時(shí)域法熒光壽命的測(cè)量和熒光壽命成像主要有時(shí)間相關(guān)單光子計(jì)數(shù)法（time correlated single photon counting, TCSPC）、門(mén)控探測(cè)法（time-gated detection）、條紋相機(jī)測(cè)量法（streak-FLIM）、頻閃技術(shù)等四種常見(jiàn)的方法。TCSPC是目前測(cè)量熒光壽命的主要技術(shù)，同軸脈沖光源發(fā)出的脈沖光引起起始光電倍增管產(chǎn)生電信號(hào)，該信號(hào)通過(guò)恒分信號(hào)甄別器1啟動(dòng)時(shí)幅轉(zhuǎn)換器（time-amplitude converter，TAC），時(shí)幅轉(zhuǎn)換器產(chǎn)生一個(gè)隨時(shí)間線性增長(zhǎng)的電壓信號(hào)。此外，同軸脈沖光源發(fā)出的脈沖光通過(guò)激發(fā)單色器后到達(dá)樣品池，樣品產(chǎn)生的熒光信號(hào)再經(jīng)過(guò)發(fā)射單色器到達(dá)終止光電倍增管，由此產(chǎn)生的電信號(hào)經(jīng)由恒分信號(hào)甄別器2到達(dá)時(shí)幅轉(zhuǎn)換器并使其停止工作。此時(shí)，時(shí)幅轉(zhuǎn)換器根據(jù)累積電壓輸出一個(gè)數(shù)字信號(hào)并在多通道分析儀（multi-channel analyzer）的相應(yīng)時(shí)間通道計(jì)入一個(gè)信號(hào)，表明檢測(cè)到壽命為該時(shí)間的一個(gè)光子。經(jīng)過(guò)幾十萬(wàn)次的重復(fù)后，不同的時(shí)間通道累積下來(lái)的光子數(shù)目不相同。熒光壽命是熒光基團(tuán)在通過(guò)發(fā)射熒光光子返回基態(tài)之前在其激發(fā)態(tài)下保持平均多長(zhǎng)時(shí)間的量度。杭州分子熒光壽命成像哪家靠譜
紅外熒光壽命成像技術(shù)在生物多重檢測(cè)中的應(yīng)用。相比于熒光強(qiáng)度，熒光壽命的數(shù)值具有很好的穩(wěn)定性，不依賴于生物組織穿透深度。因此可以實(shí)現(xiàn)生物多重成像和量化診斷。該團(tuán)隊(duì)利用能量延遲方法并結(jié)合對(duì)發(fā)光離子濃度的調(diào)控，實(shí)現(xiàn)NIR-II區(qū)單一波長(zhǎng)下熒光壽命三個(gè)量級(jí)以上的精確調(diào)節(jié)。將這種成像方法應(yīng)用于乳腺的精確診斷，其對(duì)標(biāo)志物的定量檢測(cè)結(jié)果與傳統(tǒng)的免疫印跡法和免疫組織化學(xué)法相比有很好的一致性。而相比于后兩者一次只能對(duì)一種標(biāo)志物進(jìn)行檢測(cè)，這種新的時(shí)間維度成像方法可以原位實(shí)現(xiàn)同時(shí)定量多個(gè)標(biāo)記物，并且減少了傳統(tǒng)檢測(cè)方法在組織切片的制作、處理以及評(píng)分過(guò)程中所導(dǎo)致結(jié)果的差異性。福建顯微熒光壽命成像生產(chǎn)時(shí)域和頻域技術(shù)在各種熒光顯微壽命成像平臺(tái)中都有應(yīng)用。
熒光壽命成像在生命科學(xué)研究中的應(yīng)用：自發(fā)熒光FLIM被普遍應(yīng)用于非標(biāo)記生物成像領(lǐng)域。所謂自發(fā)熒光，即生物細(xì)胞本身便包含熒光分子，稱(chēng)為內(nèi)源性熒光分子團(tuán)。FLIM通過(guò)對(duì)自發(fā)熒光分子團(tuán)（如NAD(P)H）熒光壽命的考察，可以實(shí)現(xiàn)細(xì)胞代謝的監(jiān)測(cè)。這種方案無(wú)需人為對(duì)樣品加入熒光試劑便可以發(fā)射熒光，有效減少了熒光染料對(duì)樣品的毒性、熒光分子與樣品的非特異性結(jié)合及染料對(duì)生理性能的干擾影響。外源分子探針FLIM借助于外部熒光染料的注入以產(chǎn)生熒光。如今，為了利用FLIM對(duì)物理?xiàng)l件（包括粘度、溫度、酸度和氧化作用）的敏感性，已經(jīng)開(kāi)發(fā)出了許多適用于體內(nèi)和體外應(yīng)用的光學(xué)探針。
