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RNA提?。?.凍存細(xì)胞與新鮮細(xì)胞的RNA提取有區(qū)別嗎?具體該怎么操作?新鮮細(xì)胞與凍存細(xì)胞RNA提取沒什么區(qū)別。千萬不能等細(xì)胞溶解了存狀態(tài)把Trizol直接加到凍存管了,一起化開,振蕩振蕩就可以了。與從組織中提RNA差不多。2.RNA得率低:該組織或者細(xì)胞中R...
DNA試劑盒使用注意事項:保存試劑:DNA試劑盒中的試劑和材料需要保存在適當(dāng)?shù)臏囟认?。例如某些試劑需要保存在低溫下,避免受到光照、高溫等影響。注意質(zhì)控:在使用DNA試劑盒的過程中,需要進行質(zhì)控。質(zhì)控的目的是確保提取和純化所得的DNA質(zhì)量合格。例如可以進行PCR...
通過對外泌體以及外泌體提取相關(guān)生物試劑的研究發(fā)現(xiàn):外泌體除了蛋白質(zhì),外泌體還含有RNA。外泌體miRNA可用于各種疙瘩的判斷。目前有八種miRNA被確定為卵巢病的標(biāo)志物。此外,據(jù)報道,肺腺病者的血清和疙瘩樣本中的miRNA會增加。前列腺病的血清中外泌體miRN...
外泌體分離方法之沉淀分離方法::基于聚合物的沉淀分離方法是利用超親水聚合物來增強小尺寸顆粒(如外泌體)的沉淀。聚乙二醇的常用濃度在8%到15%之間變化。使用這種方法,將含有外泌體的溶液與聚合物一起孵育過夜,并在約10,000×g下進一步離心。外泌體分離方法之F...
逆轉(zhuǎn)錄酶實驗流程:從細(xì)胞材料中提取RNA→RNA加入到含有逆轉(zhuǎn)錄酶、引物、dNTPs的反應(yīng)體系中→退火,引物與RNA鏈配對→延伸,逆轉(zhuǎn)錄酶合成互補cDNA鏈變性→常規(guī)PCR反應(yīng)流程(變性、退火、延伸,如此多次循環(huán))。RT-PCR“兩步法”與“一步法”RT-PC...
DNA提取的原則:1.保證核酸一級結(jié)構(gòu)的完整性;2.核酸樣品中不應(yīng)存在對酶有抑制作用的有機溶劑和過高濃度的金屬離子;3.其他生物大分子如蛋白質(zhì)、多糖和脂類分子的污染應(yīng)降低到較低程度;4.其他核酸分子,如RNA,也應(yīng)盡量去除。DNA提取的樣品準(zhǔn)備:生物組織:一....
DNA提取需要顯微鏡。顯微鏡可以用于觀察和評估提取過程中的樣品。通過顯微鏡,科學(xué)家們可以檢查細(xì)胞破碎的程度、DNA的純度和濃度等指標(biāo)。這些信息對于后續(xù)實驗的設(shè)計和分析非常重要。除了特殊的實驗室設(shè)備,DNA提取需要一系列特殊的試劑。其中較重要的試劑是蛋白酶K。蛋...
骨組織RNA提取方法及步驟:適用于快速提取骨組織細(xì)胞總RNA,使用獨有基因組DNA清理柱技術(shù)可有效清理電泳可見gDNA殘留,RNA可用于反轉(zhuǎn)錄PCR,熒光定量PCR等。骨組織堅硬、骨細(xì)胞密度低、而且外周基質(zhì)含有大量黏蛋白(蛋白多糖)和RNA難以分離,無法用傳統(tǒng)...
當(dāng)外泌體在1983年頭次被發(fā)現(xiàn)后,其被認(rèn)為是細(xì)胞排泄廢物的一種方式,如今隨著大量對其生物來源、其物質(zhì)構(gòu)成及運輸、細(xì)胞間信號的傳導(dǎo)以及在體液中的分布的研究發(fā)現(xiàn)外泌體具有多種多樣的功能。外泌體的功能取決于其所來源的細(xì)胞類型,其可參與到機體免疫應(yīng)答、抗原提呈、細(xì)胞遷...
人體中也有逆轉(zhuǎn)錄過程,比如端粒的復(fù)制。端粒(telomere)是染色體末端的特殊結(jié)構(gòu),由重復(fù)的DNA序列(TTAGGG)和核的蛋白組成,可以保護染色體末端,維持基因組完整性。端粒的末端是單鏈3'末端,形成一種緊湊的T環(huán)結(jié)構(gòu),可保持其穩(wěn)定性。其表面覆蓋著Shel...
