熒光壽命成像技術(shù)（Fluorescence Lifetime ImagingMicroscopy，F(xiàn)LIM）是一種在顯微尺度下展現(xiàn)熒光壽命空間分布的技術(shù)，由于其不受樣品濃度影響，具有其他熒光成像技術(shù)無法代替的優(yōu)異性能，目前在生物醫(yī)學(xué)工程、光電半導(dǎo)體材料等領(lǐng)域是一種重要的表征測量手段。熒光和熒光壽命：分子包含多個單能態(tài)S0、S1、S2…和三重態(tài)T1…，每個能態(tài)都包含多個精細(xì)的能級。正常情況下，大部分電子處在*低能態(tài)即基態(tài)S0 的*低能級上，當(dāng)分子被光束照射，會吸收光子能量，電子被激發(fā)到更高的能態(tài)S1 或S2 上，在S2 能態(tài)上的電子只能存在很短暫的時間，便會通過內(nèi)轉(zhuǎn)換過程躍遷到S1 上，而S1 能態(tài)上的電子亦會在極短時間內(nèi)躍遷到S1 的*低能級上，而這些電子會存在一段時間后通過震蕩弛豫輻射躍遷到基態(tài)，這個過程會釋放一個光子，即熒光。此外，亦會有電子躍遷至三重態(tài)T1 上，再由T1 躍遷至基態(tài)，我們稱之為磷光。熒光壽命成像可以提供熒光強(qiáng)度（光子數(shù)）和光子壽命的空間分布。上海多色熒光壽命成像好不好

熒光壽命(FLT)是熒光團(tuán)在發(fā)射光子并返回基態(tài)之前花費(fèi)在激發(fā)態(tài)的時間。根據(jù)熒光基團(tuán)的不同，F(xiàn)LT可以從皮秒到數(shù)百納秒不等。熒光團(tuán)群的壽命是指經(jīng)熒光或非輻射過程的能量損失后，激發(fā)態(tài)分子數(shù)量以指數(shù)方式衰減到原始數(shù)量的N / e（36.8％）的時間。熒光壽命是熒光團(tuán)的固有屬性。FLT不依賴于熒光團(tuán)濃度、樣品吸收、樣品厚度、測量方法、熒光強(qiáng)度、光漂白和/或激發(fā)強(qiáng)度。它受外部因素影響，如溫度、極性和熒光淬滅劑的存在。熒光壽命對依賴于熒光團(tuán)結(jié)構(gòu)的內(nèi)部因素敏感。佛山植物熒光壽命成像價格熒光壽命成像具有不同于熒光強(qiáng)度成像的眾多優(yōu)點(diǎn)；

在基于時間相關(guān)單光子計數(shù)的熒光壽命成像實(shí)驗(yàn)中，通過選用超快激光器可以優(yōu)化脈沖持續(xù)時間，單光子探測器和時間數(shù)字轉(zhuǎn)換器的時間抖動則成為制約時間分辨率的關(guān)鍵參數(shù)。熒光壽命成像可進(jìn)行高質(zhì)量的多色成像實(shí)驗(yàn)或?qū)崿F(xiàn)STED、PALM/STORM等超分辨率熒光顯微成像。目前TCSPC是主要應(yīng)用的熒光壽命測定技術(shù)。熒光壽命通常在ps～us量級，在如此短的時間量級上進(jìn)行測量，它是較為成熟準(zhǔn)確的測試手段。TCSPC的工作原理是使用一個同步信號源驅(qū)動激光器，出射光脈沖照射樣品池，在利用光子探測裝置（多為PMT）對熒光信號進(jìn)行探測，每一個光子計數(shù)信號在FT1010中都會落入一個對應(yīng)的時間窗口，經(jīng)過一定時間的統(tǒng)計疊加后即得到熒光壽命曲線。幾十萬次重復(fù)以后，不同的時間通道累積下來的光子數(shù)目不同。

熒光壽命成像和生物發(fā)光的異同點(diǎn)是什么？生物發(fā)光與熒光壽命成像不同點(diǎn)：產(chǎn)生光子的原理不同，類似于我們都是通過肉眼去觀察螢火蟲和發(fā)光水母一樣，生物發(fā)光與熒光成像在本質(zhì)上，都是機(jī)體中特定的細(xì)胞或材料發(fā)出光子，被高靈敏度的CCD檢測到形成圖像，但是生物發(fā)光與熒光壽命成像產(chǎn)生光子的過程和機(jī)制是完全不同的。生物發(fā)光與熒光成像相同點(diǎn)：都需要對細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記。生物發(fā)光產(chǎn)生的光子和熒光壽命成像產(chǎn)生的光子都可以被高靈敏的CCD檢測并形成圖像，就像一個人的眼睛就可以既看到螢火蟲又可以看到發(fā)光水母一樣。除此之外，生物發(fā)光和熒光壽命成像都需要對目標(biāo)細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記，讓細(xì)胞產(chǎn)生熒光素酶或者熒光蛋白。熒光壽命顯微成像是熒光壽命測量和熒光顯微技術(shù)的結(jié)合。

熒光壽命成像FLIM所面臨的挑戰(zhàn)：在數(shù)據(jù)處理上，由于曲線擬合迭代過程的需求，計算成本較其他成像方案更高。在成像原理上，熒光壽命受多種外界因素影響，這些因素包括分子相互作用、pH值、溫度和粘滯阻力等，很難對這些參數(shù)控制變量，使得測量熒光壽命存在交叉干擾問題。此外，與普通光學(xué)顯微技術(shù)類似，介質(zhì)光散射影響成像信噪比及空間分辨率，成像深度受到限制。FLIM已經(jīng)在系統(tǒng)裝置、熒光探針和數(shù)據(jù)處理算法等方面得到了較快的發(fā)展，這也使得熒光壽命成像FLIM在對細(xì)胞微環(huán)境成像和生物代謝監(jiān)測發(fā)揮出不可替代的作用。結(jié)合多種先進(jìn)成像系統(tǒng)，如雙光子成像、結(jié)構(gòu)光照明等，可進(jìn)一步提升熒光壽命成像FLIM的分辨率和測量精度。另一方面，提升熒光壽命解調(diào)的算法性能，將壓縮感知、深度學(xué)習(xí)等熱點(diǎn)算法與FLIM結(jié)合，也同樣對FLIM的發(fā)展起著至關(guān)重要的作用?？偟膩碚f，熒光壽命成像FLIM的發(fā)展很好地彌補(bǔ)了基于強(qiáng)度成像的問題，對生物醫(yī)學(xué)檢測有著重要的意義。熒光壽命取決于熒光分子所處的微環(huán)境，通過對樣品熒光壽命的測量和成像可以定量獲取樣品的功能信息。湖南多色熒光壽命成像售價

熒光壽命成像主要通過TCSPC技術(shù)實(shí)現(xiàn)。上海多色熒光壽命成像好不好

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