提高共聚焦成像的質(zhì)量。 它非常適合用于區(qū)分熒光發(fā)射光譜重疊的熒光探針,或消除不需要的背景熒光信號(hào)。功能成像,F(xiàn)LIM 是一種用于測(cè)量和量化成像數(shù)據(jù)的重要應(yīng)用。 由于壽命信息與熒光基團(tuán)濃度無(wú)關(guān),因此它非常適合用于功能成像。功能成像超越了傳統(tǒng)的分子樣本位置和濃度記錄,通過該技術(shù)可以進(jìn)一步研究分子功能、相互作用及其環(huán)境。熒光壽命成像的發(fā)展很好地彌補(bǔ)...
熒光壽命成像有什么作用?熒光壽命可以在頻域或者時(shí)間域測(cè)量。時(shí)間域測(cè)量方法涉及用短光脈沖照射樣品(比色皿、細(xì)胞或組織),然后隨時(shí)間測(cè)量發(fā)射強(qiáng)度。FLT由衰減曲線的斜率確定。有幾種熒光檢測(cè)方法可用于壽命測(cè)量,其中時(shí)間相關(guān)單光子計(jì)數(shù)(TCSPC)可實(shí)現(xiàn)簡(jiǎn)單的數(shù)據(jù)收集和增強(qiáng)的定量光子計(jì)數(shù)。頻域方法涉及高頻率入射光的正弦調(diào)制。在該方法中,發(fā)射發(fā)生在與入射光相同的頻率處,并且隨著激發(fā)光兼有相位延遲和振幅的變化(解調(diào))。壽命測(cè)量不需要波長(zhǎng)比率探針來提供眾多分析物的定量測(cè)定。壽命法通過使用光譜位移探針擴(kuò)展了分析物濃度范圍的靈敏度。熒光壽命成像這種技術(shù)相對(duì)較新,涉及到同時(shí)在圖像的每個(gè)像素處確定熒光衰減時(shí)間的空間...
熒光壽命取決于熒光分子所處的微環(huán)境,通過對(duì)樣品熒光壽命的測(cè)量和成像可以定量獲取樣品的功能信息。熒光分子受激發(fā)后發(fā)光,熒光壽命量化了發(fā)光的衰減率。該特征時(shí)間不但取決于特定的熒光團(tuán),還取決于其環(huán)境,分子相互作用影響弛豫過程并改變熒光團(tuán)的壽命。熒光壽命是微環(huán)境的相對(duì)參數(shù),不受環(huán)境吸收、樣本濃度等因素影響,因此能夠?qū)ι锝M織環(huán)境中的 p H 值水平、離子濃度、氧分子濃度等微環(huán)境狀態(tài)進(jìn)行高精度檢測(cè)。熒光壽命顯微成像(FLIM),可以定位不同的分子及濃度分布,在生物,材料,半導(dǎo)體領(lǐng)域具有重要的應(yīng)用價(jià)值。熒光壽命成像可以定量的區(qū)分參與FRET和沒有參與FRET的分子數(shù)量。江蘇分子熒光壽命成像研發(fā)熒光壽命顯微...
熒光壽命成像中的熒光壽命是什么意思?有什么用?假定兩種衰減躍遷速率分別為Γ和knr,則激發(fā)態(tài)衰減速率可表示為:其中n(t)表示時(shí)間t時(shí)激發(fā)態(tài)分子的數(shù)目,由此可得到激發(fā)態(tài)物種的單指數(shù)衰減方程。熒光壽命定義為衰減總速率的倒數(shù):熒光強(qiáng)度正比于衰減的激發(fā)態(tài)分子數(shù),因此可將上式改寫為:其中I0是時(shí)間為零時(shí)的熒光強(qiáng)度,τ為熒光壽命。也就是說熒光強(qiáng)度衰減到初始強(qiáng)度的1/e時(shí)所需要的時(shí)間就是該熒光物種在測(cè)定條件下的熒光壽命。事實(shí)上當(dāng)熒光物質(zhì)被激發(fā)后有些激發(fā)態(tài)分子立即返回基態(tài),有的甚至可以延遲到5倍于熒光壽命時(shí)才返回基態(tài),這樣就形成了實(shí)驗(yàn)測(cè)定的熒光強(qiáng)度衰減曲線。由于熒光壽命成像不受樣品濃度影響具有其他熒光成像技...
熒光壽命成像技術(shù)用于表征DNA壓縮和基因活性。研究團(tuán)隊(duì)發(fā)展了熒光壽命成像技術(shù)(FLIM),表征DNA壓縮的動(dòng)態(tài)過程,克服了以往方法的局限性。研究團(tuán)隊(duì)提出了兩種精確測(cè)量DNA壓縮程度的FLIM分析方法。第一種方法基于加入DNA的熒光探針的熒光壽命與其局部微環(huán)境折射率之間的逆二次方關(guān)系,熒光探針的壽命隨DNA壓縮密度而變化,從而可表征DNA壓縮程度。第二種方法是將熒光標(biāo)記的核苷酸整合到DNA鏈中,通過一種叫做熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)的技術(shù)獲得其熒光壽命值的變化,從而反映出DNA的壓縮程度的動(dòng)態(tài)變化過程。細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果證明,兩種FLIM分析方法都可以成功表征DNA壓縮的動(dòng)態(tài)過程。時(shí)域和頻域技術(shù)在各...
