熒光壽命成像技術(shù)及其在生物醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用：熒光分子的壽命就像熒光分子的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜一樣是熒光分子的固有特性，隨著近年來對蛋白及分子功能研究的不斷深入，科研工作者除對多色成像、鈣成像等功能成像的需求日漸增多之外，對熒光壽命成像的需求也逐漸增加，而熒光壽命成像能提供除熒光強度、熒光光譜信息之外的熒光分子的壽命信息，可用于分子間相互作用（FRET）、分子所處微環(huán)境的離子濃度（如Ca2+、pH）及細(xì)胞代謝水平的改變等測量，并可拆分光譜重疊的熒光染料及染料和自發(fā)熒光，還可以結(jié)合熒光相關(guān)光譜對單分子實現(xiàn)熒光壽命相關(guān)光譜FLCS的測量。熒光壽命成像擴展了傳統(tǒng)熒光成像的維度，是功能成像的理想工具，在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域有廣闊的應(yīng)用前景。熒光壽命成像不需要考慮跳色的影響，從而免去了計算和去除跳色雜質(zhì)信號的麻煩；生物熒光壽命成像怎么操作

熒光壽命成像（FLI）：這種技術(shù)相對較新，涉及到同時在圖像的每個像素處確定熒光衰減時間的空間分布。它基于熒光團的熒光壽命取決于其分子環(huán)境而并非濃度的事實。它可以用于無法控制局部探針濃度的熒光顯微鏡中。熒光壽命成像(FLIM)可用于測量分子環(huán)境參數(shù)，通過熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)進行的蛋白質(zhì)相互作用，并可以通過細(xì)胞和組織的自發(fā)熒光來測量其代謝狀態(tài)。分子環(huán)境參數(shù)可以通過因熒光淬滅或熒光團的構(gòu)象變化而引起的壽命變化來測量。FLIM可用于多種生物應(yīng)用，包括組織表面掃描、組織類型繪圖、光動力治理、DNA芯片分析、皮膚成像等。福建動物熒光壽命成像怎么樣市場上熒光壽命的測量方式可分為時域法和頻域法。

在種類繁多的顯微技術(shù)中，熒光壽命顯微成像技術(shù)（FLIM）具有對生物大分子結(jié)構(gòu)、動力學(xué)信息和分子環(huán)境等進行高分辨高精度測量的能力，因此其重要性日漸提升，被普遍地應(yīng)用于生物學(xué)研究及臨床診斷等領(lǐng)域。熒光的特性包含有：熒光激發(fā)和發(fā)射光譜、熒光強度、量子效率、熒光壽命等,其中，熒光壽命是指熒光分子在激發(fā)態(tài)上存在的平均時間（納秒量級）。分子的熒光壽命在幾納秒至幾百納秒之間，因此，測量熒光壽命需要極快響應(yīng)時間的探測器。熒光壽命成像的發(fā)展很好地彌補了基于強度成像的問題，對生物醫(yī)學(xué)檢測有著重要的意義。

熒光壽命成像在生物醫(yī)學(xué)研究和臨床診斷應(yīng)用中的許多場合都對多光譜分辨提出特殊要求，如在FRET測量中，要求能同時測量供體和受體的熒光強度隨時間的衰減，多光譜分辨的熒光壽命成像提供了一種新的定量研究手段．目前，基于門控像增強器的多光譜寬場FLIM 技術(shù)一次只能獲得至多兩個譜段的熒光壽命圖像，而基于TCSPC的多光譜分辨FLIM的成像速度又很低，這些都限制了其應(yīng)用范圍．目前的一個研究方向是，發(fā)展光譜分辨率高、成像速度快、價格低廉的多光譜分辨熒光壽命成像顯微技術(shù)。熒光壽命取決于熒光分子所處的微環(huán)境，通過對樣品熒光壽命的測量和成像可以定量獲取樣品的功能信息。

新技術(shù)和新概念的發(fā)展促進了數(shù)據(jù)評估，意味著熒光壽命成像(FLIM)的速度提高了10倍，可以媲美標(biāo)準(zhǔn)共聚焦成像，且操作簡單。熒光過程提供了兩個用于成像的測量參數(shù)：強度和熒光壽命。熒光壽命是指分子停留在激發(fā)態(tài)的時間?？梢酝ㄟ^觀察足夠大量的激發(fā)-發(fā)射事件集中來測量熒光染料的典型壽命。我們可以測量圖像中所有像素的典型壽命，并將這些數(shù)字記入數(shù)組元素。那就是熒光壽命成像。典型的熒光壽命范圍在0.2到20納秒之間。熒光壽命與熒光染料的濃度無關(guān)。無論樣品結(jié)構(gòu)只有零星熒光染料還是載滿熒光染料：壽命信號始終相同，并表明在同一環(huán)境中存在相同的熒光染料。因此，熒光壽命不受光漂白的影響。樣品深處的圖像將比表面圖像暗得多——但壽命并沒有改變。這是壽命測定的主要優(yōu)勢。熒光壽命成像技術(shù)是一種在顯微尺度下展現(xiàn)熒光壽命空間分布的技術(shù)。福建動物熒光壽命成像怎么樣

熒光壽命成像技術(shù)有兩種：時間域和頻率域。生物熒光壽命成像怎么操作

熒光壽命成像中的熒光壽命及其含義：假定一個無限窄的脈沖光(δ函數(shù))激發(fā)n0個熒光分子到其激發(fā)態(tài)，處于激發(fā)態(tài)的分子將通過輻射或非輻射躍遷返回基態(tài)。假定兩種衰減躍遷速率分別為Γ和knr，則激發(fā)態(tài)衰減速率可表示為：其中n(t)表示時間t時激發(fā)態(tài)分子的數(shù)目，由此可得到激發(fā)態(tài)物種的單指數(shù)衰減方程。熒光壽命定義為衰減總速率的倒數(shù)：熒光強度正比于衰減的激發(fā)態(tài)分子數(shù)，因此可將上式改寫為：其中I0是時間為零時的熒光強度，τ為熒光壽命。也就是說熒光強度衰減到初始強度的1/e時所需要的時間就是該熒光物種在測定條件下的熒光壽命。實際上用熒光強度的對數(shù)對時間作圖，直線斜率即為熒光壽命倒數(shù)的負(fù)值。熒光壽命也可以理解為熒光物種在激發(fā)態(tài)的統(tǒng)計平均停留時間。事實上當(dāng)熒光物質(zhì)被激發(fā)后有些激發(fā)態(tài)分子立即返回基態(tài)，有的甚至可以延遲到5倍于熒光壽命時才返回基態(tài)，這樣就形成了實驗測定的熒光強度衰減曲線。生物熒光壽命成像怎么操作

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