熒光壽命成像如何理解？熒光壽命成像主要通過TCSPC技術(shù)（Time-Correlated Single Photon Counting）實(shí)現(xiàn)。系統(tǒng)采用超短脈寬激光器作為激發(fā)光源，通過光路耦合器，將激光引入顯微光路。激光通過物鏡聚焦照射樣品池，利用光子探測(cè)裝置（PMT）對(duì)熒光信號(hào)進(jìn)行探測(cè)，再用TCSPC計(jì)數(shù)器對(duì)每一個(gè)光子進(jìn)行計(jì)數(shù)，并將其放入一個(gè)對(duì)應(yīng)的時(shí)間窗口，經(jīng)過一定時(shí)間的統(tǒng)計(jì)疊加后即得到熒光壽命曲線。幾十萬(wàn)次重復(fù)以后，不同的時(shí)間通道累積下來(lái)的光子數(shù)目不同。以光子數(shù)對(duì)時(shí)間作圖可得到熒光衰減曲線。實(shí)現(xiàn)從百ps-ns-us的瞬態(tài)測(cè)試。綜上所述由于TCSPC系統(tǒng)，一個(gè)激光脈沖只采集一個(gè)光子信號(hào)，所以激光器的重復(fù)頻率決定了系統(tǒng)的數(shù)據(jù)采集速度。重頻越高，采集速度越快，數(shù)據(jù)信噪比越好。熒光壽命成像具有200 nm的空間分辨率和皮秒量級(jí)的時(shí)間分辨率。上海植物熒光壽命成像制造

紅外熒光壽命成像技術(shù)在生物多重檢測(cè)中的應(yīng)用。相比于熒光強(qiáng)度，熒光壽命的數(shù)值具有很好的穩(wěn)定性，不依賴于生物組織穿透深度。因此可以實(shí)現(xiàn)生物多重成像和量化診斷。該團(tuán)隊(duì)利用能量延遲方法并結(jié)合對(duì)發(fā)光離子濃度的調(diào)控，實(shí)現(xiàn)NIR-II區(qū)單一波長(zhǎng)下熒光壽命三個(gè)量級(jí)以上的精確調(diào)節(jié)。將這種成像方法應(yīng)用于乳腺的精確診斷，其對(duì)標(biāo)志物的定量檢測(cè)結(jié)果與傳統(tǒng)的免疫印跡法和免疫組織化學(xué)法相比有很好的一致性。而相比于后兩者一次只能對(duì)一種標(biāo)志物進(jìn)行檢測(cè)，這種新的時(shí)間維度成像方法可以原位實(shí)現(xiàn)同時(shí)定量多個(gè)標(biāo)記物，并且減少了傳統(tǒng)檢測(cè)方法在組織切片的制作、處理以及評(píng)分過程中所導(dǎo)致結(jié)果的差異性。深圳三維熒光壽命成像研發(fā)熒光壽命成像可用于多種生物應(yīng)用，包括組織表面掃描、組織類型繪圖、光動(dòng)力治理、皮膚成像等。

熒光壽命成像是一種什么樣的技術(shù)？是一種新型的熒光成像技術(shù)，它能夠?qū)Σ煌N類或處于不同狀態(tài)的生物組織提供更好的對(duì)比度，并反映熒光團(tuán)及其所處微環(huán)境參數(shù)的定量分布。熒光壽命成像一般不受諸如激光或熒光強(qiáng)度擾動(dòng)、熒光染料分布不均勻、染料的光漂白以及其他有礙熒光強(qiáng)度的因素的影響,是熒光光譜分析法的有效補(bǔ)充。超快激光技術(shù)，高速、高靈敏度探測(cè)技術(shù)，以及圖像處理技術(shù)的發(fā)展，都促進(jìn)了FLIM 技術(shù)的發(fā)展．尤其是將熒光壽命成像和共焦顯微技術(shù)以及多光子激發(fā)熒光顯微技術(shù)結(jié)合，進(jìn)一步拓寬了FLIM在生物學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用范圍。