為了正確使用外泌體作為DDS,我們必須考慮外泌體的成分和它們的形成途徑。然后,還應(yīng)描述外泌體親和力和細(xì)胞攝取的特征。外泌體載體表現(xiàn)出不同的目的和功能,這要歸功于外泌體作為基本的轉(zhuǎn)運體本身就具有出色的特性。這可以用于細(xì)胞靶向,也可以作為藥物的額外增強。迄今為止,...
在RNA提取中,異丙醇用于將RNA分子從酚/氯仿上層水相中沉淀下來。異丙醇通過改變RNA和水之間的相互作用力,使RNA分子凝聚成小顆粒,并沉淀到管底。較后,RNA提取需要使用一種稱為乙醇的有機溶劑。乙醇是一種用于洗滌和純化RNA分子的溶劑。在RNA提取中,乙醇...
現(xiàn)在都有哪些類型的試劑盒?首先是按檢測原理區(qū)分,主流的有生化試劑、免疫試劑和分子試劑。首先生化試劑的原理一般是按待測物質(zhì)的生化性質(zhì),與試劑組分發(fā)生化學(xué)反應(yīng)(也有如酶催化化學(xué)反應(yīng)的生化反應(yīng);但是生化試劑中也包含以抗原-抗體反應(yīng)為原理的免疫比濁試劑),然后根據(jù)生化...
RT-PCR就是逆轉(zhuǎn)錄PCR或稱為反轉(zhuǎn)錄PCR(Reversetranscription-PCR,RT-PCR),是以RNA為材料應(yīng)用于PCR擴增中的一種實驗方法。首先通過逆轉(zhuǎn)錄酶將總RNA或信使RNA(mRNA)轉(zhuǎn)錄成互補DNA(cDNA)。其次TaqDNA...
差速離心法分離外泌體的實驗原理:離心管內(nèi)粒子的速度,由三種力(離心力、阿基米德浮力和斯托克斯粘性阻力)的平衡決定,如:其中g(shù)eff為離心力(加速度),R為旋轉(zhuǎn)半徑,即粒子距旋轉(zhuǎn)軸的距離,ω為旋轉(zhuǎn)角頻率,d為粒子直徑,ρ為質(zhì)量粒子的密度和ρsolv和η分別是介質(zhì)...
反轉(zhuǎn)錄酶(reversetranscriptase,也可寫成逆轉(zhuǎn)錄酶)又稱為依賴RNA的DNA聚合酶。1970年Temin等在致死RNA病毒中發(fā)現(xiàn)了一種特殊的DNA聚合酶,該酶以RNA為模板,以dNTP為底物,tRNA(主要是色氨酸t(yī)RNA)為引物,在tRNA...
逆轉(zhuǎn)錄酶的合成步驟:1、使用前每個組份輕輕混勻,然后2000rpm離心20s;2、取滅過菌且無核酸酶的0.2ml離心管,依次加入2~5μgRNAnμL;3、65℃保溫5min,然后冰浴5min;4、往3步驟中的0.2ml離心管依次加入下列組份:RNase抑制劑...
細(xì)胞外泌體的來源和表征方法:細(xì)胞外泌體是直徑為30-150nm的血管外囊泡亞群。在過去的20年里,科學(xué)家已經(jīng)從包括正常細(xì)胞和病細(xì)胞在內(nèi)的許多細(xì)胞類型中分離出外泌體,并且研究了它們對其他細(xì)胞的影響。外泌體是由多種大分子組成,例如核酸、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)。細(xì)胞外泌體具有...
外泌體的提取主要包括以下幾種方式:一是色譜法,這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一,但是需要特殊的設(shè)備,應(yīng)用不普遍。二是微流控分離法,該方法通過負(fù)壓及震蕩等機械原理分離外泌體,產(chǎn)量純度均具有較大幅度提高,但需要特定設(shè)備配合。外泌體分離方法之納米粒徑分析法:確...
外泌體的分離方法:目前,有許多可用的外泌體分離方法。比較傳統(tǒng)的外泌體分離方法是超速離心,許多人將其視為金標(biāo)準(zhǔn)。其他技術(shù)主要基于大小排阻或抗體介導(dǎo)的標(biāo)記外泌體分離。每種分離方法在純度、數(shù)量、效率和通量方面都不同。超速離心法分離法的缺點是外泌體結(jié)構(gòu)容易發(fā)生改變,造...
