影響熒光壽命成像測量的因素有哪些?溫度影響:一般說來,熒光隨溫度升高而強(qiáng)度減弱,溫度升高1℃,熒光強(qiáng)度下降1~10%不等。測定時(shí),溫度必須保持恒定。PH值影響:PH 值影響物質(zhì)的熒光,應(yīng)選擇較佳PH制備樣品。光分解對(duì)熒光測定的影響: 熒光物質(zhì)吸收紫外可見光后,發(fā)生光化學(xué)反應(yīng),導(dǎo)致熒光強(qiáng)度下降。因此,熒光分析要采用高靈敏度的檢測器,而不是用增強(qiáng)光源來提高靈敏度。測定時(shí),用較窄的激發(fā)光部分的狹縫,以減弱激發(fā)光。同時(shí),用較寬的發(fā)射狹縫引導(dǎo)熒光。熒光分析應(yīng)盡量在暗環(huán)境中進(jìn)行。熒光壽命成像這種技術(shù)相對(duì)較新,涉及到同時(shí)在圖像的每個(gè)像素處確定熒光衰減時(shí)間的空間分布。熒光壽命成像有潛力應(yīng)用于瘤識(shí)別,病變診斷等領(lǐng)域。開放式熒光壽命成像價(jià)格
熒光壽命成像顯微術(shù)是一種利用熒光染料固有特性的成像技術(shù)。除了具有特有的發(fā)射光譜外,每個(gè)熒光分子還有特有的壽命,它反映了熒光基團(tuán)在發(fā)射光子之前處于激發(fā)態(tài)的時(shí)間。除了標(biāo)準(zhǔn)的熒光強(qiáng)度測量外,壽命分析還可以提供其他信息。提高質(zhì)量,熒光壽命成像提供了額外的信息,有助提高共聚焦成像的質(zhì)量。 它非常適合用于區(qū)分熒光發(fā)射光譜重疊的熒光探針,或消除不需要的背景熒光信號(hào)。功能成像,F(xiàn)LIM 是一種用于測量和量化成像數(shù)據(jù)的重要應(yīng)用。 由于壽命信息與熒光基團(tuán)濃度無關(guān),因此它非常適合用于功能成像。功能成像超越了傳統(tǒng)的分子樣本位置和濃度記錄,通過該技術(shù)可以進(jìn)一步研究分子功能、相互作用及其環(huán)境。湖南植物熒光壽命成像批發(fā)市場上熒光壽命的測量方式可分為時(shí)域法和頻域法。
熒光壽命成像技術(shù)是怎么運(yùn)作的?通過建立檢測到的熒光事件的直方圖來確定壽命??娠@示單指數(shù)或多指數(shù)熒光衰減。數(shù)值曲線擬合表示熒光壽命和振幅(即檢測到的光子數(shù))。由于FRET減少了供體壽命,因此如果無FRET的供體壽命已知,就可以量化FRET發(fā)生的程度。該供體壽命τ作為分析FRET樣品的一定參考。因此,F(xiàn)LIM-FRET為內(nèi)部參照—這一特點(diǎn)減少了基于強(qiáng)度測量FRET時(shí)的很多缺點(diǎn)。由于其熒光壽命是染料的固有特性,因此對(duì)其他不利影響(如光漂白、圖像明暗處理、不同濃度或表達(dá)水平)具有普遍的不變性。使用基于強(qiáng)度的FRET測量的主要限制是所有可觀察的供體分子都經(jīng)歷FRET的基本假設(shè)。通常情況并非如此。
熒光壽命成像主要應(yīng)用領(lǐng)域包括:用于樣品分離,如利用不同染料熒光壽命的差異將不同組織、正常與病變細(xì)胞等有效分離。熒光團(tuán)在光譜上非常相似(max 580 vs 573)無法分離,但它們在熒光壽命上差異明顯。作為生物傳感器,如評(píng)價(jià)藥物/理化條件對(duì)細(xì)胞的影響、Ca+震蕩等。充分拓展了壽光命成像的使用范圍,實(shí)現(xiàn)可相互驗(yàn)證的多維度樣品成像。實(shí)現(xiàn)真正的生物動(dòng)力學(xué)分析和功能成像。熒光壽命成像的發(fā)展很好地彌補(bǔ)了基于強(qiáng)度成像的問題,對(duì)生物醫(yī)學(xué)檢測有著重要的意義。熒光壽命成像可以體現(xiàn)熒光物質(zhì)形貌信息。
熒光壽命成像的優(yōu)勢:通過熒光壽命來進(jìn)行成像,只需要拍攝一次就完成圖像采集,不但減少了成像時(shí)間,而且降低了激光對(duì)樣品的損傷。熒光壽命成像使用簡單,方便快捷,不需要進(jìn)行參數(shù)調(diào)節(jié)。熒光壽命成像提供了壽命分布的二維圖形視圖。熒光壽命是熒光分子在激發(fā)態(tài)停留的時(shí)間,這個(gè)時(shí)間可以反映熒光分子的內(nèi)在屬性和所處的微環(huán)境,是一個(gè)很有用的工具。以往,熒光壽命的測量和計(jì)算是件非常復(fù)雜和耗時(shí)的工作,只有少數(shù)專業(yè)的科學(xué)家關(guān)注和使用該工具。傳統(tǒng)的多色成像實(shí)驗(yàn)根據(jù)光譜差異來設(shè)計(jì),會(huì)有串色等限制,而且需要多次采集圖像,會(huì)造成樣品的光損傷。為什么說熒光壽命成像技術(shù)是先進(jìn)的?汕頭熒光壽命成像哪家實(shí)惠
熒光壽命成像中的熒光壽命是什么意思?開放式熒光壽命成像價(jià)格
熒光壽命成像在生命科學(xué)研究中的應(yīng)用:自發(fā)熒光FLIM被普遍應(yīng)用于非標(biāo)記生物成像領(lǐng)域。所謂自發(fā)熒光,即生物細(xì)胞本身便包含熒光分子,稱為內(nèi)源性熒光分子團(tuán)。FLIM通過對(duì)自發(fā)熒光分子團(tuán)(如NAD(P)H)熒光壽命的考察,可以實(shí)現(xiàn)細(xì)胞代謝的監(jiān)測。這種方案無需人為對(duì)樣品加入熒光試劑便可以發(fā)射熒光,有效減少了熒光染料對(duì)樣品的毒性、熒光分子與樣品的非特異性結(jié)合及染料對(duì)生理性能的干擾影響。外源分子探針FLIM借助于外部熒光染料的注入以產(chǎn)生熒光。如今,為了利用FLIM對(duì)物理?xiàng)l件(包括粘度、溫度、酸度和氧化作用)的敏感性,已經(jīng)開發(fā)出了許多適用于體內(nèi)和體外應(yīng)用的光學(xué)探針。開放式熒光壽命成像價(jià)格
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