熒光壽命成像技術(shù)及其在生物醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用：熒光分子的壽命就像熒光分子的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜一樣是熒光分子的固有特性，隨著近年來(lái)對(duì)蛋白及分子功能研究的不斷深入，科研工作者除對(duì)多色成像、鈣成像等功能成像的需求日漸增多之外，對(duì)熒光壽命成像的需求也逐漸增加，而熒光壽命成像能提供除熒光強(qiáng)度、熒光光譜信息之外的熒光分子的壽命信息，可用于分子間相互作用（FRET）、分子所處微環(huán)境的離子濃度（如Ca2+、pH）及細(xì)胞代謝水平的改變等測(cè)量，并可拆分光譜重疊的熒光染料及染料和自發(fā)熒光，還可以結(jié)合熒光相關(guān)光譜對(duì)單分子實(shí)現(xiàn)熒光壽命相關(guān)光譜FLCS的測(cè)量。熒光壽命成像擴(kuò)展了傳統(tǒng)熒光成像的維度，是功能成像的理想工具，在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域有廣闊的應(yīng)用前景。熒光壽命成像基于熒光團(tuán)的熒光壽命取決于其分子環(huán)境而并非濃度的事實(shí)。
熒光分析和成像技術(shù)因具有非常高的靈敏度和分子特異性而普遍的應(yīng)用于生物物理、生物化學(xué)、醫(yī)學(xué)、物理、化學(xué)等領(lǐng)域，利用熒光光譜技術(shù)和熒光顯微技術(shù)可以分析樣品中熒光團(tuán)的組分和分布。不過(guò)，由于熒光分析技術(shù)大多是基于熒光強(qiáng)度的測(cè)量，容易受到激發(fā)光強(qiáng)度、樣品濃度淬滅、熒光染料的分布濃度等因素的影響。熒光壽命通常來(lái)講是一定的，不受激發(fā)光強(qiáng)度、熒光團(tuán)濃度等因素的影響，只只與熒光團(tuán)所處的微環(huán)境有關(guān)，因此，利用熒光壽命顯微鏡（Fluorescence lifetime imaging microscopy, FLIM）對(duì)樣品進(jìn)行熒光壽命成像，可以對(duì)樣品所在的微環(huán)境中的許多物理參數(shù)如氧壓、溶液疏水性等及生物化學(xué)參數(shù)如pH值、離子濃度等進(jìn)行定量測(cè)量。此外，熒光壽命成像技術(shù)還可以同時(shí)獲得分子狀態(tài)和空間分布的信息。熒光壽命成像可用于多種生物應(yīng)用，包括組織表面掃描、組織類(lèi)型繪圖、光動(dòng)力治理、皮膚成像等。天津紅外熒光壽命成像有哪些
生物發(fā)光與熒光壽命成像不同點(diǎn)：產(chǎn)生光子的原理不同。杭州分子熒光壽命成像哪家靠譜
熒光成像技術(shù)涉及精確測(cè)量已添加到組織中的自然熒光分子或熒光標(biāo)簽的熒光衰減率或壽命。由于壽命取決于分子環(huán)境的特性，如溫度和pH，以及其與周?chē)肿拥南嗷プ饔?，因此可利用熒光成像技術(shù)獲得有關(guān)分子性質(zhì)及其微環(huán)境的信息。通常，使用激光掃描共聚焦顯微鏡進(jìn)行熒光成像技術(shù)，通過(guò)掃描激光束穿過(guò)熒光樣品以形成圖像，從而實(shí)現(xiàn)高分辨率。為了在宏觀尺度上獲得熒光成像的信息，研究人員開(kāi)發(fā)了一種共焦的宏觀系統(tǒng)，該系統(tǒng)結(jié)合了激光和非常短的脈沖，利用只有皮秒的長(zhǎng)度和非常靈敏的檢測(cè)器來(lái)檢測(cè)熒光。該系統(tǒng)還包括計(jì)算光子的電子器件，并繪制它們相對(duì)于激光脈沖和樣品上激光束位置的時(shí)間分布。杭州分子熒光壽命成像哪家靠譜
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