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質(zhì)量好的HE染色

來源: 發(fā)布時(shí)間:2025-05-01

HE染色注意事項(xiàng):1、染色時(shí)調(diào)節(jié)pH值很重要。如果組織塊在福爾馬林中固定時(shí)間長(zhǎng),組織酸化而影響細(xì)胞核著色。因此,要在自來水中沖洗時(shí)間長(zhǎng)一些或在飽和碳酸鋰水溶液中處理10-30min,這樣可以使細(xì)胞核著色較深。染伊紅時(shí)胞漿著色不佳,可在伊紅溶液中滴加1-2滴冰醋酸。2、切片染蘇木精后,分色這一步是關(guān)鍵,應(yīng)在顯微鏡下控制進(jìn)行,一般以細(xì)胞核染色清楚(晰)而細(xì)胞質(zhì)基本無色為佳。如果過分延長(zhǎng)分色時(shí)間將導(dǎo)致染色太淺,應(yīng)重新染色后再行分色。3、切片經(jīng)酒精脫水后,入二甲苯時(shí)可出現(xiàn)白色不透明狀態(tài),此為脫水不徹底,應(yīng)將切片退回?zé)o水酒精,更換酒精、二甲苯,以求徹底脫水與透明。4、在染色過程中不要讓切片干燥,以免切片收縮、變形,影響神經(jīng)元形態(tài)。5、切片從二甲苯取出或進(jìn)入二甲苯前,切片周邊均應(yīng)擦干凈或吸干多余水分。6、***封固時(shí),要用中性樹脂,防止日后褪色,蓋片要選大于組織塊的面積,如漏出一部分不久將會(huì)褪色,所用樹脂濃度要適當(dāng),樹脂封固時(shí)不能有氣泡。HE染色需要哪些材料及實(shí)驗(yàn)步驟。質(zhì)量好的HE染色

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HE染色就是用蘇木精和伊紅對(duì)細(xì)胞內(nèi)的核糖體和細(xì)胞質(zhì)染色的方法。H:Hematoxylin,蘇木精E:Eosin,伊紅蘇木精(Hematoxylin,H)是一種堿染料,可將細(xì)胞核和細(xì)胞內(nèi)核糖體染成藍(lán)紫色,被堿染料染色的結(jié)構(gòu)具有嗜堿。伊紅(,E)是一種酸染料,能將細(xì)胞質(zhì)染成紅色或淡紅色,被酸染料染色的結(jié)構(gòu)具有嗜酸。染色前,須用二甲苯脫去切片中的石蠟,再經(jīng)由高濃度到低濃度酒精,***入蒸餾水,就可染色。 很多細(xì)胞在新生時(shí)期胞漿對(duì)伊紅著色較淡或輕度嗜堿,當(dāng)其衰老時(shí)或發(fā)生退行變則呈現(xiàn)嗜伊紅濃染。 膠原纖維在老化和出現(xiàn)透明變時(shí),伊紅著色由淺變深。湖北結(jié)果客觀的HE染色公司腎臟組織HE染色如何觀察。

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HE染色細(xì)胞核被蘇木精染成鮮明的藍(lán)色,軟骨基質(zhì)、鈣鹽顆粒呈深藍(lán)色,粘液呈灰藍(lán)色。細(xì)胞漿被伊紅染成深淺不同的粉紅色至桃紅色,胞漿內(nèi)嗜酸性顆粒呈反光強(qiáng)的鮮紅色。膠原纖維呈淡粉紅色,彈力纖維呈亮粉紅色,紅血球呈橘紅色,蛋白性液體呈粉紅色。著***況與組織或細(xì)胞的種類有關(guān),也隨其生活周期及病理變化而改變。例如,細(xì)胞在新生時(shí)期胞漿對(duì)伊紅著色較淡或輕度嗜堿,當(dāng)其衰老時(shí)或發(fā)生退行性變則呈現(xiàn)嗜伊紅濃染。膠原纖維在老化和出現(xiàn)透明變性時(shí),伊紅著色由淺變深。

