熒光壽命顯微成像（Fluorescence lifetime imaging microscopy,FLIM）是熒光壽命測量和熒光顯微技術(shù)的結(jié)合，熒光壽命顯微成像具有高特異性、高靈敏度、可定量測量微環(huán)境變化和分子間相互作用、不受探針濃度、激發(fā)光強度和光漂白影響等優(yōu)點。熒光壽命成像（FLIM）對細胞信號傳導及調(diào)控，蛋白間的相互作用等生物研究發(fā)揮著很大作用。利用熒光壽命成像顯微鏡技術(shù)可實現(xiàn)可以實時監(jiān)控發(fā)光納米顆粒在活細胞內(nèi)的穩(wěn)定性。在過去的十年中，光學技術(shù)硬件和軟件、材料科學和生物醫(yī)學的迅速發(fā)展，共同促進了FLIM技術(shù)及其應用的巨大進步。市場上熒光壽命的測量方式可分為時域法和頻域法。珠海紅外熒光壽命成像供應

分子的熒光壽命在幾納秒至幾百納秒之間，因此，測量熒光壽命成像需要極快響應時間的探測器。如今主要存在兩類方案：一是時域測量，由一束窄脈沖將熒光分子激發(fā)至較高能態(tài)S1，接著測量熒光的發(fā)射幾率隨時間的變化。典型的時域測量方法有TCSPC和時間門（TG）兩種。TCSPC利用快速秒表測量激發(fā)脈沖與探測熒光之間的時間差。使用高重復脈沖激發(fā)光激發(fā)樣品，在每一個脈沖周期內(nèi)，較多激發(fā)熒光分子發(fā)出一個光子，然后記錄光子出現(xiàn)的時刻，并在該時刻記錄一個光子，再下一個脈沖周期內(nèi)也是相同的情況，經(jīng)過多次計數(shù)可以得到熒光光子隨時間的分布曲線。相似的，TG則探測不同時間窗口內(nèi)的熒光強度，通過曲線擬合得到熒光壽命。二是頻域測量，對連續(xù)激發(fā)光進行振幅調(diào)制后，分子發(fā)出的熒光強度也會受到振幅調(diào)制，兩個調(diào)制信號之間存在與熒光壽命相關(guān)的相位差，因此可以測量該相位差計算熒光壽命。杭州三維熒光壽命成像一般多少錢熒光壽命成像通常用于研究生物分子間相互作用、細胞中的信號事件或區(qū)分光譜重疊的熒光團。

熒光壽命成像在生命科學研究中的應用：自發(fā)熒光FLIM被普遍應用于非標記生物成像領(lǐng)域。所謂自發(fā)熒光，即生物細胞本身便包含熒光分子，稱為內(nèi)源性熒光分子團。FLIM通過對自發(fā)熒光分子團（如NAD(P)H）熒光壽命的考察，可以實現(xiàn)細胞代謝的監(jiān)測。這種方案無需人為對樣品加入熒光試劑便可以發(fā)射熒光，有效減少了熒光染料對樣品的毒性、熒光分子與樣品的非特異性結(jié)合及染料對生理性能的干擾影響。外源分子探針FLIM借助于外部熒光染料的注入以產(chǎn)生熒光。如今，為了利用FLIM對物理條件（包括粘度、溫度、酸度和氧化作用）的敏感性，已經(jīng)開發(fā)出了許多適用于體內(nèi)和體外應用的光學探針。

熒光壽命成像是一種什么樣的技術(shù)？是一種新型的熒光成像技術(shù)，它能夠?qū)Σ煌N類或處于不同狀態(tài)的生物組織提供更好的對比度，并反映熒光團及其所處微環(huán)境參數(shù)的定量分布。熒光壽命成像一般不受諸如激光或熒光強度擾動、熒光染料分布不均勻、染料的光漂白以及其他有礙熒光強度的因素的影響,是熒光光譜分析法的有效補充。超快激光技術(shù)，高速、高靈敏度探測技術(shù)，以及圖像處理技術(shù)的發(fā)展，都促進了FLIM 技術(shù)的發(fā)展．尤其是將熒光壽命成像和共焦顯微技術(shù)以及多光子激發(fā)熒光顯微技術(shù)結(jié)合，進一步拓寬了FLIM在生物學領(lǐng)域的應用范圍。熒光壽命成像在生物醫(yī)學領(lǐng)域有廣闊的應用前景。

熒光壽命成像FLIM所面臨的挑戰(zhàn)：在數(shù)據(jù)處理上，由于曲線擬合迭代過程的需求，計算成本較其他成像方案更高。在成像原理上，熒光壽命受多種外界因素影響，這些因素包括分子相互作用、pH值、溫度和粘滯阻力等，很難對這些參數(shù)控制變量，使得測量熒光壽命存在交叉干擾問題。此外，與普通光學顯微技術(shù)類似，介質(zhì)光散射影響成像信噪比及空間分辨率，成像深度受到限制。FLIM已經(jīng)在系統(tǒng)裝置、熒光探針和數(shù)據(jù)處理算法等方面得到了較快的發(fā)展，這也使得熒光壽命成像FLIM在對細胞微環(huán)境成像和生物代謝監(jiān)測發(fā)揮出不可替代的作用。測量熒光壽命需要極快響應時間的探測器。重慶顯微熒光壽命成像采購

熒光壽命成像具高靈敏度、可檢測人體生物樣品等優(yōu)點。珠海紅外熒光壽命成像供應

為什么說熒光壽命成像FLIM相比于熒光強度成像更有優(yōu)勢？通過熒光強度成像可以獲得熒光分子的空間分布，較為直接和簡便，但是當熒光分子具有相似的頻譜特性，或是同樣的熒光分子在不同環(huán)境下時，依賴強度進行成像的方案便無法準確反映信息。與基于光強的成像方式不同，熒光壽命成像FLIM適用于測量熒光分子環(huán)境的變化，或是測量分子的運動情況。其結(jié)果與熒光分子濃度無關(guān)，且不受影響光強的光散射或是光吸收影響，可以精確測量熒光淬滅過程，對生物分子微環(huán)境進行定量測量。熒光壽命成像可以用于無法控制局部探針濃度的熒光顯微鏡中。珠海紅外熒光壽命成像供應

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