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熒光壽命成像顯微技術(shù)已在生命科學(xué),臨床熒光壽命領(lǐng)域中得到了普遍的應(yīng)用。成像,擴(kuò)散光學(xué)層析成像,熒光相關(guān)光譜等等。使用我們專(zhuān)有的多維時(shí)間相關(guān)單光子計(jì)數(shù)技術(shù)(TCSPC),我們的FLIM和TCSPC系統(tǒng)具有超高光子效率的特點(diǎn)。因此,科學(xué)家,醫(yī)生,研究人員和其他用戶(hù)能夠進(jìn)行TCSPC FLIM顯微鏡檢查,多波長(zhǎng)FLIM,同時(shí)FLIM和快速獲取FLIM。生命科學(xué)是我們熒光壽命成像顯微(FLIM)設(shè)備的主要應(yīng)用領(lǐng)域。我們的技術(shù)經(jīng)常用于以下領(lǐng)域:分子影像學(xué)、代謝成像、FRET成像、同時(shí)進(jìn)行NAD(P)H和pO2成像。熒光壽命成像不受染料濃度的影響;上海開(kāi)放式熒光壽命成像原理
時(shí)域法熒光壽命的測(cè)量和熒光壽命成像主要有時(shí)間相關(guān)單光子計(jì)數(shù)法(time correlated single photon counting, TCSPC)、門(mén)控探測(cè)法(time-gated detection)、條紋相機(jī)測(cè)量法(streak-FLIM)、頻閃技術(shù)等四種常見(jiàn)的方法。TCSPC是目前測(cè)量熒光壽命的主要技術(shù),同軸脈沖光源發(fā)出的脈沖光引起起始光電倍增管產(chǎn)生電信號(hào),該信號(hào)通過(guò)恒分信號(hào)甄別器1啟動(dòng)時(shí)幅轉(zhuǎn)換器(time-amplitude converter,TAC),時(shí)幅轉(zhuǎn)換器產(chǎn)生一個(gè)隨時(shí)間線(xiàn)性增長(zhǎng)的電壓信號(hào)。此外,同軸脈沖光源發(fā)出的脈沖光通過(guò)激發(fā)單色器后到達(dá)樣品池,樣品產(chǎn)生的熒光信號(hào)再經(jīng)過(guò)發(fā)射單色器到達(dá)終止光電倍增管,由此產(chǎn)生的電信號(hào)經(jīng)由恒分信號(hào)甄別器2到達(dá)時(shí)幅轉(zhuǎn)換器并使其停止工作。此時(shí),時(shí)幅轉(zhuǎn)換器根據(jù)累積電壓輸出一個(gè)數(shù)字信號(hào)并在多通道分析儀(multi-channel analyzer)的相應(yīng)時(shí)間通道計(jì)入一個(gè)信號(hào),表明檢測(cè)到壽命為該時(shí)間的一個(gè)光子。經(jīng)過(guò)幾十萬(wàn)次的重復(fù)后,不同的時(shí)間通道累積下來(lái)的光子數(shù)目不相同。上海多色熒光壽命成像哪個(gè)品牌好熒光壽命是熒光基團(tuán)在通過(guò)發(fā)射熒光光子返回基態(tài)之前在其激發(fā)態(tài)下保持平均多長(zhǎng)時(shí)間的量度。
熒光壽命是熒光分子在激發(fā)態(tài)停留的時(shí)間,這個(gè)時(shí)間可以反映熒光分子的內(nèi)在屬性和所處的微環(huán)境,是一個(gè)很有用的工具。以往,熒光壽命的測(cè)量和計(jì)算是件非常復(fù)雜和耗時(shí)的工作,只有少數(shù)專(zhuān)業(yè)的科學(xué)家關(guān)注和使用該工具。傳統(tǒng)的多色成像實(shí)驗(yàn)根據(jù)光譜差異來(lái)設(shè)計(jì),會(huì)有串色等限制,而且需要多次采集圖像,會(huì)造成樣品的光損傷。通過(guò)熒光壽命來(lái)進(jìn)行成像,只需要拍攝一次就完成圖像采集,不但減少了成像時(shí)間,而且降低了激光對(duì)樣品的損傷。熒光壽命成像使用簡(jiǎn)單,方便快捷,不需要進(jìn)行參數(shù)調(diào)節(jié)。
