熒光壽命成像的優(yōu)勢:通過熒光壽命來進(jìn)行成像,只需要拍攝一次就完成圖像采集,不但減少了成像時間,而且降低了激光對樣品的損傷。熒光壽命成像使用簡單,方便快捷,不需要進(jìn)行參數(shù)調(diào)節(jié)。熒光壽命成像提供了壽命分布的二維圖形視圖。熒光壽命是熒光分子在激發(fā)態(tài)停留的時間,這個時間可以反映熒光分子的內(nèi)在屬性和所處的微環(huán)境,是一個很有用的工具。以往,熒光壽命的測量和計算是件非常復(fù)雜和耗時的工作,只有少數(shù)專業(yè)的科學(xué)家關(guān)注和使用該工具。傳統(tǒng)的多色成像實驗根據(jù)光譜差異來設(shè)計,會有串色等限制,而且需要多次采集圖像,會造成樣品的光損傷。熒光壽命成像能夠?qū)Σ煌N類或處于不同狀態(tài)的生物組織提供更好的對比度。深圳分子熒光壽命成像多少錢
熒光壽命成像技術(shù)用于表征DNA壓縮和基因活性。研究團(tuán)隊發(fā)展了熒光壽命成像技術(shù)(FLIM),表征DNA壓縮的動態(tài)過程,克服了以往方法的局限性。研究團(tuán)隊提出了兩種精確測量DNA壓縮程度的FLIM分析方法。第一種方法基于加入DNA的熒光探針的熒光壽命與其局部微環(huán)境折射率之間的逆二次方關(guān)系,熒光探針的壽命隨DNA壓縮密度而變化,從而可表征DNA壓縮程度。第二種方法是將熒光標(biāo)記的核苷酸整合到DNA鏈中,通過一種叫做熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)的技術(shù)獲得其熒光壽命值的變化,從而反映出DNA的壓縮程度的動態(tài)變化過程。細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果證明,兩種FLIM分析方法都可以成功表征DNA壓縮的動態(tài)過程。深圳植物熒光壽命成像費用熒光壽命成像顯微技術(shù)經(jīng)常用于以下領(lǐng)域:分子影像學(xué)、代謝成像、FRET成像、同時進(jìn)行NAD成像。
熒光壽命的測量和熒光壽命成像主要有時間相關(guān)單光子計數(shù)法(time correlated single photon counting, TCSPC)、門控探測法(time-gated detection)、條紋相機(jī)測量法(streak-FLIM)、頻閃技術(shù)等四種常見的方法。TCSPC是目前測量熒光壽命的主要技術(shù),同軸脈沖光源發(fā)出的脈沖光引起起始光電倍增管產(chǎn)生電信號,該信號通過恒分信號甄別器1啟動時幅轉(zhuǎn)換器(time-amplitude converter,TAC),時幅轉(zhuǎn)換器產(chǎn)生一個隨時間線性增長的電壓信號。此外,同軸脈沖光源發(fā)出的脈沖光通過激發(fā)單色器后到達(dá)樣品池,樣品產(chǎn)生的熒光信號再經(jīng)過發(fā)射單色器到達(dá)終止光電倍增管,由此產(chǎn)生的電信號經(jīng)由恒分信號甄別器2到達(dá)時幅轉(zhuǎn)換器并使其停止工作。
熒光壽命成像技術(shù)是怎么運作的?通過建立檢測到的熒光事件的直方圖來確定壽命。可顯示單指數(shù)或多指數(shù)熒光衰減。數(shù)值曲線擬合表示熒光壽命和振幅(即檢測到的光子數(shù))。由于FRET減少了供體壽命,因此如果無FRET的供體壽命已知,就可以量化FRET發(fā)生的程度。該供體壽命τ作為分析FRET樣品的一定參考。因此,F(xiàn)LIM-FRET為內(nèi)部參照—這一特點減少了基于強(qiáng)度測量FRET時的很多缺點。由于其熒光壽命是染料的固有特性,因此對其他不利影響(如光漂白、圖像明暗處理、不同濃度或表達(dá)水平)具有普遍的不變性。使用基于強(qiáng)度的FRET測量的主要限制是所有可觀察的供體分子都經(jīng)歷FRET的基本假設(shè)。通常情況并非如此。熒光壽命成像技術(shù)是如何應(yīng)用在生物醫(yī)學(xué)中的?
熒光壽命顯微成像技術(shù)具有對生物大分子結(jié)構(gòu)、動力學(xué)信息和分子環(huán)境等進(jìn)行高分辨高精度測量的能力,因此其重要性日漸提升,被普遍地應(yīng)用于生物學(xué)研究及臨床診斷等領(lǐng)域。熒光壽命,分子包含多個能態(tài)S0、S1、S2和三重態(tài)T1,每個能態(tài)都包含多個精細(xì)的能級。正常情況下,大部分電子處在較低能態(tài)即基態(tài)S0的較低能級上,當(dāng)分子被光束照射,會吸收光子能量,電子被激發(fā)到更高的能態(tài)S1或S2上,在S2能態(tài)上的電子只能存在很短暫的時間,便會通過內(nèi)轉(zhuǎn)換過程躍遷到S1上,而S1能態(tài)上的電子亦會在極短時間內(nèi)躍遷到S1的較低能級上,而這些電子會存在一段時間后通過震蕩弛豫輻射躍遷到基態(tài),這個過程會釋放一個光子,即熒光。熒光壽命成像圖像中每一個像素點在phasor圖上都有一個對應(yīng)的點。上海熒光壽命成像哪里買
熒光成像在疾病診斷,藥物分布和代謝評估以及血管生物成像中得到了普遍的應(yīng)用。深圳分子熒光壽命成像多少錢
為什么說熒光壽命成像技術(shù)是先進(jìn)的?熒光壽命成像可以提供熒光強(qiáng)度(光子數(shù))和光子壽命的空間分布,具有200 nm的空間分辨率和皮秒量級的時間分辨率。通過雙光子激發(fā)(結(jié)合飛秒脈沖和共焦顯微鏡)可以直接檢測熒光和時間分辨的熒光壽命。這種無損檢測技術(shù),無需解剖或?qū)iT制造分層樣品,不但可在樣品表面,還可在樣品表面以下實現(xiàn)深度解析測量。特別適用于新材料、光子學(xué)、光伏、光催化、生物材料、納米材料和納米復(fù)合材料以及其相關(guān)的原理探究和設(shè)計優(yōu)化。深圳分子熒光壽命成像多少錢
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