熒光壽命成像可以提供熒光強(qiáng)度（光子數(shù)）和光子壽命的空間分布，具有200 nm的空間分辨率和皮秒量級(jí)的時(shí)間分辨率。通過(guò)雙光子激發(fā)（結(jié)合飛秒脈沖和共焦顯微鏡）可以直接檢測(cè)熒光和時(shí)間分辨的熒光壽命。這種無(wú)損檢測(cè)技術(shù)，無(wú)需解剖或?qū)ｉT制造分層樣品，不但可在樣品表面，還可在樣品表面以下實(shí)現(xiàn)深度解析測(cè)量。特別適用于新材料、光子學(xué)、光伏、光催化、生物材料、納米材料和納米復(fù)合材料以及其相關(guān)的原理探究和設(shè)計(jì)優(yōu)化。熒光壽命成像圖像中每一個(gè)像素點(diǎn)在phasor圖上都有一個(gè)對(duì)應(yīng)的點(diǎn)。因此我們可以獲取每個(gè)像素點(diǎn)的壽命信息，也可以獲知每一壽命所對(duì)應(yīng)的圖像區(qū)域。不同熒光基團(tuán)激發(fā)態(tài)停時(shí)間不同，大多數(shù)生物熒光素的熒光壽命時(shí)間在 0.2 - 20 ns。佛山化學(xué)熒光壽命成像使用方法

熒光壽命可以在頻域或者時(shí)間域測(cè)量。時(shí)間域測(cè)量方法涉及用短光脈沖照射樣品（比色皿、細(xì)胞或組織），然后隨時(shí)間測(cè)量發(fā)射強(qiáng)度。FLT由衰減曲線的斜率確定。有幾種熒光檢測(cè)方法可用于壽命測(cè)量，其中時(shí)間相關(guān)單光子計(jì)數(shù)（TCSPC）可實(shí)現(xiàn)簡(jiǎn)單的數(shù)據(jù)收集和增強(qiáng)的定量光子計(jì)數(shù)。頻域方法涉及高頻率入射光的正弦調(diào)制。在該方法中，發(fā)射發(fā)生在與入射光相同的頻率處，并且隨著激發(fā)光兼有相位延遲和振幅的變化（解調(diào)）。壽命測(cè)量不需要波長(zhǎng)比率探針來(lái)提供眾多分析物的定量測(cè)定。壽命法通過(guò)使用光譜位移探針擴(kuò)展了分析物濃度范圍的靈敏度。壽命測(cè)量可用于沒(méi)有直接探針的分析物。包括葡萄糖、抗原或基于熒光能量轉(zhuǎn)移轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制的任何親和力或免疫測(cè)定。佛山化學(xué)熒光壽命成像使用方法熒光壽命成像(FLIM)可用于測(cè)量分子環(huán)境參數(shù)。

熒光壽命成像FLIM相比于熒光強(qiáng)度成像更有優(yōu)勢(shì)。通過(guò)熒光強(qiáng)度成像可以獲得熒光分子的空間分布，較為直接和簡(jiǎn)便，但是當(dāng)熒光分子具有相似的頻譜特性，或是同樣的熒光分子在不同環(huán)境下時(shí)，依賴強(qiáng)度進(jìn)行成像的方案便無(wú)法準(zhǔn)確反映信息。與基于光強(qiáng)的成像方式不同，熒光壽命成像FLIM適用于測(cè)量熒光分子環(huán)境的變化，或是測(cè)量分子的運(yùn)動(dòng)情況。其結(jié)果與熒光分子濃度無(wú)關(guān)，且不受影響光強(qiáng)的光散射或是光吸收影響，可以精確測(cè)量熒光淬滅過(guò)程，對(duì)生物分子微環(huán)境進(jìn)行定量測(cè)量。

