熒光壽命成像與傳統(tǒng)的使用熒光強度和光譜信息作為鑒別組織異常的成像方式相比,壽命成像提供了更多的生化診斷信息。熒光壽命成像已用于骨骼和牙齒的診斷。另外,采用多光子激發(fā)可顯著提高組織體的成像深度,如對人體皮膚自體熒光進行多光子激發(fā)熒光壽命成像,成像深度達200 um,組織體的熒光壽命分布揭示了細胞代謝狀態(tài)的變化,可用于對皮膚病的診斷。對腔體中瘤的早期臨床診斷,已開發(fā)出具有實時及壽命分辨功能的內(nèi)窺鏡,并對離體膀胱樣品進行測試,得到了黃素分子的自體熒光壽命圖像。熒光壽命成像技術(shù)是通過建立檢測到的熒光事件的直方圖來確定壽命。江蘇熒光壽命成像哪里買
熒光壽命成像和生物發(fā)光的不同之處:產(chǎn)生光子的原理不同,類似于我們都是通過肉眼去觀察螢火蟲和發(fā)光水母一樣,生物發(fā)光與熒光成像在本質(zhì)上,都是機體中特定的細胞或材料發(fā)出光子,被高靈敏度的CCD檢測到形成圖像,但是生物發(fā)光與熒光壽命成像產(chǎn)生光子的過程和機制是完全不同的。生物發(fā)光與熒光成像相同點:都需要對細胞進行標(biāo)記。生物發(fā)光產(chǎn)生的光子和熒光壽命成像產(chǎn)生的光子都可以被高靈敏的CCD檢測并形成圖像,就像一個人的眼睛就可以既看到螢火蟲又可以看到發(fā)光水母一樣。熒光壽命(FLT)是熒光團在發(fā)射光子并返回基態(tài)之前花費在激發(fā)態(tài)的時間。根據(jù)熒光基團的不同,F(xiàn)LT可以從皮秒到數(shù)百納秒不等。江蘇熒光壽命成像哪里買熒光壽命成像不需要考慮跳色的影響,從而免去了計算和去除跳色雜質(zhì)信號的麻煩;
熒光壽命成像是一種新型的熒光成像技術(shù),它能夠?qū)Σ煌N類或處于不同狀態(tài)的生物組織提供更好的對比度,并反映熒光團及其所處微環(huán)境參數(shù)的定量分布。熒光壽命成像一般不受諸如激光或熒光強度擾動、熒光染料分布不均勻、染料的光漂白以及其他有礙熒光強度的因素的影響,是熒光光譜分析法的有效補充。超快激光技術(shù),高速、高靈敏度探測技術(shù),以及圖像處理技術(shù)的發(fā)展,都促進了FLIM 技術(shù)的發(fā)展.尤其是將熒光壽命成像和共焦顯微技術(shù)以及多光子激發(fā)熒光顯微技術(shù)結(jié)合,進一步拓寬了FLIM在生物學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用范圍。
熒光壽命成像技術(shù)是如何應(yīng)用在生物醫(yī)學(xué)中的?隨著近年來對蛋白及分子功能研究的不斷深入,科研工作者除對多色成像、鈣成像等功能成像的需求日漸增多之外,對熒光壽命成像的需求也逐漸增加,而熒光壽命成像能提供除熒光強度、熒光光譜信息之外的熒光分子的壽命信息,可用于分子間相互作用(FRET)、分子所處微環(huán)境的離子濃度(如Ca2+、pH)及細胞代謝水平的改變等測量,并可拆分光譜重疊的熒光染料及染料和自發(fā)熒光,還可以結(jié)合熒光相關(guān)光譜對單分子實現(xiàn)熒光壽命相關(guān)光譜FLCS的測量。熒光壽命成像擴展了傳統(tǒng)熒光成像的維度,是功能成像的理想工具,在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域有廣闊的應(yīng)用前景。熒光壽命成像顯微技術(shù)經(jīng)常用于以下領(lǐng)域:分子影像學(xué)、代謝成像、FRET成像、同時進行NAD成像。
熒光成像技術(shù)涉及精確測量已添加到組織中的自然熒光分子或熒光標(biāo)簽的熒光衰減率或壽命。由于壽命取決于分子環(huán)境的特性,如溫度和pH,以及其與周圍分子的相互作用,因此可利用熒光成像技術(shù)獲得有關(guān)分子性質(zhì)及其微環(huán)境的信息。通常,使用激光掃描共聚焦顯微鏡進行熒光成像技術(shù),通過掃描激光束穿過熒光樣品以形成圖像,從而實現(xiàn)高分辨率。為了在宏觀尺度上獲得熒光成像的信息,研究人員開發(fā)了一種共焦的宏觀系統(tǒng),該系統(tǒng)結(jié)合了激光和非常短的脈沖,利用只有皮秒的長度和非常靈敏的檢測器來檢測熒光。該系統(tǒng)還包括計算光子的電子器件,并繪制它們相對于激光脈沖和樣品上激光束位置的時間分布。熒光壽命對依賴于熒光團結(jié)構(gòu)的內(nèi)部因素敏感。江蘇熒光壽命成像哪里買
熒光壽命成像具有200 nm的空間分辨率和皮秒量級的時間分辨率。江蘇熒光壽命成像哪里買
熒光壽命成像技術(shù)可以實時監(jiān)控納米顆粒在細胞內(nèi)的穩(wěn)定性,利用熒光壽命成像顯微鏡技術(shù)可實現(xiàn)可以實時監(jiān)控發(fā)光納米顆粒在活細胞內(nèi)的穩(wěn)定性。熒光壽命成像不但具有其它熒光顯微鏡所具有的高靈敏度、可檢測人體生物樣品等優(yōu)點,它在監(jiān)控?zé)晒饧{米材料的穩(wěn)定性上還具有以下幾個優(yōu)勢:(1)熒光壽命不受熒光探針的濃度的影響,可排除納米材料的胞吐及細胞分化導(dǎo)致的納米顆粒的稀釋等對測量的影響;(2)很多常見的發(fā)光材料的熒光壽命都遠遠大于細胞的自熒光的壽命,很易去除生物自熒光對熒光成像的干擾;(3)發(fā)光材料的熒光壽命和其材料的穩(wěn)定性密切相關(guān),熒光壽命的改變可以靈敏地反映相應(yīng)材料的化學(xué)穩(wěn)定性。江蘇熒光壽命成像哪里買
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