熒光壽命成像如何理解?熒光壽命成像主要通過TCSPC技術(shù)(Time-Correlated Single Photon Counting)實現(xiàn)。系統(tǒng)采用超短脈寬激光器作為激發(fā)光源,通過光路耦合器,將激光引入顯微光路。激光通過物鏡聚焦照射樣品池,利用光子探測裝置(PMT)對熒光信號進行探測,再用TCSPC計數(shù)器對每一個光子進行計數(shù),并將其放入一個對應(yīng)的時間窗口,經(jīng)過一定時間的統(tǒng)計疊加后即得到熒光壽命曲線。幾十萬次重復(fù)以后,不同的時間通道累積下來的光子數(shù)目不同。以光子數(shù)對時間作圖可得到熒光衰減曲線。實現(xiàn)從百ps-ns-us的瞬態(tài)測試。綜上所述由于TCSPC系統(tǒng),一個激光脈沖只采集一個光子信號,所以激光器的重復(fù)頻率決定了系統(tǒng)的數(shù)據(jù)采集速度。重頻越高,采集速度越快,數(shù)據(jù)信噪比越好。熒光成像在疾病診斷,藥物分布和代謝評估以及血管生物成像中得到了普遍的應(yīng)用。深圳動物熒光壽命成像訂購
熒光壽命成像技術(shù)是如何應(yīng)用在生物醫(yī)學(xué)中的?隨著近年來對蛋白及分子功能研究的不斷深入,科研工作者除對多色成像、鈣成像等功能成像的需求日漸增多之外,對熒光壽命成像的需求也逐漸增加,而熒光壽命成像能提供除熒光強度、熒光光譜信息之外的熒光分子的壽命信息,可用于分子間相互作用(FRET)、分子所處微環(huán)境的離子濃度(如Ca2+、pH)及細胞代謝水平的改變等測量,并可拆分光譜重疊的熒光染料及染料和自發(fā)熒光,還可以結(jié)合熒光相關(guān)光譜對單分子實現(xiàn)熒光壽命相關(guān)光譜FLCS的測量。熒光壽命成像擴展了傳統(tǒng)熒光成像的維度,是功能成像的理想工具,在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域有廣闊的應(yīng)用前景。北京生物熒光壽命成像好不好熒光壽命通常來講是一定的,不受激發(fā)光強度、熒光團濃度等因素的影響。
熒光壽命成像主要應(yīng)用領(lǐng)域包括:用于樣品分離,如利用不同染料熒光壽命的差異將不同組織、正常與病變細胞等有效分離。熒光團在光譜上非常相似(max 580 vs 573)無法分離,但它們在熒光壽命上差異明顯。作為生物傳感器,如評價藥物/理化條件對細胞的影響、Ca+震蕩等。充分拓展了壽光命成像的使用范圍,實現(xiàn)可相互驗證的多維度樣品成像。實現(xiàn)真正的生物動力學(xué)分析和功能成像。熒光壽命成像的發(fā)展很好地彌補了基于強度成像的問題,對生物醫(yī)學(xué)檢測有著重要的意義。
熒光壽命是指分子受到光脈沖激發(fā)后返回基態(tài)之前在激發(fā)平均停留的時間,處于激發(fā)態(tài)的熒光分子在從激發(fā)到基態(tài)的過程中發(fā)射熒光釋放能量。熒光壽命取決于熒光分子所處的微環(huán)境,通過對樣品熒光壽命的測量和成像可以定量獲取樣品的功能信息。熒光壽命成像技術(shù)有兩種:時間域和頻率域。(1)時域FLIM:需要脈沖光源,所以一般在雙光子的系統(tǒng)上比較常見FLIM(熒光壽命成像Fluorescence Life-time imaging Microcopy簡稱FLIM)。(2)頻域FLIM:需要一個相位調(diào)制的光源,有用LED調(diào)制的, FLIM對很多研究都有幫助,以下為熒光壽命成像FLIM的應(yīng)用:1)細胞體自身熒光壽命分析;2)自身熒光相對熒光標(biāo)記的有效區(qū)分;3)具有相同頻譜性質(zhì)的不同熒光標(biāo)記的區(qū)分;4)活細胞內(nèi)水介質(zhì)的PH值測量;5)局部氧氣濃度測量;6)活細胞內(nèi)鈣濃度測量;7)時間分辨Forster共振能量轉(zhuǎn)移(FRET):納米級尺度上的遠程測量,環(huán)境敏感的FRET探針定量測量。熒光壽命不受熒光探針的濃度的影響,可排除納米材料的胞吐分化導(dǎo)致的納米顆粒的稀釋等對測量的影響。
熒光壽命顯微成像優(yōu)點:熒光壽命顯微成像(Fluorescence lifetime imaging microscopy,FLIM)是熒光壽命測量和熒光顯微技術(shù)的結(jié)合,熒光壽命顯微成像具有高特異性、高靈敏度、可定量測量微環(huán)境變化和分子間相互作用、不受探針濃度、激發(fā)光強度和光漂白影響等優(yōu)點。在過去的十年中,光學(xué)技術(shù)硬件和軟件、材料科學(xué)和生物醫(yī)學(xué)的迅速發(fā)展,共同促進了FLIM技術(shù)及其應(yīng)用的巨大進步。熒光壽命成像(FLIM)對細胞信號傳導(dǎo)及調(diào)控,蛋白間的相互作用等生物研究發(fā)揮著很大作用。熒光壽命顯微成像具有高特異性、高靈敏度的優(yōu)點。深圳化學(xué)熒光壽命成像哪家便宜
光壽命成像顯微技術(shù)已在生命科學(xué)領(lǐng)域中得到了普遍的應(yīng)用。深圳動物熒光壽命成像訂購
熒光成像技術(shù)是一種非侵入性成像方法,熒光成像技術(shù)可以實時和多維度地清晰地監(jiān)測生物分子、細胞、組織和生物生物。具有高靈敏度輸出、高時間分辨率、非侵入性和低成本。熒光成像在疾病診斷,藥物分布和代謝評估以及血管生物成像中得到了普遍的應(yīng)用。其中一些前瞻性方法在診斷和影像學(xué)引導(dǎo)療治為未來醫(yī)學(xué)發(fā)展提供更廣闊的道路。除了手術(shù)中的成像引導(dǎo),熒光成像技術(shù)還可以用于手術(shù)中神經(jīng)保護,外科手術(shù)過程中神經(jīng)意外橫斷或損傷,導(dǎo)致患者部分活動功能衰退甚至長久喪失。深圳動物熒光壽命成像訂購
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