RNA提取需要使用超聲波破碎儀。超聲波破碎儀是一種利用超聲波振蕩原理將細(xì)胞或組織破碎的設(shè)備。在RNA提取中,超聲波破碎儀用于破壞細(xì)胞或組織的細(xì)胞壁和細(xì)胞膜,釋放內(nèi)部的RNA分子。超聲波破碎儀通過將樣品暴露在高頻率的超聲波中,產(chǎn)生強烈的機械剪切力,從而破碎細(xì)胞結(jié)...
RNA提取是分子生物學(xué)研究中的重要步驟之一,它可以用于許多實驗技術(shù),如逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)、實時定量PCR(qPCR)、Northern印跡、原位雜交等。在RNA提取后,正確的保存和儲存方法對于后續(xù)實驗的成功至關(guān)重要。這里將介紹RNA提取后如何保...
外泌體來源及其釋放途徑:外泌體在人體的主要作用是充當(dāng)局部和全身信號和調(diào)節(jié)系統(tǒng)。外泌體(直徑30-150nm)是較小的血管外囊泡亞群,它的還包括微泡(50nm-1μm)和凋亡小體(50nm-5μm)。外泌體的來源是內(nèi)體系統(tǒng)。由內(nèi)膜出芽形成早期核內(nèi)體,早期內(nèi)體可以...
外泌體衍生物miRNA的重要應(yīng)用:miRNA是一類主要的小分子、單鏈、非編碼RNA分子,其成熟形式的長度在20到22個核苷酸(NT)之間,在幾乎所有生物途徑中發(fā)揮重要作用,包括細(xì)胞生長、增殖、分化、免疫反應(yīng),細(xì)胞凋亡,代謝和疙瘩發(fā)生。外泌體在體液中的主要作用是...
RNA逆轉(zhuǎn)錄實驗注意事項:防止RNA模板的降解:毫無疑問,RNA質(zhì)量對cDNA合成結(jié)果會產(chǎn)生重要影響。但RNA很脆弱,易于降解。為了保證RNA的完整性,我們需要小心又小心,比如在冰上操作,用RNase-free的頭頭和離心管,減少操作時間等。在反應(yīng)體系中加入R...
樣本的保存和處理會影響RNA提取的結(jié)果。樣本應(yīng)在收集后盡快進行處理,以防止RNA的降解。對于細(xì)胞和組織樣本,我們可以使用RNA保護劑來穩(wěn)定RNA,并在低溫條件下保存樣本。對于體液樣本,我們可以使用RNA保護劑或冷凍保存樣本??偨Y(jié)起來,RNA提取所需的樣本類型和...
逆轉(zhuǎn)錄的作用:除了病毒外,逆轉(zhuǎn)錄還在其他方面發(fā)揮了重要的作用。例如,在一些動物體內(nèi),逆轉(zhuǎn)錄過程會導(dǎo)致基因的重組。這種重組可以使新的基因產(chǎn)生,從而使動物產(chǎn)生新的特征。此外,逆轉(zhuǎn)錄還可以作為某些基因的調(diào)節(jié)機制,從而控制基因的表達(dá)和功能。逆轉(zhuǎn)錄的研究一直是生物學(xué)領(lǐng)域...
DNA檢測試劑盒的原理:細(xì)胞核染色質(zhì)DNA斷裂是細(xì)胞凋亡的標(biāo)志特征。在細(xì)胞發(fā)生凋亡時,核酸內(nèi)切酶被開啟,選擇性降解染色質(zhì)DNA,形成50-300kb的大片段,并進而在核小體連接處斷裂,形成180-200bp或其整倍數(shù)的DNA的片段,這些DNA的片段可從細(xì)胞中提...
逆轉(zhuǎn)錄酶(M-MLV)從MoloneyMurineLeukemiaVirus分離出來,可用于合成首先鏈cDNA、制作cDNA探針、RNA轉(zhuǎn)錄、測序和RNA的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。本酶是通過點突變使RNaseH活性缺失,所以它具有的DNA聚合酶的活性與野生型相同,同時其延...
外泌體的表征分析:Zeta電位:通過電泳光散射(ELS)測量的Zeta電位測量粒子在電泳場中的速度。Zeta電位是膠體分散體穩(wěn)定性的指標(biāo)(非常值)和囊泡表面電荷的量度(+或-符號)。電子顯微鏡分析:對于電子顯微鏡分析,外泌體制劑在PBS緩沖液中按1:10稀釋,...