熒光壽命顯微成像（Fluorescence lifetime imaging microscopy,FLIM）是熒光壽命測量和熒光顯微技術(shù)的結(jié)合，熒光壽命顯微成像具有高特異性、高靈敏度、可定量測量微環(huán)境變化和分子間相互作用、不受探針濃度、激發(fā)光強度和光漂白影響等優(yōu)點。熒光壽命成像（FLIM）對細胞信號傳導(dǎo)及調(diào)控，蛋白間的相互作用等生物研究發(fā)揮著很大作用。利用熒光壽命成像顯微鏡技術(shù)可實現(xiàn)可以實時監(jiān)控發(fā)光納米顆粒在活細胞內(nèi)的穩(wěn)定性。在過去的十年中，光學(xué)技術(shù)硬件和軟件、材料科學(xué)和生物醫(yī)學(xué)的迅速發(fā)展，共同促進了FLIM技術(shù)及其應(yīng)用的巨大進步。熒光壽命可以在頻域或者時間域測量。上海動物熒光壽命成像使用方法

熒光壽命成像中的熒光壽命是什么意思？有什么用？假定兩種衰減躍遷速率分別為Γ和knr，則激發(fā)態(tài)衰減速率可表示為：其中n(t)表示時間t時激發(fā)態(tài)分子的數(shù)目，由此可得到激發(fā)態(tài)物種的單指數(shù)衰減方程。熒光壽命定義為衰減總速率的倒數(shù)：熒光強度正比于衰減的激發(fā)態(tài)分子數(shù)，因此可將上式改寫為：其中I0是時間為零時的熒光強度，τ為熒光壽命。也就是說熒光強度衰減到初始強度的1/e時所需要的時間就是該熒光物種在測定條件下的熒光壽命。事實上當(dāng)熒光物質(zhì)被激發(fā)后有些激發(fā)態(tài)分子立即返回基態(tài)，有的甚至可以延遲到5倍于熒光壽命時才返回基態(tài)，這樣就形成了實驗測定的熒光強度衰減曲線。由于熒光壽命成像不受樣品濃度影響具有其他熒光成像技術(shù)無法代替的優(yōu)異性能。上海顯微熒光壽命成像價格表熒光壽命成像可以直接檢測熒光和時間分辨的熒光壽命。

熒光壽命是熒光團在發(fā)射熒光光子返回基態(tài)之前保持其激發(fā)態(tài)的平均時間長度。這取決于熒光團的分子組成和納米環(huán)境。熒光壽命成像將壽命測量與成像相結(jié)合：對每個圖像像素以測得的熒光壽命進行顏色編碼，產(chǎn)生額外的圖像反差。因此，熒光壽命成像可以提供關(guān)于熒光分子空間分布的信息和有關(guān)其生化狀態(tài)或納米環(huán)境的信息。有很多技術(shù)可以在顯微鏡環(huán)境中檢測熒光壽命。常見的的是基于供體（受體光漂白，F(xiàn)RET AB）或受體（敏化發(fā)射，F(xiàn)RET SE）熒光強度的技術(shù)。

熒光壽命成像（FLIM）的方法特別適合于體內(nèi)診斷，因為它們是無創(chuàng)且無損的。因此，它們被普遍用于受試者的臨床研究和醫(yī)學(xué)檢查。例如，該技術(shù)可以用于以下領(lǐng)域：皮膚的體內(nèi)診斷：人類皮膚的多光子擴散層析成像結(jié)合了雙光子激發(fā)和非解掃檢測，因此，多光子FLIM可以提供組織層的光學(xué)切片圖像，深度可達100 μm。人皮膚細胞的體內(nèi)雙光子成像是可能的，而不會損害組織的活力，可以從亞細胞分辨率重建三維結(jié)構(gòu)。眼科檢查：眼科FLIM結(jié)合了快速光束掃描和皮秒二極管激光器激發(fā)的功能。該方法非常靈敏，可以記錄人眼眼底（背景）的壽命圖像。通過這種方式，有可能及早發(fā)現(xiàn)眼部疾病，因為這些疾病通常伴隨著眼底的代謝變化。反過來，這些引起內(nèi)源性熒光團的熒光衰減參數(shù)的變化。熒光壽命成像不需要考慮跳色的影響，從而免去了計算和去除跳色雜質(zhì)信號的麻煩；

影響熒光壽命成像測量的幾種因素：1．溫度影響：一般說來，熒光隨溫度升高而強度減弱，溫度升高1℃，熒光強度下降1～10%不等。測定時，溫度必須保持恒定。 2．PH值影響：PH 值影響物質(zhì)的熒光，應(yīng)選擇較佳PH制備樣品。 3．光分解對熒光測定的影響： 熒光物質(zhì)吸收紫外可見光后，發(fā)生光化學(xué)反應(yīng)，導(dǎo)致熒光強度下降。因此，熒光分析要采用高靈敏度的檢測器，而不是用增強光源來提高靈敏度。測定時，用較窄的激發(fā)光部分的狹縫，以減弱激發(fā)光。同時，用較寬的發(fā)射狹縫引導(dǎo)熒光。熒光分析應(yīng)盡量在暗環(huán)境中進行。熒光壽命通常來講是一定的，不受激發(fā)光強度、熒光團濃度等因素的影響。珠海單分子熒光壽命成像哪個牌子好

熒光壽命成像的發(fā)展很好地彌補了基于強度成像的問題，對生物醫(yī)學(xué)檢測有著重要的意義。上海動物熒光壽命成像使用方法

影響熒光壽命成像測量的因素：高濃度樣品的影響：1）當(dāng)激發(fā)光照射高濃度樣品時，在激發(fā)光入口附近產(chǎn)生熒光，但這些熒光并不能進入熒光檢測器。2）高濃度的分子之間相互作用而發(fā)生活性阻礙現(xiàn)象。3）熒光的再吸收：即熒光光譜的短波長端和激發(fā)光譜的長波長端如果相互重疊，則發(fā)生熒光再吸收。熒光壽命成像具有200 nm的空間分辨率和皮秒量級的時間分辨率。散射光的影響： 主要是瑞利散射光和拉曼散射光的影響較大。校正辦法：先用短的激發(fā)光激發(fā)，檢出溶液的拉曼峰，然后進行熒光光譜校正。因為熒光光譜不隨激發(fā)光波長的改變而改變，而拉曼光卻隨之改變。上海動物熒光壽命成像使用方法

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