熒光壽命成像和生物發(fā)光的異同點(diǎn)是什么？生物發(fā)光與熒光壽命成像不同點(diǎn)：產(chǎn)生光子的原理不同，類似于我們都是通過(guò)肉眼去觀察螢火蟲和發(fā)光水母一樣，生物發(fā)光與熒光成像在本質(zhì)上，都是機(jī)體中特定的細(xì)胞或材料發(fā)出光子，被高靈敏度的CCD檢測(cè)到形成圖像，但是生物發(fā)光與熒光壽命成像產(chǎn)生光子的過(guò)程和機(jī)制是完全不同的。生物發(fā)光與熒光成像相同點(diǎn)：都需要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記。生物發(fā)光產(chǎn)生的光子和熒光壽命成像產(chǎn)生的光子都可以被高靈敏的CCD檢測(cè)并形成圖像，就像一個(gè)人的眼睛就可以既看到螢火蟲又可以看到發(fā)光水母一樣。除此之外，生物發(fā)光和熒光壽命成像都需要對(duì)目標(biāo)細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記，讓細(xì)胞產(chǎn)生熒光素酶或者熒光蛋白。熒光壽命成像有潛力應(yīng)用于瘤識(shí)別，病變?cè)\斷等領(lǐng)域。

熒光壽命成像技術(shù)及其在生物醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用：熒光分子的壽命就像熒光分子的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜一樣是熒光分子的固有特性，隨著近年來(lái)對(duì)蛋白及分子功能研究的不斷深入，科研工作者除對(duì)多色成像、鈣成像等功能成像的需求日漸增多之外，對(duì)熒光壽命成像的需求也逐漸增加，而熒光壽命成像能提供除熒光強(qiáng)度、熒光光譜信息之外的熒光分子的壽命信息，可用于分子間相互作用（FRET）、分子所處微環(huán)境的離子濃度（如Ca2+、pH）及細(xì)胞代謝水平的改變等測(cè)量，并可拆分光譜重疊的熒光染料及染料和自發(fā)熒光，還可以結(jié)合熒光相關(guān)光譜對(duì)單分子實(shí)現(xiàn)熒光壽命相關(guān)光譜FLCS的測(cè)量。熒光壽命成像擴(kuò)展了傳統(tǒng)熒光成像的維度，是功能成像的理想工具，在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域有廣闊的應(yīng)用前景。影響熒光壽命成像測(cè)量的因素有哪些？珠海分子熒光壽命成像哪里有

熒光壽命成像可以體現(xiàn)熒光物質(zhì)形貌信息。佛山化學(xué)熒光壽命成像使用方法

熒光壽命成像中的熒光壽命及其含義：假定一個(gè)無(wú)限窄的脈沖光(δ函數(shù))激發(fā)n0個(gè)熒光分子到其激發(fā)態(tài)，處于激發(fā)態(tài)的分子將通過(guò)輻射或非輻射躍遷返回基態(tài)。假定兩種衰減躍遷速率分別為Γ和knr，則激發(fā)態(tài)衰減速率可表示為：其中n(t)表示時(shí)間t時(shí)激發(fā)態(tài)分子的數(shù)目，由此可得到激發(fā)態(tài)物種的單指數(shù)衰減方程。熒光壽命定義為衰減總速率的倒數(shù)：熒光強(qiáng)度正比于衰減的激發(fā)態(tài)分子數(shù)，因此可將上式改寫為：其中I0是時(shí)間為零時(shí)的熒光強(qiáng)度，τ為熒光壽命。也就是說(shuō)熒光強(qiáng)度衰減到初始強(qiáng)度的1/e時(shí)所需要的時(shí)間就是該熒光物種在測(cè)定條件下的熒光壽命。實(shí)際上用熒光強(qiáng)度的對(duì)數(shù)對(duì)時(shí)間作圖，直線斜率即為熒光壽命倒數(shù)的負(fù)值。熒光壽命也可以理解為熒光物種在激發(fā)態(tài)的統(tǒng)計(jì)平均停留時(shí)間。事實(shí)上當(dāng)熒光物質(zhì)被激發(fā)后有些激發(fā)態(tài)分子立即返回基態(tài)，有的甚至可以延遲到5倍于熒光壽命時(shí)才返回基態(tài)，這樣就形成了實(shí)驗(yàn)測(cè)定的熒光強(qiáng)度衰減曲線。佛山化學(xué)熒光壽命成像使用方法

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