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在種類繁多的顯微技術(shù)中,熒光壽命顯微成像技術(shù)(FLIM)具有對(duì)生物大分子結(jié)構(gòu)、動(dòng)力學(xué)信息和分子環(huán)境等進(jìn)行高分辨高精度測(cè)量的能力,因此其重要性日漸提升,被普遍地應(yīng)用于生物學(xué)研究及臨床診斷等領(lǐng)域。熒光的特性包含有:熒光激發(fā)和發(fā)射光譜、熒光強(qiáng)度、量子效率、熒光壽命等,其中,熒光壽命是指熒光分子在激發(fā)態(tài)上存在的平均時(shí)間(納秒量級(jí))。分子的熒光壽命在幾納秒至幾百納秒之間,因此,測(cè)量熒光壽命需要極快響應(yīng)時(shí)間的探測(cè)器。熒光壽命成像的發(fā)展很好地彌補(bǔ)了基于強(qiáng)度成像的問題,對(duì)生物醫(yī)學(xué)檢測(cè)有著重要的意義。熒光壽命成像不受染料濃度的影響;福建化學(xué)熒光壽命成像哪個(gè)牌子好
熒光壽命成像有幾點(diǎn)優(yōu)勢(shì):1.不需要考慮跳色的影響,從而免去了計(jì)算和去除跳色雜質(zhì)信號(hào)的麻煩;去除跳色雜質(zhì)的準(zhǔn)確性很大程度上依賴于信噪比、成像流程的設(shè)計(jì)和控制、以及跳色信號(hào)估算的算法,這些因素使得通過穩(wěn)態(tài)光強(qiáng)度測(cè)量熒光壽命成像的精確度在很多時(shí)候受到質(zhì)疑。2.穩(wěn)態(tài)光強(qiáng)度的熒光壽命成像測(cè)量很容易受熒光標(biāo)記光漂白或是激發(fā)光散射背景的影響,而這些因素對(duì)FLIM-FRET的測(cè)量影響相對(duì)較低。3.熒光壽命成像可以定量的區(qū)分參與FRET和沒有參與FRET的分子數(shù)量,這樣深入的定量分析是穩(wěn)態(tài)光強(qiáng)度方法做不到的。廣州分子熒光壽命成像哪個(gè)牌子好市場(chǎng)上熒光壽命的測(cè)量方式可分為時(shí)域法和頻域法。
熒光壽命成像顯微技術(shù)已在生命科學(xué),臨床熒光壽命領(lǐng)域中得到了普遍的應(yīng)用。成像,擴(kuò)散光學(xué)層析成像,熒光相關(guān)光譜等等。使用我們專有的多維時(shí)間相關(guān)單光子計(jì)數(shù)技術(shù)(TCSPC),我們的FLIM和TCSPC系統(tǒng)具有超高光子效率的特點(diǎn)。因此,科學(xué)家,醫(yī)生,研究人員和其他用戶能夠進(jìn)行TCSPC FLIM顯微鏡檢查,多波長(zhǎng)FLIM,同時(shí)FLIM和快速獲取FLIM。生命科學(xué)是我們熒光壽命成像顯微(FLIM)設(shè)備的主要應(yīng)用領(lǐng)域。我們的技術(shù)經(jīng)常用于以下領(lǐng)域:分子影像學(xué)、代謝成像、FRET成像、同時(shí)進(jìn)行NAD(P)H和pO2成像。
受光學(xué)衍射極限的限制,熒光顯微技術(shù)的空間分辨率只能達(dá)到200納米左右,難以滿足生命科學(xué)研究的需要。而對(duì)于熒光壽命成像來(lái)說(shuō),其空間分辨率受衍射極限的影響尤為嚴(yán)重。熒光壽命成像是一個(gè)新興的研究領(lǐng)域,尋求具有高度原創(chuàng)性的技術(shù)原理與方案,并率先解決熒光壽命成像在生命科學(xué)應(yīng)用中存在的難題,具有重大的科學(xué)意義與應(yīng)用價(jià)值。一種熒光壽命成像方法,所述方法包括下述步驟:對(duì)標(biāo)記于樣品中的光開關(guān)染料分子進(jìn)行稀疏激勵(lì);激發(fā)樣品中被激勵(lì)的光開關(guān)染料分子,收集被激發(fā)的光開關(guān)染料分子所發(fā)射的光子并記錄光開關(guān)染料分子的熒光圖像,對(duì)熒光圖像中的光開關(guān)染料分子進(jìn)行質(zhì)心定位;對(duì)在質(zhì)心定位處接收到的光子進(jìn)行計(jì)數(shù),確定被激發(fā)的光開關(guān)染料分子的熒光壽命;結(jié)合得到的光開關(guān)染料分子的質(zhì)心定位結(jié)果和熒光壽命,構(gòu)建熒光壽命圖像。熒光壽命成像基于熒光團(tuán)的熒光壽命取決于其分子環(huán)境而并非濃度的事實(shí)。
熒光壽命成像顯微術(shù)(FLIM)是一種利用熒光染料固有特性的成像技術(shù)。除了具有特有的發(fā)射光譜外,每個(gè)熒光分子還有特有的壽命,它反映了熒光基團(tuán)在發(fā)射光子之前處于激發(fā)態(tài)的時(shí)間。除了標(biāo)準(zhǔn)的熒光強(qiáng)度測(cè)量外,壽命分析還可以提供其他信息。過去,壽命成像一直是一種緩慢、復(fù)雜的專業(yè)化技術(shù)。只有經(jīng)驗(yàn)豐富的顯微鏡**或物理學(xué)家才會(huì)使用這種技術(shù)。熒光壽命成像提供了額外的信息,有助提高共聚焦成像的質(zhì)量。它非常適合用于區(qū)分熒光發(fā)射光譜重疊的熒光探針,或消除不需要的背景熒光信號(hào)。利用熒光壽命成像顯微鏡技術(shù)可實(shí)現(xiàn)可以實(shí)時(shí)監(jiān)控發(fā)光納米顆粒在活細(xì)胞內(nèi)的穩(wěn)定性。廣州生物熒光壽命成像哪里有
熒光壽命成像可以提供熒光強(qiáng)度(光子數(shù))和光子壽命的空間分布。福建化學(xué)熒光壽命成像哪個(gè)牌子好
熒光壽命成像裝置通常由激發(fā)光源、光電探測(cè)器、延遲儀器及圖像處理設(shè)備組成。門控儀器的光源通常為短脈沖的超快激光器,常見的成像設(shè)備是CCD,延遲儀器提供FLIM的控制信號(hào)。由于光電探測(cè)器和CCD等器件輸出的是光強(qiáng)度信息,熒光壽命圖像可以通過Rapid Lifetime Determination (RLD)和Weighted Nonlinear Least Square (WNLLS)兩種處理方法利用熒光強(qiáng)度圖像通過反演得出。熒光壽命成像(FLIM)有時(shí)域和頻域測(cè)量法,時(shí)域測(cè)量中主要有TCSPC技術(shù)、門控探測(cè)技術(shù)、條紋相機(jī)探測(cè)技術(shù)和頻閃技術(shù);頻域測(cè)量法中主要是調(diào)制技術(shù)。每一種測(cè)量技術(shù)在測(cè)量樣品成像的過程中都有優(yōu)勢(shì)和劣勢(shì),在實(shí)際測(cè)量樣品的熒光壽命時(shí),需要根據(jù)實(shí)際的樣品裝填而綜合考慮選擇合適的熒光壽命測(cè)量技術(shù)。福建化學(xué)熒光壽命成像哪個(gè)牌子好
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