HE染色常見問題:切片染色不均勻,有片狀的弱著**存在答:(1)取材時(shí)組織太厚,固定過久,導(dǎo)致深部組織固定不佳,而表淺組織過度固定,而透明、脫水、浸蠟均是如此,這樣在后期染色時(shí)就會(huì)出現(xiàn)染色不均勻。應(yīng)該將厚的組織剖開固定。(2)制片過程有問題,切片厚薄不一,或者有刀痕,或組織與玻片間存在氣泡。同一張切片厚薄不一,一般都是在制片時(shí),刀片固定不佳或刀片鈍或刀片與組織角度不佳(一般比較好角度為5°)(3)脫蠟前未烘烤,脫蠟時(shí)間過短或脫蠟液使用過久,導(dǎo)致脫蠟不徹底。(4)染色液過少,著色不均勻;或染色時(shí)部分組織干涸而另一部分濕潤(rùn),這樣會(huì)導(dǎo)致組織吸附染料的能力不一。(5)分化不當(dāng)。南京英瀚斯,專業(yè)的病理染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)平臺(tái)。海馬組織HE染色如何觀察。

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HE染色全名蘇木精—伊紅染色法,屬于化學(xué)染色法,其主要依靠蘇木精染液為堿性,主要使細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核糖體著紫藍(lán)色;伊紅為酸性染料,主要使細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞外基質(zhì)中的成分著紅色。實(shí)驗(yàn)過程:1、石蠟切片脫蠟至水:依次將切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-無水乙醇Ⅰ5min-無水乙醇Ⅱ5min-75%酒精5min,自來水洗。2、蘇木素染色:切片入蘇木素染液染3-5min,自來水洗,分化液分化,自來水洗,返藍(lán)液返藍(lán),流水沖洗。3、伊紅染色:切片依次入85%、95%的梯度酒精脫水各5min,入伊紅染液中染色5min。4、脫水封片:切片依次放入無水乙醇I5min-無水乙醇II5min-無水乙醇Ⅲ5min-二甲Ⅰ5min-二甲苯Ⅱ5min透明,中性樹膠封片。5、顯微鏡鏡檢,圖像采集分析。結(jié)果判讀:細(xì)胞核呈藍(lán)色,細(xì)胞質(zhì)呈紅色比較基礎(chǔ)的病理染色HE染色。遼寧推薦的HE染色

冰凍切片是否可以做HE染色?質(zhì)量好的HE染色

HE染色多聚甲醛保存組織的注意事項(xiàng):多聚甲醛放置過久其中的醛基可能會(huì)被氧化為酸,使溶液pH降低,從而影響染色。不同細(xì)胞或組織樣品所需的固定時(shí)間有所不同,應(yīng)當(dāng)根據(jù)細(xì)胞或組織的種類以及組織塊的大小來調(diào)整固定時(shí)間。多聚甲醛雖然作用溫和,但能硬化組織,固定時(shí)間過久會(huì)導(dǎo)致組織變脆,切片時(shí)易碎。因此固定時(shí)間通常不宜超過24小時(shí)。多聚甲醛可長(zhǎng)期存在于固定過的細(xì)胞或組織樣品中,固定完成后用適當(dāng)?shù)南礈煲夯蛩疀_洗數(shù)小時(shí)仍會(huì)有殘留,因此后續(xù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果如果受醛基影響,須盡量洗去殘留的多聚甲醛。醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基,使抗原決定簇的三維構(gòu)象出現(xiàn)空間障礙。分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)可能部分或完全掩蓋某些抗原決定簇,使之不能充分暴露,可造成假陰性的染色,影響免疫組化結(jié)果。因此,4%多聚甲醛固定的細(xì)胞或組織樣品在進(jìn)行免疫組化檢測(cè)時(shí),有時(shí)需要對(duì)抗原先進(jìn)行修復(fù),然后才能進(jìn)行免疫染色等后續(xù)操作。質(zhì)量好的HE染色