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廣州化學(xué)熒光壽命成像操作步驟

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2022-07-13

熒光壽命成像:作為熒光成像中除光譜和強(qiáng)度之外的新維度,當(dāng)前,熒光壽命成像主要應(yīng)用領(lǐng)域包括:用于樣品分離,如利用不同染料熒光壽命的差異將不同組織、正常與病變細(xì)胞等有效分離。熒光團(tuán)在光譜上非常相似(max 580 vs 573)無(wú)法分離,但它們?cè)跓晒鈮勖喜町惷黠@。作為生物傳感器,如評(píng)價(jià)藥物/理化條件對(duì)細(xì)胞的影響、Ca+震蕩等。充分拓展了壽光命成像的使用范圍,實(shí)現(xiàn)可相互驗(yàn)證的多維度樣品成像。實(shí)現(xiàn)真正的生物動(dòng)力學(xué)分析和功能成像。熒光壽命成像不受光漂白的影響。廣州化學(xué)熒光壽命成像操作步驟

新技術(shù)和新概念的發(fā)展促進(jìn)了數(shù)據(jù)評(píng)估,意味著熒光壽命成像(FLIM)的速度提高了10倍,可以媲美標(biāo)準(zhǔn)共聚焦成像,且操作簡(jiǎn)單。熒光過(guò)程提供了兩個(gè)用于成像的測(cè)量參數(shù):強(qiáng)度和熒光壽命。熒光壽命是指分子停留在激發(fā)態(tài)的時(shí)間??梢酝ㄟ^(guò)觀察足夠大量的激發(fā)-發(fā)射事件集中來(lái)測(cè)量熒光染料的典型壽命。我們可以測(cè)量圖像中所有像素的典型壽命,并將這些數(shù)字記入數(shù)組元素。那就是熒光壽命成像。典型的熒光壽命范圍在0.2到20納秒之間。熒光壽命與熒光染料的濃度無(wú)關(guān)。無(wú)論樣品結(jié)構(gòu)只有零星熒光染料還是載滿(mǎn)熒光染料:壽命信號(hào)始終相同,并表明在同一環(huán)境中存在相同的熒光染料。因此,熒光壽命不受光漂白的影響。樣品深處的圖像將比表面圖像暗得多——但壽命并沒(méi)有改變。這是壽命測(cè)定的主要優(yōu)勢(shì)。浙江植物熒光壽命成像怎么樣熒光壽命成像可以提供熒光強(qiáng)度(光子數(shù))和光子壽命的空間分布。

門(mén)控探測(cè)法適用于單組分熒光強(qiáng)度衰減的測(cè)量和熒光壽命成像。熒光壽命可通過(guò)在兩個(gè)不同延遲時(shí)刻開(kāi)啟的相同寬度的門(mén)內(nèi)記錄的熒光強(qiáng)度信息求得,通常情形下,在條件允許的情況下,采用多門(mén)控探測(cè),即選取多個(gè)窗口獲取多幅圖像(通常為5~10幅)來(lái)反演壽命圖像。一般使用門(mén)控微通道板像增強(qiáng)器(MCP Intensifier)或者增強(qiáng)型CCD(Intensified CCD)相機(jī),實(shí)現(xiàn)樣品的寬場(chǎng)(full-field)熒光壽命成像。通過(guò)在樣品受到超短光脈沖激發(fā)后的不同時(shí)刻(時(shí)間窗口)選通像增強(qiáng)器或CCD相機(jī),獲得一組熒光強(qiáng)度圖像,然后利用公式,逐點(diǎn)計(jì)算出樣品上各點(diǎn)的熒光壽命并成像。

熒光壽命顯微成像(Fluorescence lifetime imaging microscopy,FLIM)是熒光壽命測(cè)量和熒光顯微技術(shù)的結(jié)合,熒光壽命顯微成像具有高特異性、高靈敏度、可定量測(cè)量微環(huán)境變化和分子間相互作用、不受探針濃度、激發(fā)光強(qiáng)度和光漂白影響等優(yōu)點(diǎn)。在過(guò)去的十年中,光學(xué)技術(shù)硬件和軟件、材料科學(xué)和生物醫(yī)學(xué)的迅速發(fā)展,共同促進(jìn)了FLIM技術(shù)及其應(yīng)用的巨大進(jìn)步。熒光壽命成像(FLIM)對(duì)細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)及調(diào)控,蛋白間的相互作用等生物研究發(fā)揮著很大作用。熒光壽命成像系統(tǒng)是一種用于化學(xué)領(lǐng)域的分析儀器。

熒光壽命成像和生物發(fā)光的異同點(diǎn)是什么?生物發(fā)光與熒光壽命成像不同點(diǎn):產(chǎn)生光子的原理不同,類(lèi)似于我們都是通過(guò)肉眼去觀察螢火蟲(chóng)和發(fā)光水母一樣,生物發(fā)光與熒光成像在本質(zhì)上,都是機(jī)體中特定的細(xì)胞或材料發(fā)出光子,被高靈敏度的CCD檢測(cè)到形成圖像,但是生物發(fā)光與熒光壽命成像產(chǎn)生光子的過(guò)程和機(jī)制是完全不同的。生物發(fā)光與熒光成像相同點(diǎn):都需要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記。生物發(fā)光產(chǎn)生的光子和熒光壽命成像產(chǎn)生的光子都可以被高靈敏的CCD檢測(cè)并形成圖像,就像一個(gè)人的眼睛就可以既看到螢火蟲(chóng)又可以看到發(fā)光水母一樣。除此之外,生物發(fā)光和熒光壽命成像都需要對(duì)目標(biāo)細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記,讓細(xì)胞產(chǎn)生熒光素酶或者熒光蛋白。熒光壽命成像在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域有廣闊的應(yīng)用前景。廣州化學(xué)熒光壽命成像操作步驟

熒光壽命對(duì)依賴(lài)于熒光團(tuán)結(jié)構(gòu)的內(nèi)部因素敏感。廣州化學(xué)熒光壽命成像操作步驟

熒光壽命成像技術(shù)實(shí)時(shí)監(jiān)控納米顆粒在細(xì)胞內(nèi)的穩(wěn)定性:利用熒光壽命成像顯微鏡技術(shù)可實(shí)現(xiàn)可以實(shí)時(shí)監(jiān)控發(fā)光納米顆粒在活細(xì)胞內(nèi)的穩(wěn)定性。熒光壽命成像不但具有其它熒光顯微鏡所具有的高靈敏度、可檢測(cè)人體生物樣品等優(yōu)點(diǎn),它在監(jiān)控?zé)晒饧{米材料的穩(wěn)定性上還具有以下幾個(gè)優(yōu)勢(shì):(1)熒光壽命不受熒光探針的濃度的影響,可排除納米材料的胞吐及細(xì)胞分化導(dǎo)致的納米顆粒的稀釋等對(duì)測(cè)量的影響;(2)很多常見(jiàn)的發(fā)光材料的熒光壽命都遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于細(xì)胞的自熒光的壽命,很易去除生物自熒光對(duì)熒光成像的干擾;(3)發(fā)光材料的熒光壽命和其材料的穩(wěn)定性密切相關(guān),熒光壽命的改變可以靈敏地反映相應(yīng)材料的化學(xué)穩(wěn)定性。廣州化學(xué)熒光壽命成像操作步驟

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