熒光壽命是指分子受到光脈沖激發(fā)后返回基態(tài)之前在激發(fā)平均停留的時間，處于激發(fā)態(tài)的熒光分子在從激發(fā)到基態(tài)的過程中發(fā)射熒光釋放能量。熒光壽命取決于熒光分子所處的微環(huán)境，通過對樣品熒光壽命的測量和成像可以定量獲取樣品的功能信息。熒光壽命成像技術(shù)有兩種：時間域和頻率域。（1）時域FLIM：需要脈沖光源，所以一般在雙光子的系統(tǒng)上比較常見FLIM（熒光壽命成像Fluorescence Life-time imaging Microcopy簡稱FLIM）。（2）頻域FLIM：需要一個相位調(diào)制的光源，有用LED調(diào)制的， FLIM對很多研究都有幫助，以下為熒光壽命成像FLIM的應(yīng)用：1）細(xì)胞體自身熒光壽命分析；2）自身熒光相對熒光標(biāo)記的有效區(qū)分；3）具有相同頻譜性質(zhì)的不同熒光標(biāo)記的區(qū)分；4）活細(xì)胞內(nèi)水介質(zhì)的PH值測量；5）局部氧氣濃度測量；6）活細(xì)胞內(nèi)鈣濃度測量；7）時間分辨Forster共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）：納米級尺度上的遠(yuǎn)程測量，環(huán)境敏感的FRET探針定量測量。熒光壽命成像顯微技術(shù)經(jīng)常用于以下領(lǐng)域：分子影像學(xué)、代謝成像、FRET成像、同時進(jìn)行NAD成像。佛山單分子熒光壽命成像使用方法

熒光壽命成像這種技術(shù)相對較新，涉及到同時在圖像的每個像素處確定熒光衰減時間的空間分布。它基于熒光團(tuán)的熒光壽命取決于其分子環(huán)境而并非濃度的事實(shí)。它可以用于無法控制局部探針濃度的熒光顯微鏡中。熒光壽命成像(FLIM)可用于測量分子環(huán)境參數(shù)，通過熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)進(jìn)行的蛋白質(zhì)相互作用，并可以通過細(xì)胞和組織的自發(fā)熒光來測量其代謝狀態(tài)。分子環(huán)境參數(shù)可以通過因熒光淬滅或熒光團(tuán)的構(gòu)象變化而引起的壽命變化來測量。FLIM可用于多種生物應(yīng)用，包括組織表面掃描、組織類型繪圖、光動力治理、DNA芯片分析、皮膚成像等。廣州多色熒光壽命成像怎么操作熒光壽命成像的發(fā)展很好地彌補(bǔ)了基于強(qiáng)度成像的問題，對生物醫(yī)學(xué)檢測有著重要的意義。

熒光成像技術(shù)涉及精確測量已添加到組織中的自然熒光分子或熒光標(biāo)簽的熒光衰減率或壽命。由于壽命取決于分子環(huán)境的特性，如溫度和pH，以及其與周圍分子的相互作用，因此可利用熒光成像技術(shù)獲得有關(guān)分子性質(zhì)及其微環(huán)境的信息。通常，使用激光掃描共聚焦顯微鏡進(jìn)行熒光成像技術(shù)，通過掃描激光束穿過熒光樣品以形成圖像，從而實(shí)現(xiàn)高分辨率。為了在宏觀尺度上獲得熒光成像的信息，研究人員開發(fā)了一種共焦的宏觀系統(tǒng)，該系統(tǒng)結(jié)合了激光和非常短的脈沖，利用只有皮秒的長度和非常靈敏的檢測器來檢測熒光。該系統(tǒng)還包括計算光子的電子器件，并繪制它們相對于激光脈沖和樣品上激光束位置的時間分布。

影響熒光壽命成像測量的因素：高濃度樣品的影響：1）當(dāng)激發(fā)光照射高濃度樣品時，在激發(fā)光入口附近產(chǎn)生熒光，但這些熒光并不能進(jìn)入熒光檢測器。2）高濃度的分子之間相互作用而發(fā)生活性阻礙現(xiàn)象。3）熒光的再吸收：即熒光光譜的短波長端和激發(fā)光譜的長波長端如果相互重疊，則發(fā)生熒光再吸收。熒光壽命成像具有200 nm的空間分辨率和皮秒量級的時間分辨率。散射光的影響： 主要是瑞利散射光和拉曼散射光的影響較大。校正辦法：先用短的激發(fā)光激發(fā)，檢出溶液的拉曼峰，然后進(jìn)行熒光光譜校正。因?yàn)闊晒夤庾V不隨激發(fā)光波長的改變而改變，而拉曼光卻隨之改變。影響熒光壽命成像測量的因素：高濃度樣品，高濃度的分子之間相互作用而發(fā)生活性阻礙現(xiàn)象。

熒光壽命成像的原理：熒光壽命是熒光團(tuán)在發(fā)射熒光光子返回基態(tài)之前保持其激發(fā)態(tài)的平均時間長度。這取決于熒光團(tuán)的分子組成和納米環(huán)境。熒光壽命成像將壽命測量與成像相結(jié)合：對每個圖像像素以測得的熒光壽命進(jìn)行顏色編碼，產(chǎn)生額外的圖像反差。因此，熒光壽命成像可以提供關(guān)于熒光分子空間分布的信息和有關(guān)其生化狀態(tài)或納米環(huán)境的信息。有很多技術(shù)可以在顯微鏡環(huán)境中檢測熒光壽命。常見的的是基于供體（受體光漂白，F(xiàn)RET AB）或受體（敏化發(fā)射，F(xiàn)RET SE）熒光強(qiáng)度的技術(shù)。熒光壽命成像可以用于無法控制局部探針濃度的熒光顯微鏡中。珠海單分子熒光壽命成像費(fèi)用

熒光壽命成像能夠?qū)Σ煌N類或處于不同狀態(tài)的生物組織提供更好的對比度。佛山單分子熒光壽命成像使用方法

熒光壽命成像可以運(yùn)用在哪些地方？熒光壽命成像顯微技術(shù)已在生命科學(xué)領(lǐng)域中得到了普遍的應(yīng)用。成像，擴(kuò)散光學(xué)層析成像，熒光相關(guān)光譜等等。使用我們專有的多維時間相關(guān)單光子計數(shù)技術(shù)（TCSPC），我們的FLIM和TCSPC系統(tǒng)具有超高光子效率的特點(diǎn)。因此，科學(xué)家，醫(yī)生，研究人員和其他用戶能夠進(jìn)行TCSPC FLIM顯微鏡檢查，多波長FLIM，同時FLIM和快速獲取FLIM。生命科學(xué)是我們熒光壽命成像顯微（FLIM）設(shè)備的主要應(yīng)用領(lǐng)域。經(jīng)常用于以下領(lǐng)域：分子影像學(xué)、代謝成像、FRET成像、同時進(jìn)行NAD(P)H和pO2成像。佛山單分子熒光壽命成像使用方法

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