熒光分析和成像技術(shù)因具有非常高的靈敏度和分子特異性而普遍的應(yīng)用于生物物理、生物化學(xué)、醫(yī)學(xué)、物理、化學(xué)等領(lǐng)域，利用熒光光譜技術(shù)和熒光顯微技術(shù)可以分析樣品中熒光團(tuán)的組分和分布。不過，由于熒光分析技術(shù)大多是基于熒光強(qiáng)度的測量，容易受到激發(fā)光強(qiáng)度、樣品濃度淬滅、熒光染料的分布濃度等因素的影響。熒光壽命通常來講是一定的，不受激發(fā)光強(qiáng)度、熒光團(tuán)濃度等因素的影響，只只與熒光團(tuán)所處的微環(huán)境有關(guān)，因此，利用熒光壽命顯微鏡（Fluorescence lifetime imaging microscopy, FLIM）對樣品進(jìn)行熒光壽命成像，可以對樣品所在的微環(huán)境中的許多物理參數(shù)如氧壓、溶液疏水性等及生物化學(xué)參數(shù)如pH值、離子濃度等進(jìn)行定量測量。此外，熒光壽命成像技術(shù)還可以同時獲得分子狀態(tài)和空間分布的信息。在種類繁多的顯微技術(shù)中，熒光壽命顯微成像技術(shù)被普遍地應(yīng)用于生物學(xué)研究及臨床診斷等領(lǐng)域。天津三維熒光壽命成像使用步驟

熒光壽命成像和生物發(fā)光的異同點(diǎn)是什么？生物發(fā)光與熒光壽命成像不同點(diǎn)：產(chǎn)生光子的原理不同，類似于我們都是通過肉眼去觀察螢火蟲和發(fā)光水母一樣，生物發(fā)光與熒光成像在本質(zhì)上，都是機(jī)體中特定的細(xì)胞或材料發(fā)出光子，被高靈敏度的CCD檢測到形成圖像，但是生物發(fā)光與熒光壽命成像產(chǎn)生光子的過程和機(jī)制是完全不同的。生物發(fā)光與熒光成像相同點(diǎn)：都需要對細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記。生物發(fā)光產(chǎn)生的光子和熒光壽命成像產(chǎn)生的光子都可以被高靈敏的CCD檢測并形成圖像，就像一個人的眼睛就可以既看到螢火蟲又可以看到發(fā)光水母一樣。除此之外，生物發(fā)光和熒光壽命成像都需要對目標(biāo)細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記，讓細(xì)胞產(chǎn)生熒光素酶或者熒光蛋白。重慶開放式熒光壽命成像研發(fā)熒光壽命顯微成像是熒光壽命測量和熒光顯微技術(shù)的結(jié)合。

熒光壽命成像 (FLIM)通過建立檢測到的熒光事件的直方圖來確定壽命?？娠@示單指數(shù)或多指數(shù)熒光衰減。數(shù)值曲線擬合表示熒光壽命和振幅（即檢測到的光子數(shù)）。由于FRET減少了供體壽命，因此如果無FRET的供體壽命已知，就可以量化FRET發(fā)生的程度。該供體壽命τ作為分析FRET樣品的一定參考。因此，F(xiàn)LIM-FRET為內(nèi)部參照—這一特點(diǎn)減少了基于強(qiáng)度測量FRET時的很多缺點(diǎn)。由于其熒光壽命是染料的固有特性，因此對其他不利影響（如光漂白、圖像明暗處理、不同濃度或表達(dá)水平）具有普遍的不變性。使用基于強(qiáng)度的FRET測量的主要限制是所有可觀察的供體分子都經(jīng)歷FRET的基本假設(shè)。通常情況并非如此。供體分子這種變化的“非結(jié)合”組分給測量的FRET效率帶來了相當(dāng)大的不確定性，使得無法在實(shí)驗(yàn)之間進(jìn)行比較。熒光壽命成像克服了這一缺點(diǎn)。

熒光壽命成像FLIM相比于熒光強(qiáng)度成像更有優(yōu)勢。通過熒光強(qiáng)度成像可以獲得熒光分子的空間分布，較為直接和簡便，但是當(dāng)熒光分子具有相似的頻譜特性，或是同樣的熒光分子在不同環(huán)境下時，依賴強(qiáng)度進(jìn)行成像的方案便無法準(zhǔn)確反映信息。與基于光強(qiáng)的成像方式不同，熒光壽命成像FLIM適用于測量熒光分子環(huán)境的變化，或是測量分子的運(yùn)動情況。其結(jié)果與熒光分子濃度無關(guān)，且不受影響光強(qiáng)的光散射或是光吸收影響，可以精確測量熒光淬滅過程，對生物分子微環(huán)境進(jìn)行定量測量。熒光壽命成像這種技術(shù)相對較新，涉及到同時在圖像的每個像素處確定熒光衰減時間的空間分布。

熒光壽命成像技術(shù)實(shí)時監(jiān)控納米顆粒在細(xì)胞內(nèi)的穩(wěn)定性：利用熒光壽命成像顯微鏡技術(shù)可實(shí)現(xiàn)可以實(shí)時監(jiān)控發(fā)光納米顆粒在活細(xì)胞內(nèi)的穩(wěn)定性。熒光壽命成像不但具有其它熒光顯微鏡所具有的高靈敏度、可檢測人體生物樣品等優(yōu)點(diǎn)，它在監(jiān)控?zé)晒饧{米材料的穩(wěn)定性上還具有以下幾個優(yōu)勢：（1）熒光壽命不受熒光探針的濃度的影響，可排除納米材料的胞吐及細(xì)胞分化導(dǎo)致的納米顆粒的稀釋等對測量的影響；（2）很多常見的發(fā)光材料的熒光壽命都遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于細(xì)胞的自熒光的壽命，很易去除生物自熒光對熒光成像的干擾；（3）發(fā)光材料的熒光壽命和其材料的穩(wěn)定性密切相關(guān)，熒光壽命的改變可以靈敏地反映相應(yīng)材料的化學(xué)穩(wěn)定性。熒光壽命成像技術(shù)有兩種：時間域和頻率域。重慶開放式熒光壽命成像研發(fā)

熒光壽命成像系統(tǒng)是一種用于化學(xué)領(lǐng)域的分析儀器。天津三維熒光壽命成像使用步驟

熒光壽命是熒光團(tuán)在發(fā)射熒光光子返回基態(tài)之前保持其激發(fā)態(tài)的平均時間長度。這取決于熒光團(tuán)的分子組成和納米環(huán)境。熒光壽命成像將壽命測量與成像相結(jié)合：對每個圖像像素以測得的熒光壽命進(jìn)行顏色編碼，產(chǎn)生額外的圖像反差。因此，熒光壽命成像可以提供關(guān)于熒光分子空間分布的信息和有關(guān)其生化狀態(tài)或納米環(huán)境的信息。有很多技術(shù)可以在顯微鏡環(huán)境中檢測熒光壽命。常見的的是基于供體（受體光漂白，F(xiàn)RET AB）或受體（敏化發(fā)射，F(xiàn)RET SE）熒光強(qiáng)度的技術(shù)。天津三維熒光壽命成像使用步驟

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