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遼寧三維熒光壽命成像怎么用

來源: 發(fā)布時間:2022-07-31

熒光壽命成像和生物發(fā)光的異同點是什么?生物發(fā)光與熒光壽命成像不同點:產生光子的原理不同,類似于我們都是通過肉眼去觀察螢火蟲和發(fā)光水母一樣,生物發(fā)光與熒光成像在本質上,都是機體中特定的細胞或材料發(fā)出光子,被高靈敏度的CCD檢測到形成圖像,但是生物發(fā)光與熒光壽命成像產生光子的過程和機制是完全不同的。生物發(fā)光與熒光成像相同點:都需要對細胞進行標記。生物發(fā)光產生的光子和熒光壽命成像產生的光子都可以被高靈敏的CCD檢測并形成圖像,就像一個人的眼睛就可以既看到螢火蟲又可以看到發(fā)光水母一樣。除此之外,生物發(fā)光和熒光壽命成像都需要對目標細胞進行標記,讓細胞產生熒光素酶或者熒光蛋白。熒光壽命成像不受染料濃度的影響;遼寧三維熒光壽命成像怎么用

新技術和新概念的發(fā)展促進了數據評估,意味著熒光壽命成像(FLIM)的速度提高了10倍,可以媲美標準共聚焦成像,且操作簡單。熒光過程提供了兩個用于成像的測量參數:強度和熒光壽命。熒光壽命是指分子停留在激發(fā)態(tài)的時間??梢酝ㄟ^觀察足夠大量的激發(fā)-發(fā)射事件集中來測量熒光染料的典型壽命。我們可以測量圖像中所有像素的典型壽命,并將這些數字記入數組元素。那就是熒光壽命成像。典型的熒光壽命范圍在0.2到20納秒之間。熒光壽命與熒光染料的濃度無關。無論樣品結構只有零星熒光染料還是載滿熒光染料:壽命信號始終相同,并表明在同一環(huán)境中存在相同的熒光染料。因此,熒光壽命不受光漂白的影響。樣品深處的圖像將比表面圖像暗得多——但壽命并沒有改變。這是壽命測定的主要優(yōu)勢。遼寧開放式熒光壽命成像有哪些熒光壽命取決于熒光分子所處的微環(huán)境,通過對樣品熒光壽命的測量和成像可以定量獲取樣品的功能信息。

與熒光光譜一樣,熒光壽命也是熒光物質的一種內在特有性質,不受熒光物質濃度、激發(fā)光強度等因素的影響。熒光壽命成像能在不受熒光強度影響因素影響的條件下,在納米分辨率水平對蛋白互作進行研究,或者通過 FRET 探針研究分子環(huán)境變化,更重要的是其測量數據準確性高、易重復。通過熒光壽命成像還可以對樣本所處的微環(huán)境進行檢測、對樣品組份進行分離等等。在傳統的熒光強度和熒光光譜兩個維度的基礎上,又增加了熒光壽命這一新的成像維度,大幅度拓展了該系統的應用范圍。

熒光壽命成像顯微術(FLIM)是一種利用熒光染料固有特性的成像技術。除了具有特有的發(fā)射光譜外,每個熒光分子還有特有的壽命,它反映了熒光基團在發(fā)射光子之前處于激發(fā)態(tài)的時間。除了標準的熒光強度測量外,壽命分析還可以提供其他信息。過去,壽命成像一直是一種緩慢、復雜的專業(yè)化技術。只有經驗豐富的顯微鏡**或物理學家才會使用這種技術。熒光壽命成像提供了額外的信息,有助提高共聚焦成像的質量。它非常適合用于區(qū)分熒光發(fā)射光譜重疊的熒光探針,或消除不需要的背景熒光信號。熒光壽命成像可以用于無法控制局部探針濃度的熒光顯微鏡中。

在使用TCSPC測量熒光壽命的過程中,需要調節(jié)樣品的熒光強度,確保每次激發(fā)后較多只有一個熒光光子到達終止光電倍增管。TCSPC方法的突出優(yōu)點是靈敏度高、測量結果準確、系統誤差小。采用該技術對樣品進行熒光壽命成像時,必須逐點測量樣品的熒光壽命,而每一點的測量時間又比較長,因此,通常認為該技術不太適合熒光壽命測量。不過,近年來,隨著TCSPC技術和固體超快激光技術的發(fā)展,TCSPC技術已具備快速測量熒光壽命的條件。通過與激光共聚焦顯微鏡的結合,可以對樣品進行熒光壽命成像的測量。熒光壽命成像系統是一種用于化學領域的分析儀器。廣東動物熒光壽命成像哪里有賣

熒光壽命成像擴展了傳統熒光成像的維度,是功能成像的理想工具;遼寧三維熒光壽命成像怎么用

在基于時間相關單光子計數的熒光壽命成像實驗中,通過選用超快激光器可以優(yōu)化脈沖持續(xù)時間,單光子探測器和時間數字轉換器的時間抖動則成為制約時間分辨率的關鍵參數。熒光壽命成像可進行高質量的多色成像實驗或實現STED、PALM/STORM等超分辨率熒光顯微成像。目前TCSPC是主要應用的熒光壽命測定技術。熒光壽命通常在ps~us量級,在如此短的時間量級上進行測量,它是較為成熟準確的測試手段。TCSPC的工作原理是使用一個同步信號源驅動激光器,出射光脈沖照射樣品池,在利用光子探測裝置(多為PMT)對熒光信號進行探測,每一個光子計數信號在FT1010中都會落入一個對應的時間窗口,經過一定時間的統計疊加后即得到熒光壽命曲線。幾十萬次重復以后,不同的時間通道累積下來的光子數目不同。遼寧三維熒光壽命成像怎么用

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