熒光壽命成像是熒光基團(tuán)在通過發(fā)射熒光光子返回基態(tài)之前在其激發(fā)態(tài)下保持平均多長(zhǎng)時(shí)間的量度。不同熒光基團(tuán)激發(fā)態(tài)停時(shí)間不同，大多數(shù)生物熒光素的熒光壽命時(shí)間在 0.2 - 20 ns。熒光壽命檢測(cè)經(jīng)典方法為點(diǎn)對(duì)點(diǎn)的時(shí)間相關(guān)單光子計(jì)數(shù)（TCSPC），但由于過去檢測(cè)硬件的局限和復(fù)雜的使用而沒有被普遍地應(yīng)用于科學(xué)研究。隨著技術(shù)的發(fā)展，在顯微鏡視野內(nèi)進(jìn)行超快速全像素?zé)晒鈮勖盘?hào)采集的熒光壽命成像成為可能。熒光壽命成像具有不同于熒光強(qiáng)度成像的眾多優(yōu)點(diǎn)：不受染料濃度的影響，無(wú)論染色或免疫熒光的效率高或低，熒光壽命都能呈現(xiàn)一致的數(shù)據(jù)，這意味著更少的實(shí)驗(yàn)數(shù)量和重復(fù)性更好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。不受光漂白的影響，熒光發(fā)射時(shí)間不受激發(fā)光強(qiáng)度的影響，因此不存在光漂白問題。不受樣本厚度和光源噪聲的影響。隨著技術(shù)的發(fā)展，在顯微鏡視野內(nèi)進(jìn)行超快速全像素?zé)晒鈮勖盘?hào)采集的熒光壽命成像成為可能。

熒光成像技術(shù)涉及精確測(cè)量已添加到組織中的自然熒光分子或熒光標(biāo)簽的熒光衰減率或壽命。由于壽命取決于分子環(huán)境的特性，如溫度和pH，以及其與周圍分子的相互作用，因此可利用熒光成像技術(shù)獲得有關(guān)分子性質(zhì)及其微環(huán)境的信息。通常，使用激光掃描共聚焦顯微鏡進(jìn)行熒光成像技術(shù)，通過掃描激光束穿過熒光樣品以形成圖像，從而實(shí)現(xiàn)高分辨率。為了在宏觀尺度上獲得熒光成像的信息，研究人員開發(fā)了一種共焦的宏觀系統(tǒng)，該系統(tǒng)結(jié)合了激光和非常短的脈沖，利用只有皮秒的長(zhǎng)度和非常靈敏的檢測(cè)器來(lái)檢測(cè)熒光。該系統(tǒng)還包括計(jì)算光子的電子器件，并繪制它們相對(duì)于激光脈沖和樣品上激光束位置的時(shí)間分布。熒光壽命成像圖像中每一個(gè)像素點(diǎn)在phasor圖上都有一個(gè)對(duì)應(yīng)的點(diǎn)。深圳三維熒光壽命成像研發(fā)

熒光壽命成像提供了壽命分布的二維圖形視圖。上海植物熒光壽命成像制造

熒光壽命顯微成像（Fluorescence lifetime imaging microscopy,FLIM）是熒光壽命測(cè)量和熒光顯微技術(shù)的結(jié)合，已普遍應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究和其他領(lǐng)域。FLIM具有高特異性、高靈敏度、可定量測(cè)量微環(huán)境變化和分子間相互作用、不受探針濃度、激發(fā)光強(qiáng)度和光漂白影響等優(yōu)點(diǎn)。在過去的十年中，光學(xué)技術(shù)硬件和軟件、材料科學(xué)和生物醫(yī)學(xué)的迅速發(fā)展，共同促進(jìn)了FLIM技術(shù)及其應(yīng)用的巨大進(jìn)步。盡管經(jīng)過幾十年的技術(shù)發(fā)展，F(xiàn)LIM技術(shù)在實(shí)際應(yīng)用中仍然面臨著一些挑戰(zhàn)，例如：FLIM的成像分辨率也會(huì)受到光衍射的限制，因此，在實(shí)際應(yīng)用中，我們經(jīng)常需要在成像速度、圖像質(zhì)量和微環(huán)境壽命精度之間進(jìn)行權(quán)衡。上海植物熒光壽命成像制造

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