熒光壽命成像（FLIM）的方法特別適合于體內(nèi)診斷，因?yàn)樗鼈兪菬o創(chuàng)且無損的。因此，它們被普遍用于受試者的臨床研究和醫(yī)學(xué)檢查。例如，該技術(shù)可以用于以下領(lǐng)域：皮膚的體內(nèi)診斷：人類皮膚的多光子擴(kuò)散層析成像結(jié)合了雙光子激發(fā)和非解掃檢測，因此，多光子FLIM可以提供組織層的光學(xué)切片圖像，深度可達(dá)100 μm。人皮膚細(xì)胞的體內(nèi)雙光子成像是可能的，而不會損害組織的活力，可以從亞細(xì)胞分辨率重建三維結(jié)構(gòu)。眼科檢查：眼科FLIM結(jié)合了快速光束掃描和皮秒二極管激光器激發(fā)的功能。該方法非常靈敏，可以記錄人眼眼底（背景）的壽命圖像。通過這種方式，有可能及早發(fā)現(xiàn)眼部疾病，因?yàn)檫@些疾病通常伴隨著眼底的代謝變化。反過來，這些引起內(nèi)源性熒光團(tuán)的熒光衰減參數(shù)的變化。市場上熒光壽命的測量方式可分為時(shí)域法和頻域法。廣東顯微熒光壽命成像價(jià)錢

熒光壽命成像FLIM在生物學(xué)上的應(yīng)用根據(jù)熒光分子種類可以分為三種：分別為自發(fā)熒光FLIM、外源分子探針FLIM和FRET-FLIM。自發(fā)熒光FLIM被普遍應(yīng)用于非標(biāo)記生物成像領(lǐng)域。所謂自發(fā)熒光，即生物細(xì)胞本身便包含熒光分子，稱為內(nèi)源性熒光分子團(tuán)。FLIM通過對自發(fā)熒光分子團(tuán)（如NAD(P)H和FAD）熒光壽命的考察，可以實(shí)現(xiàn)細(xì)胞代謝的監(jiān)測。這種方案無需人為對樣品加入熒光試劑便可以發(fā)射熒光，有效減少了熒光染料對樣品的毒性、熒光分子與樣品的非特異性結(jié)合及染料對生理性能的干擾影響。浙江開放式熒光壽命成像報(bào)價(jià)熒光壽命成像可以用于無法控制局部探針濃度的熒光顯微鏡中。

熒光壽命成像 (FLIM)通過建立檢測到的熒光事件的直方圖來確定壽命。可顯示單指數(shù)或多指數(shù)熒光衰減。數(shù)值曲線擬合表示熒光壽命和振幅（即檢測到的光子數(shù)）。由于FRET減少了供體壽命，因此如果無FRET的供體壽命已知，就可以量化FRET發(fā)生的程度。該供體壽命τ作為分析FRET樣品的一定參考。因此，F(xiàn)LIM-FRET為內(nèi)部參照—這一特點(diǎn)減少了基于強(qiáng)度測量FRET時(shí)的很多缺點(diǎn)。由于其熒光壽命是染料的固有特性，因此對其他不利影響（如光漂白、圖像明暗處理、不同濃度或表達(dá)水平）具有普遍的不變性。使用基于強(qiáng)度的FRET測量的主要限制是所有可觀察的供體分子都經(jīng)歷FRET的基本假設(shè)。通常情況并非如此。供體分子這種變化的“非結(jié)合”組分給測量的FRET效率帶來了相當(dāng)大的不確定性，使得無法在實(shí)驗(yàn)之間進(jìn)行比較。熒光壽命成像克服了這一缺點(diǎn)。

熒光壽命可以在頻域或者時(shí)間域測量。時(shí)間域測量方法涉及用短光脈沖照射樣品（比色皿、細(xì)胞或組織），然后隨時(shí)間測量發(fā)射強(qiáng)度。FLT由衰減曲線的斜率確定。有幾種熒光檢測方法可用于壽命測量，其中時(shí)間相關(guān)單光子計(jì)數(shù)（TCSPC）可實(shí)現(xiàn)簡單的數(shù)據(jù)收集和增強(qiáng)的定量光子計(jì)數(shù)。頻域方法涉及高頻率入射光的正弦調(diào)制。在該方法中，發(fā)射發(fā)生在與入射光相同的頻率處，并且隨著激發(fā)光兼有相位延遲和振幅的變化（解調(diào)）。壽命測量不需要波長比率探針來提供眾多分析物的定量測定。壽命法通過使用光譜位移探針擴(kuò)展了分析物濃度范圍的靈敏度。壽命測量可用于沒有直接探針的分析物。包括葡萄糖、抗原或基于熒光能量轉(zhuǎn)移轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制的任何親和力或免疫測定。熒光壽命成像具有其它熒光顯微鏡所具有的高靈敏度、可檢測人體生物樣品等優(yōu)點(diǎn)。

影響熒光壽命成像測量的因素有哪些？散射光的影響： 主要是瑞利散射光和拉曼散射光的影響較大。校正辦法：先用短的激發(fā)光激發(fā)，檢出溶液的拉曼峰，然后進(jìn)行熒光光譜校正。因?yàn)闊晒夤庾V不隨激發(fā)光波長的改變而改變，而拉曼光卻隨之改變。高濃度樣品的影響：1）當(dāng)激發(fā)光照射高濃度樣品時(shí)，在激發(fā)光入口附近產(chǎn)生熒光，但這些熒光并不能進(jìn)入熒光檢測器。2）高濃度的分子之間相互作用而發(fā)生活性阻礙現(xiàn)象。3）熒光的再吸收：即熒光光譜的短波長端和激發(fā)光譜的長波長端如果相互重疊，則發(fā)生熒光再吸收。熒光壽命成像主要通過TCSPC技術(shù)實(shí)現(xiàn)。杭州分子熒光壽命成像哪家好

熒光壽命成像可以提供有關(guān)電信號變化、離子和氧含量、溫度、細(xì)胞或其環(huán)境中的 pH 值的定量信息。廣東顯微熒光壽命成像價(jià)錢

熒光壽命成像是什么？如果分子環(huán)境刺激激發(fā)態(tài)衰變而不發(fā)射光子，則熒光強(qiáng)度會降低（淬滅）。熒光淬滅是一條單獨(dú)的發(fā)射路徑，因此在動力學(xué)上與熒光過程形成競爭關(guān)系。激發(fā)態(tài)存儲現(xiàn)在可以通過一個(gè)以上的過程衰變，從而縮短熒光壽命。這種壽命的改變可用于收集分子環(huán)境的信息。一種特殊類型的淬滅是將激發(fā)能量以非輻射的方式傳遞到相鄰的不同熒光染料中：“熒光共振能量轉(zhuǎn)移”，F(xiàn)RET。此時(shí)，不只第1個(gè)熒光染料（供體）變暗，壽命變短，而且第二個(gè)熒光染料（受體）在“錯(cuò)誤的”激發(fā)顏色下開始發(fā)光。由于這種效果的產(chǎn)生需要兩種熒光染料（小于10 nm）的密切接觸，因此將其用作研究分子相互作用的“分子標(biāo)尺”。它也是許多現(xiàn)代FRET生物傳感器的基礎(chǔ)。廣東顯微熒光壽命成像價(jià)錢

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