在使用TCSPC測量熒光壽命的過程中,需要調(diào)節(jié)樣品的熒光強度,確保每次激發(fā)后較多只有一個熒光光子到達(dá)終止光電倍增管。TCSPC方法的突出優(yōu)點是靈敏度高、測量結(jié)果準(zhǔn)確、系統(tǒng)誤差小。采用該技術(shù)對樣品進(jìn)行熒光壽命成像時,必須逐點測量樣品的熒光壽命,而每一點的測量時間又比較長,因此,通常認(rèn)為該技術(shù)不太適合熒光壽命測量。不過,近年來,隨著TCSPC技術(shù)和固體超快激光技術(shù)的發(fā)展,TCSPC技術(shù)已具備快速測量熒光壽命的條件。通過與激光共聚焦顯微鏡的結(jié)合,可以對樣品進(jìn)行熒光壽命成像的測量。熒光壽命成像具有其它熒光顯微鏡所具有的高靈敏度、可檢測人體生物樣品等優(yōu)點。湖南熒光壽命成像制造
熒光壽命成像:作為熒光成像中除光譜和強度之外的新維度,當(dāng)前,熒光壽命成像主要應(yīng)用領(lǐng)域包括:用于樣品分離,如利用不同染料熒光壽命的差異將不同組織、正常與病變細(xì)胞等有效分離。熒光團在光譜上非常相似(max 580 vs 573)無法分離,但它們在熒光壽命上差異明顯。作為生物傳感器,如評價藥物/理化條件對細(xì)胞的影響、Ca+震蕩等。充分拓展了壽光命成像的使用范圍,實現(xiàn)可相互驗證的多維度樣品成像。實現(xiàn)真正的生物動力學(xué)分析和功能成像。重慶熒光壽命成像哪個牌子好熒光壽命顯微成像是熒光壽命測量和熒光顯微技術(shù)的結(jié)合。
熒光分析和成像技術(shù)因具有非常高的靈敏度和分子特異性而普遍的應(yīng)用于生物物理、生物化學(xué)、醫(yī)學(xué)、物理、化學(xué)等領(lǐng)域,利用熒光光譜技術(shù)和熒光顯微技術(shù)可以分析樣品中熒光團的組分和分布。不過,由于熒光分析技術(shù)大多是基于熒光強度的測量,容易受到激發(fā)光強度、樣品濃度淬滅、熒光染料的分布濃度等因素的影響。熒光壽命通常來講是一定的,不受激發(fā)光強度、熒光團濃度等因素的影響,只只與熒光團所處的微環(huán)境有關(guān),因此,利用熒光壽命顯微鏡(Fluorescence lifetime imaging microscopy, FLIM)對樣品進(jìn)行熒光壽命成像,可以對樣品所在的微環(huán)境中的許多物理參數(shù)如氧壓、溶液疏水性等及生物化學(xué)參數(shù)如pH值、離子濃度等進(jìn)行定量測量。此外,熒光壽命成像技術(shù)還可以同時獲得分子狀態(tài)和空間分布的信息。
熒光壽命成像開始用于組織體的在體成像,與傳統(tǒng)的使用熒光強度和光譜信息作為鑒別組織異常的成像方式相比,壽命成像提供了更多的生化診斷信息。熒光壽命成像已用于骨骼和牙齒的診斷。另外,采用多光子激發(fā)可顯著提高組織體的成像深度,如對人體皮膚自體熒光進(jìn)行多光子激發(fā)熒光壽命成像,成像深度達(dá)200 um,組織體的熒光壽命分布揭示了細(xì)胞代謝狀態(tài)的變化,可用于對皮膚病的診斷。對腔體中瘤的早期臨床診斷,已開發(fā)出具有實時及壽命分辨功能的內(nèi)窺鏡,并對離體膀胱樣品進(jìn)行測試,得到了黃素分子的自體熒光壽命圖像。熒光壽命成像技術(shù)有兩種:時間域和頻率域。
熒光壽命是熒光分子在激發(fā)態(tài)停留的時間,這個時間可以反映熒光分子的內(nèi)在屬性和所處的微環(huán)境,是一個很有用的工具。以往,熒光壽命的測量和計算是件非常復(fù)雜和耗時的工作,只有少數(shù)專業(yè)的科學(xué)家關(guān)注和使用該工具。傳統(tǒng)的多色成像實驗根據(jù)光譜差異來設(shè)計,會有串色等限制,而且需要多次采集圖像,會造成樣品的光損傷。通過熒光壽命來進(jìn)行成像,只需要拍攝一次就完成圖像采集,不但減少了成像時間,而且降低了激光對樣品的損傷。熒光壽命成像使用簡單,方便快捷,不需要進(jìn)行參數(shù)調(diào)節(jié)。熒光壽命成像可以提供有關(guān)電信號變化、離子和氧含量、溫度、細(xì)胞或其環(huán)境中的 pH 值的定量信息。湖南熒光壽命成像制造
熒光壽命成像可用于多種生物應(yīng)用,包括組織表面掃描、組織類型繪圖、光動力治理、皮膚成像等。湖南熒光壽命成像制造
熒光壽命成像可以應(yīng)用到個性化化療:要針對患者所患的特殊病癥,找到較有效的抗病藥物至關(guān)重要。但是,病細(xì)胞對不同類型藥物的反應(yīng)并不是完全可預(yù)測的。因此,進(jìn)行活檢,將細(xì)胞培養(yǎng)并用不同的藥物處理。同時,它們被FLIM重復(fù)成像。熒光壽命表明治理后細(xì)胞代謝狀態(tài)的早期改變。因此,通過這些測量,只需幾天即可確定較有效的藥物。熒光壽命成像將時域多指數(shù)衰減分析與相量圖相結(jié)合。時域中熒光衰減的測量需要短的激發(fā)脈沖和快速的檢測電路。樣品中的每個點都被依次激勵。使用時域方法,壽命是從對衰減數(shù)據(jù)的指數(shù)擬合得出的。湖南熒光壽命成像制造
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