熒光壽命成像技術(shù)是怎么運(yùn)作的?通過建立檢測(cè)到的熒光事件的直方圖來確定壽命??娠@示單指數(shù)或多指數(shù)熒光衰減。數(shù)值曲線擬合表示熒光壽命和振幅(即檢測(cè)到的光子數(shù))。由于FRET減少了供體壽命,因此如果無(wú)FRET的供體壽命已知,就可以量化FRET發(fā)生的程度。該供體壽命τ作為分析FRET樣品的一定參考。因此,F(xiàn)LIM-FRET為內(nèi)部參照—這一特點(diǎn)減少了基于強(qiáng)度測(cè)量FRET時(shí)的很多缺點(diǎn)。由于其熒光壽命是染料的固有特性,因此對(duì)其他不利影響(如光漂白、圖像明暗處理、不同濃度或表達(dá)水平)具有普遍的不變性。使用基于強(qiáng)度的FRET測(cè)量的主要限制是所有可觀察的供體分子都經(jīng)歷FRET的基本假設(shè)。通常情況并非如此。熒光壽命...
用于流場(chǎng)診斷的快速熒光壽命成像系統(tǒng)及方法:熒光壽命成像具有不受染料濃度、不受光漂白、不受樣本厚度和光源噪聲的影響等諸多優(yōu)點(diǎn),通過這一技術(shù)手段可以深入地進(jìn)行功能性測(cè)量,獲取分子構(gòu)象、分子微環(huán)境變化等信息,研究分子間的相互作用。熒光共振能量轉(zhuǎn)移是一種非輻射的,距離依賴的由供體熒光基團(tuán)傳遞能量至受體熒光基團(tuán)的過程,普遍用于蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象變化,蛋白質(zhì)分子間的相互作用,分子間距離的測(cè)量等研究。熒光壽命是熒光分子停留在激發(fā)態(tài)的時(shí)間,是熒光分子的固有性質(zhì),同熒光強(qiáng)度成像相比。在種類繁多的顯微技術(shù)中,熒光壽命顯微成像技術(shù)被普遍地應(yīng)用于生物學(xué)研究及臨床診斷等領(lǐng)域。三維熒光壽命成像哪家便宜熒光成像技術(shù)是一種非侵...
熒光壽命成像如何理解?熒光壽命成像主要通過TCSPC技術(shù)(Time-Correlated Single Photon Counting)實(shí)現(xiàn)。系統(tǒng)采用超短脈寬激光器作為激發(fā)光源,通過光路耦合器,將激光引入顯微光路。激光通過物鏡聚焦照射樣品池,利用光子探測(cè)裝置(PMT)對(duì)熒光信號(hào)進(jìn)行探測(cè),再用TCSPC計(jì)數(shù)器對(duì)每一個(gè)光子進(jìn)行計(jì)數(shù),并將其放入一個(gè)對(duì)應(yīng)的時(shí)間窗口,經(jīng)過一定時(shí)間的統(tǒng)計(jì)疊加后即得到熒光壽命曲線。幾十萬(wàn)次重復(fù)以后,不同的時(shí)間通道累積下來的光子數(shù)目不同。以光子數(shù)對(duì)時(shí)間作圖可得到熒光衰減曲線。實(shí)現(xiàn)從百ps-ns-us的瞬態(tài)測(cè)試。綜上所述由于TCSPC系統(tǒng),一個(gè)激光脈沖只采集一個(gè)光子信號(hào),所以激...
熒光壽命成像是一種什么樣的技術(shù)?是一種新型的熒光成像技術(shù),它能夠?qū)Σ煌N類或處于不同狀態(tài)的生物組織提供更好的對(duì)比度,并反映熒光團(tuán)及其所處微環(huán)境參數(shù)的定量分布。熒光壽命成像一般不受諸如激光或熒光強(qiáng)度擾動(dòng)、熒光染料分布不均勻、染料的光漂白以及其他有礙熒光強(qiáng)度的因素的影響,是熒光光譜分析法的有效補(bǔ)充。超快激光技術(shù),高速、高靈敏度探測(cè)技術(shù),以及圖像處理技術(shù)的發(fā)展,都促進(jìn)了FLIM 技術(shù)的發(fā)展.尤其是將熒光壽命成像和共焦顯微技術(shù)以及多光子激發(fā)熒光顯微技術(shù)結(jié)合,進(jìn)一步拓寬了FLIM在生物學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用范圍。熒光壽命成像不受光漂白的影響。江蘇開放式熒光壽命成像怎么操作熒光壽命檢測(cè)經(jīng)典方法為點(diǎn)對(duì)點(diǎn)的時(shí)間相關(guān)單光...