在種類繁多的顯微技術(shù)中,熒光壽命顯微成像技術(shù)(FLIM)具有對生物大分子結(jié)構(gòu)、動力學信息和分子環(huán)境等進行高分辨高精度測量的能力,因此其重要性日漸提升,被普遍地應(yīng)用于生物學研究及臨床診斷等領(lǐng)域。熒光的特性包含有:熒光激發(fā)和發(fā)射光譜、熒光強度、量子效率、熒光壽命等,其中,熒光壽命是指熒光分子在激發(fā)態(tài)上存在的平均時間(納秒量級)。分子的熒光壽命在幾納秒至幾百納秒之間,因此,測量熒光壽命需要極快響應(yīng)時間的探測器。熒光壽命成像的發(fā)展很好地彌補了基于強度成像的問題,對生物醫(yī)學檢測有著重要的意義。熒光壽命成像(FLIM)對細胞信號傳導及調(diào)控,蛋白間的相互作用等生物研究發(fā)揮著很大作用。湖南開放式熒光壽命成像哪家好
熒光壽命成像開始用于組織體的在體成像,與傳統(tǒng)的使用熒光強度和光譜信息作為鑒別組織異常的成像方式相比,壽命成像提供了更多的生化診斷信息。熒光壽命成像已用于骨骼和牙齒的診斷。另外,采用多光子激發(fā)可顯著提高組織體的成像深度,如對人體皮膚自體熒光進行多光子激發(fā)熒光壽命成像,成像深度達200 um,組織體的熒光壽命分布揭示了細胞代謝狀態(tài)的變化,可用于對皮膚病的診斷。對腔體中瘤的早期臨床診斷,已開發(fā)出具有實時及壽命分辨功能的內(nèi)窺鏡,并對離體膀胱樣品進行測試,得到了黃素分子的自體熒光壽命圖像。佛山單分子熒光壽命成像售價不同熒光基團激發(fā)態(tài)停時間不同,大多數(shù)生物熒光素的熒光壽命時間在 0.2 - 20 ns。
熒光壽命成像(FLI):這種技術(shù)相對較新,涉及到同時在圖像的每個像素處確定熒光衰減時間的空間分布。它基于熒光團的熒光壽命取決于其分子環(huán)境而并非濃度的事實。它可以用于無法控制局部探針濃度的熒光顯微鏡中。熒光壽命成像(FLIM)可用于測量分子環(huán)境參數(shù),通過熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)進行的蛋白質(zhì)相互作用,并可以通過細胞和組織的自發(fā)熒光來測量其代謝狀態(tài)。分子環(huán)境參數(shù)可以通過因熒光淬滅或熒光團的構(gòu)象變化而引起的壽命變化來測量。FLIM可用于多種生物應(yīng)用,包括組織表面掃描、組織類型繪圖、光動力治理、DNA芯片分析、皮膚成像等。
熒光壽命成像FLIM相比于熒光強度成像更有優(yōu)勢。通過熒光強度成像可以獲得熒光分子的空間分布,較為直接和簡便,但是當熒光分子具有相似的頻譜特性,或是同樣的熒光分子在不同環(huán)境下時,依賴強度進行成像的方案便無法準確反映信息。與基于光強的成像方式不同,熒光壽命成像FLIM適用于測量熒光分子環(huán)境的變化,或是測量分子的運動情況。其結(jié)果與熒光分子濃度無關(guān),且不受影響光強的光散射或是光吸收影響,可以精確測量熒光淬滅過程,對生物分子微環(huán)境進行定量測量。熒光壽命成像技術(shù)是一種在顯微尺度下展現(xiàn)熒光壽命空間分布的技術(shù)。
熒光壽命成像(FLIM)的方法特別適合于體內(nèi)診斷,因為它們是無創(chuàng)且無損的。因此,它們被普遍用于受試者的臨床研究和醫(yī)學檢查。例如,該技術(shù)可以用于以下領(lǐng)域:皮膚的體內(nèi)診斷:人類皮膚的多光子擴散層析成像結(jié)合了雙光子激發(fā)和非解掃檢測,因此,多光子FLIM可以提供組織層的光學切片圖像,深度可達100 μm。人皮膚細胞的體內(nèi)雙光子成像是可能的,而不會損害組織的活力,可以從亞細胞分辨率重建三維結(jié)構(gòu)。眼科檢查:眼科FLIM結(jié)合了快速光束掃描和皮秒二極管激光器激發(fā)的功能。該方法非常靈敏,可以記錄人眼眼底(背景)的壽命圖像。通過這種方式,有可能及早發(fā)現(xiàn)眼部疾病,因為這些疾病通常伴隨著眼底的代謝變化。反過來,這些引起內(nèi)源性熒光團的熒光衰減參數(shù)的變化。熒光壽命成像具有不同于熒光強度成像的眾多優(yōu)點;佛山多色熒光壽命成像哪里有賣
熒光壽命成像有潛力應(yīng)用于瘤識別,病變診斷等領(lǐng)域。湖南開放式熒光壽命成像哪家好
熒光壽命成像技術(shù)有兩種:時間域和頻率域。(1)時域FLIM:需要脈沖光源,所以一般在雙光子的系統(tǒng)上比較常見FLIM(熒光壽命成像Fluorescence Life-time imaging Microcopy簡稱FLIM),理由一是激光是脈沖的,二是買雙光子的老師一般也搭配一個FLIM。(2)頻域FLIM:需要一個相位調(diào)制的光源,有用LED調(diào)制的。熒光壽命成像FLIM的應(yīng)用:1)細胞體自身熒光壽命分析;2)自身熒光相對熒光標記的有效區(qū)分;3)具有相同頻譜性質(zhì)的不同熒光標記的區(qū)分;4)活細胞內(nèi)水介質(zhì)的PH值測量;5)局部氧氣濃度測量;6)活細胞內(nèi)鈣濃度測量;7)時間分辨Forster共振能量轉(zhuǎn)移(FRET):納米級尺度上的遠程測量,環(huán)境敏感的FRET探針定量測量。湖南開放式熒光壽命成像哪家好
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