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熒光壽命(FLT)是熒光團(tuán)在發(fā)射光子并返回基態(tài)之前花費(fèi)在激發(fā)態(tài)的時(shí)間。根據(jù)熒光基團(tuán)的不同,F(xiàn)LT可以從皮秒到數(shù)百納秒不等。熒光團(tuán)群的壽命是指經(jīng)熒光或非輻射過程的能量損失后,激發(fā)態(tài)分子數(shù)量以指數(shù)方式衰減到原始數(shù)量的N / e(36.8%)的時(shí)間。熒光壽命是熒光團(tuán)的固有屬性。FLT不依賴于熒光團(tuán)濃度、樣品吸收、樣品厚度、測(cè)量方法、熒光強(qiáng)度、光漂白和/或激發(fā)強(qiáng)度。它受外部因素影響,如溫度、極性和熒光淬滅劑的存在。熒光壽命對(duì)依賴于熒光團(tuán)結(jié)構(gòu)的內(nèi)部因素敏感。隨著技術(shù)的發(fā)展,在顯微鏡視野內(nèi)進(jìn)行超快速全像素?zé)晒鈮勖盘?hào)采集的熒光壽命成像成為可能。重慶多色熒光壽命成像哪個(gè)品牌好
熒光分析和成像技術(shù)因具有非常高的靈敏度和分子特異性而普遍的應(yīng)用于生物物理、生物化學(xué)、醫(yī)學(xué)、物理、化學(xué)等領(lǐng)域,利用熒光光譜技術(shù)和熒光顯微技術(shù)可以分析樣品中熒光團(tuán)的組分和分布。不過,由于熒光分析技術(shù)大多是基于熒光強(qiáng)度的測(cè)量,容易受到激發(fā)光強(qiáng)度、樣品濃度淬滅、熒光染料的分布濃度等因素的影響。熒光壽命通常來講是一定的,不受激發(fā)光強(qiáng)度、熒光團(tuán)濃度等因素的影響,只只與熒光團(tuán)所處的微環(huán)境有關(guān),因此,利用熒光壽命顯微鏡(Fluorescence lifetime imaging microscopy, FLIM)對(duì)樣品進(jìn)行熒光壽命成像,可以對(duì)樣品所在的微環(huán)境中的許多物理參數(shù)如氧壓、溶液疏水性等及生物化學(xué)參數(shù)如pH值、離子濃度等進(jìn)行定量測(cè)量。此外,熒光壽命成像技術(shù)還可以同時(shí)獲得分子狀態(tài)和空間分布的信息。福建熒光壽命成像哪個(gè)品牌好熒光壽命成像不受染料濃度的影響;
熒光壽命成像顯微術(shù)(FLIM)是一種利用熒光染料固有特性的成像技術(shù)。除了具有特有的發(fā)射光譜外,每個(gè)熒光分子還有特有的壽命,它反映了熒光基團(tuán)在發(fā)射光子之前處于激發(fā)態(tài)的時(shí)間。除了標(biāo)準(zhǔn)的熒光強(qiáng)度測(cè)量外,壽命分析還可以提供其他信息。過去,壽命成像一直是一種緩慢、復(fù)雜的專業(yè)化技術(shù)。只有經(jīng)驗(yàn)豐富的顯微鏡**或物理學(xué)家才會(huì)使用這種技術(shù)。熒光壽命成像提供了額外的信息,有助提高共聚焦成像的質(zhì)量。它非常適合用于區(qū)分熒光發(fā)射光譜重疊的熒光探針,或消除不需要的背景熒光信號(hào)。
熒光顯微技術(shù)具有無損、非接觸、高特異性、高靈敏、高體友好以及能夠提供功能信息等突出優(yōu)點(diǎn),一直是生命科學(xué),尤其是細(xì)胞生物學(xué)研究的重要工具。近年來,隨著生命科學(xué)的發(fā)展,對(duì)熒光顯微技術(shù)也提出了越來越高的要求,激光技術(shù)、熒光探針標(biāo)記技術(shù)、新型熒光探測(cè)技術(shù)和成像手段的不斷發(fā)展,極大地促進(jìn)了熒光顯微技術(shù)的發(fā)展,成為推動(dòng)生命科學(xué)發(fā)展的重要?jiǎng)恿Α4送?,熒光顯微技術(shù)也在成像的對(duì)比機(jī)制方面獲得了很大的進(jìn)展。超分辨(SR)成像技術(shù)的發(fā)展,也為熒光壽命成像(FLIM)的新發(fā)展提供了巨大的機(jī)遇。熒光壽命成像技術(shù)有兩種:時(shí)間域和頻率域。
熒光壽命成像可以應(yīng)用到個(gè)性化化療:要針對(duì)患者所患的特殊病癥,找到較有效的抗病藥物至關(guān)重要。但是,病細(xì)胞對(duì)不同類型藥物的反應(yīng)并不是完全可預(yù)測(cè)的。因此,進(jìn)行活檢,將細(xì)胞培養(yǎng)并用不同的藥物處理。同時(shí),它們被FLIM重復(fù)成像。熒光壽命表明治理后細(xì)胞代謝狀態(tài)的早期改變。因此,通過這些測(cè)量,只需幾天即可確定較有效的藥物。熒光壽命成像將時(shí)域多指數(shù)衰減分析與相量圖相結(jié)合。時(shí)域中熒光衰減的測(cè)量需要短的激發(fā)脈沖和快速的檢測(cè)電路。樣品中的每個(gè)點(diǎn)都被依次激勵(lì)。使用時(shí)域方法,壽命是從對(duì)衰減數(shù)據(jù)的指數(shù)擬合得出的。熒光壽命成像通常用于研究生物分子間相互作用、細(xì)胞中的信號(hào)事件或區(qū)分光譜重疊的熒光團(tuán)。廣東分子熒光壽命成像多少錢
熒光壽命成像可以提供有關(guān)電信號(hào)變化、離子和氧含量、溫度、細(xì)胞或其環(huán)境中的 pH 值的定量信息。重慶多色熒光壽命成像哪個(gè)品牌好
在使用TCSPC測(cè)量熒光壽命的過程中,需要調(diào)節(jié)樣品的熒光強(qiáng)度,確保每次激發(fā)后較多只有一個(gè)熒光光子到達(dá)終止光電倍增管。TCSPC方法的突出優(yōu)點(diǎn)是靈敏度高、測(cè)量結(jié)果準(zhǔn)確、系統(tǒng)誤差小。采用該技術(shù)對(duì)樣品進(jìn)行熒光壽命成像時(shí),必須逐點(diǎn)測(cè)量樣品的熒光壽命,而每一點(diǎn)的測(cè)量時(shí)間又比較長,因此,通常認(rèn)為該技術(shù)不太適合熒光壽命測(cè)量。不過,近年來,隨著TCSPC技術(shù)和固體超快激光技術(shù)的發(fā)展,TCSPC技術(shù)已具備快速測(cè)量熒光壽命的條件。通過與激光共聚焦顯微鏡的結(jié)合,可以對(duì)樣品進(jìn)行熒光壽命成像的測(cè)量。重慶多色熒光壽命成像哪個(gè)品牌好
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