熒光分析和成像技術(shù)因具有非常高的靈敏度和分子特異性而普遍的應用于生物物理、生物化學、醫(yī)學、物理、化學等領(lǐng)域,利用熒光光譜技術(shù)和熒光顯微技術(shù)可以分析樣品中熒光團的組分和分布。不過,由于熒光分析技術(shù)大多是基于熒光強度的測量,容易受到激發(fā)光強度、樣品濃度淬滅、熒光染料的分布濃度等因素的影響。熒光壽命通常來講是一定的,不受激發(fā)光強度、熒光團濃度等因素的影響,只只與熒光團所處的微環(huán)境有關(guān),因此,利用熒光壽命顯微鏡(Fluorescence lifetime imaging microscopy, FLIM)對樣品進行熒光壽命成像,可以對樣品所在的微環(huán)境中的許多物理參數(shù)如氧壓、溶液疏水性等及生物化學參數(shù)如pH值、離子濃度等進行定量測量。此外,熒光壽命成像技術(shù)還可以同時獲得分子狀態(tài)和空間分布的信息。熒光壽命成像可以用于無法控制局部探針濃度的熒光顯微鏡中。深圳紅外熒光壽命成像售價
影響熒光壽命成像測量的因素有哪些?溫度影響:一般說來,熒光隨溫度升高而強度減弱,溫度升高1℃,熒光強度下降1~10%不等。測定時,溫度必須保持恒定。PH值影響:PH 值影響物質(zhì)的熒光,應選擇較佳PH制備樣品。光分解對熒光測定的影響: 熒光物質(zhì)吸收紫外可見光后,發(fā)生光化學反應,導致熒光強度下降。因此,熒光分析要采用高靈敏度的檢測器,而不是用增強光源來提高靈敏度。測定時,用較窄的激發(fā)光部分的狹縫,以減弱激發(fā)光。同時,用較寬的發(fā)射狹縫引導熒光。熒光分析應盡量在暗環(huán)境中進行。熒光壽命成像這種技術(shù)相對較新,涉及到同時在圖像的每個像素處確定熒光衰減時間的空間分布。江門生物熒光壽命成像多少錢熒光壽命成像的發(fā)展很好地彌補了基于強度成像的問題,對生物醫(yī)學檢測有著重要的意義。
熒光分子受激發(fā)后發(fā)光,熒光壽命量化了發(fā)光的衰減率。該特征時間不但取決于特定的熒光團,還取決于其環(huán)境,分子相互作用影響弛豫過程并改變熒光團的壽命。熒光壽命是微環(huán)境的相對參數(shù),不受環(huán)境吸收、樣本濃度等因素影響,因此能夠?qū)ι锝M織環(huán)境中的 p H 值水平、離子濃度、氧分子濃度等微環(huán)境狀態(tài)進行高精度檢測。熒光壽命顯微成像(FLIM),可以定位不同的分子及濃度分布,在生物,材料,半導體領(lǐng)域具有重要的應用價值。熒光壽命成像原理及應用說明:熒光壽命是指分子受到光脈沖激發(fā)后返回基態(tài)之前在激發(fā)平均停留的時間,處于激發(fā)態(tài)的熒光分子在從激發(fā)到基態(tài)的過程中發(fā)射熒光釋放能量。熒光壽命取決于熒光分子所處的微環(huán)境,通過對樣品熒光壽命的測量和成像可以定量獲取樣品的功能信息。
熒光壽命成像技術(shù)及其在生物醫(yī)學中的應用:熒光分子的壽命就像熒光分子的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜一樣是熒光分子的固有特性,隨著近年來對蛋白及分子功能研究的不斷深入,科研工作者除對多色成像、鈣成像等功能成像的需求日漸增多之外,對熒光壽命成像的需求也逐漸增加,而熒光壽命成像能提供除熒光強度、熒光光譜信息之外的熒光分子的壽命信息,可用于分子間相互作用(FRET)、分子所處微環(huán)境的離子濃度(如Ca2+、pH)及細胞代謝水平的改變等測量,并可拆分光譜重疊的熒光染料及染料和自發(fā)熒光,還可以結(jié)合熒光相關(guān)光譜對單分子實現(xiàn)熒光壽命相關(guān)光譜FLCS的測量。熒光壽命成像擴展了傳統(tǒng)熒光成像的維度,是功能成像的理想工具,在生物醫(yī)學領(lǐng)域有廣闊的應用前景。熒光壽命是用于幾種生物測定的穩(wěn)健參數(shù)。
熒光壽命成像系統(tǒng)是一種用于化學領(lǐng)域的分析儀器,熒光壽命成像可以在體現(xiàn)熒光物質(zhì)形貌信息之外,還能夠靈敏地反應熒光基團生化特性以及周圍微環(huán)境的變化情況。將熒光壽命成像與共聚焦成像技術(shù)結(jié)合起來,實現(xiàn)人體三維熒光壽命成像,進一步實現(xiàn)人體三維功能成像奠定基礎(chǔ),有潛力應用于瘤識別,病變診斷等領(lǐng)域。熒光壽命是熒光基團在通過發(fā)射熒光光子返回基態(tài)之前在其激發(fā)態(tài)下保持平均多長時間的量度。不同熒光基團激發(fā)態(tài)停時間不同,大多數(shù)生物熒光素的熒光壽命時間在 0.2 - 20 ns。熒光壽命檢測經(jīng)典方法為點對點的時間相關(guān)單光子計數(shù)(TCSPC),但由于過去檢測硬件的局限和復雜的使用而沒有被普遍地應用于科學研究。隨著技術(shù)的發(fā)展,在顯微鏡視野內(nèi)進行超快速全像素熒光壽命信號采集的熒光壽命成像成為可能。熒光壽命成像技術(shù)是如何應用在生物醫(yī)學中的?深圳紅外熒光壽命成像售價
熒光壽命成像圖像中每一個像素點在phasor圖上都有一個對應的點。深圳紅外熒光壽命成像售價
熒光壽命成像有幾點優(yōu)勢:1.不需要考慮跳色的影響,從而免去了計算和去除跳色雜質(zhì)信號的麻煩;去除跳色雜質(zhì)的準確性很大程度上依賴于信噪比、成像流程的設(shè)計和控制、以及跳色信號估算的算法,這些因素使得通過穩(wěn)態(tài)光強度測量熒光壽命成像的精確度在很多時候受到質(zhì)疑。2.穩(wěn)態(tài)光強度的熒光壽命成像測量很容易受熒光標記光漂白或是激發(fā)光散射背景的影響,而這些因素對FLIM-FRET的測量影響相對較低。3.熒光壽命成像可以定量的區(qū)分參與FRET和沒有參與FRET的分子數(shù)量,這樣深入的定量分析是穩(wěn)態(tài)光強度方法做不到的。深圳紅外熒光壽命成像售價
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