熒光壽命成像系統(tǒng)是一種用于化學(xué)領(lǐng)域的分析儀器,熒光壽命成像可以在體現(xiàn)熒光物質(zhì)形貌信息之外,還能夠靈敏地反應(yīng)熒光基團(tuán)生化特性以及周?chē)h(huán)境的變化情況。將熒光壽命成像與共聚焦成像技術(shù)結(jié)合起來(lái),實(shí)現(xiàn)人體三維熒光壽命成像,進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)人體三維功能成像奠定基礎(chǔ),有潛力應(yīng)用于瘤識(shí)別,病變?cè)\斷等領(lǐng)域。熒光壽命是熒光基團(tuán)在通過(guò)發(fā)射熒光光子返回基態(tài)之前在其激發(fā)態(tài)下保持平均多長(zhǎng)時(shí)間的量度。不同熒光基團(tuán)激發(fā)態(tài)停時(shí)間不同,大多數(shù)生物熒光素的熒光壽命時(shí)間在 0.2 - 20 ns。熒光壽命檢測(cè)經(jīng)典方法為點(diǎn)對(duì)點(diǎn)的時(shí)間相關(guān)單光子計(jì)數(shù)(TCSPC),但由于過(guò)去檢測(cè)硬件的局限和復(fù)雜的使用而沒(méi)有被普遍地應(yīng)用于科學(xué)研究。隨著技術(shù)的發(fā)展,在顯微鏡視野內(nèi)進(jìn)行超快速全像素?zé)晒鈮勖盘?hào)采集的熒光壽命成像成為可能。熒光壽命成像是一種重要的熒光顯微鏡技術(shù)。
熒光分析和成像技術(shù)因具有非常高的靈敏度和分子特異性而普遍的應(yīng)用于生物物理、生物化學(xué)、醫(yī)學(xué)、物理、化學(xué)等領(lǐng)域,利用熒光光譜技術(shù)和熒光顯微技術(shù)可以分析樣品中熒光團(tuán)的組分和分布。不過(guò),由于熒光分析技術(shù)大多是基于熒光強(qiáng)度的測(cè)量,容易受到激發(fā)光強(qiáng)度、樣品濃度淬滅、熒光染料的分布濃度等因素的影響。熒光壽命通常來(lái)講是一定的,不受激發(fā)光強(qiáng)度、熒光團(tuán)濃度等因素的影響,只只與熒光團(tuán)所處的微環(huán)境有關(guān),因此,利用熒光壽命顯微鏡(Fluorescence lifetime imaging microscopy, FLIM)對(duì)樣品進(jìn)行熒光壽命成像,可以對(duì)樣品所在的微環(huán)境中的許多物理參數(shù)如氧壓、溶液疏水性等及生物化學(xué)參數(shù)如pH值、離子濃度等進(jìn)行定量測(cè)量。此外,熒光壽命成像技術(shù)還可以同時(shí)獲得分子狀態(tài)和空間分布的信息。熒光壽命成像主要通過(guò)TCSPC技術(shù)實(shí)現(xiàn)。深圳顯微熒光壽命成像要多少錢(qián)
影響熒光壽命成像測(cè)量的因素有哪些?上海開(kāi)放式熒光壽命成像原理
熒光壽命(FLT)是熒光團(tuán)在發(fā)射光子并返回基態(tài)之前花費(fèi)在激發(fā)態(tài)的時(shí)間。根據(jù)熒光基團(tuán)的不同,F(xiàn)LT可以從皮秒到數(shù)百納秒不等。熒光團(tuán)群的壽命是指經(jīng)熒光或非輻射過(guò)程的能量損失后,激發(fā)態(tài)分子數(shù)量以指數(shù)方式衰減到原始數(shù)量的N / e(36.8%)的時(shí)間。熒光壽命是熒光團(tuán)的固有屬性。FLT不依賴(lài)于熒光團(tuán)濃度、樣品吸收、樣品厚度、測(cè)量方法、熒光強(qiáng)度、光漂白和/或激發(fā)強(qiáng)度。它受外部因素影響,如溫度、極性和熒光淬滅劑的存在。熒光壽命對(duì)依賴(lài)于熒光團(tuán)結(jié)構(gòu)的內(nèi)部因素敏感。上海開(kāi)放式熒光壽命成像原理
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