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熒光分析和成像技術(shù)因具有非常高的靈敏度和分子特異性而普遍的應(yīng)用于生物物理、生物化學(xué)、醫(yī)學(xué)、物理、化學(xué)等領(lǐng)域,利用熒光光譜技術(shù)和熒光顯微技術(shù)可以分析樣品中熒光團(tuán)的組分和分布。不過(guò),由于熒光分析技術(shù)大多是基于熒光強(qiáng)度的測(cè)量,容易受到激發(fā)光強(qiáng)度、樣品濃度淬滅、熒光染料的分布濃度等因素的影響。熒光壽命通常來(lái)講是一定的,不受激發(fā)光強(qiáng)度、熒光團(tuán)濃度等因素的影響,只只與熒光團(tuán)所處的微環(huán)境有關(guān),因此,利用熒光壽命顯微鏡(Fluorescence lifetime imaging microscopy, FLIM)對(duì)樣品進(jìn)行熒光壽命成像,可以對(duì)樣品所在的微環(huán)境中的許多物理參數(shù)如氧壓、溶液疏水性等及生物化學(xué)參數(shù)如pH值、離子濃度等進(jìn)行定量測(cè)量。此外,熒光壽命成像技術(shù)還可以同時(shí)獲得分子狀態(tài)和空間分布的信息。由于熒光壽命成像不受樣品濃度影響,具有其他熒光成像技術(shù)無(wú)法代替的優(yōu)異性能。湖北動(dòng)物熒光壽命成像哪家專(zhuān)業(yè)
熒光壽命成像或FLIM是基于熒光樣品中不同區(qū)域的熒光的指數(shù)衰減速率的差異。由τ決定熒光壽命成像的每個(gè)像素的強(qiáng)度,這使研究人員可以查看具有不同熒光衰減率的材料之間的對(duì)比度,還可以產(chǎn)生顯示其他衰減路徑變化的圖像。可以通過(guò)使用脈沖源在時(shí)域中確定熒光壽命。當(dāng)熒光物質(zhì)被超短脈沖激發(fā)時(shí),時(shí)間分辨的熒光將呈指數(shù)衰減。時(shí)間相關(guān)單光子計(jì)數(shù)(tcspc)通常被用作熒光壽命的測(cè)量方法,因?yàn)樗a(bǔ)償了在源強(qiáng)度和單光子的脈沖幅度的變化。更具體地說(shuō),TCSPC由單個(gè)光子雪崩光電二極管(SPAD)記錄相對(duì)于激發(fā)激光脈沖的單個(gè)光子的壽命。重復(fù)記錄多個(gè)激光脈沖,并在記錄了足夠多的事件后,研究人員能夠建立所有這些記錄的時(shí)間點(diǎn)上事件數(shù)量的直方圖。然后,可以將該直方圖擬合到的指數(shù)壽命衰減函數(shù)的指數(shù)函數(shù),并且可以相應(yīng)地提取壽命參數(shù)。吉林化學(xué)熒光壽命成像研發(fā)熒光壽命成像技術(shù)是一種在顯微尺度下展現(xiàn)熒光壽命空間分布的技術(shù)。
熒光壽命顯微成像(Fluorescence lifetime imaging microscopy,FLIM)是熒光壽命測(cè)量和熒光顯微技術(shù)的結(jié)合,熒光壽命顯微成像具有高特異性、高靈敏度、可定量測(cè)量微環(huán)境變化和分子間相互作用、不受探針濃度、激發(fā)光強(qiáng)度和光漂白影響等優(yōu)點(diǎn)。在過(guò)去的十年中,光學(xué)技術(shù)硬件和軟件、材料科學(xué)和生物醫(yī)學(xué)的迅速發(fā)展,共同促進(jìn)了FLIM技術(shù)及其應(yīng)用的巨大進(jìn)步。熒光壽命成像(FLIM)對(duì)細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)及調(diào)控,蛋白間的相互作用等生物研究發(fā)揮著很大作用。
熒光壽命成像可以提供熒光強(qiáng)度(光子數(shù))和光子壽命的空間分布,具有200 nm的空間分辨率和皮秒量級(jí)的時(shí)間分辨率。通過(guò)雙光子激發(fā)(結(jié)合飛秒脈沖和共焦顯微鏡)可以直接檢測(cè)熒光和時(shí)間分辨的熒光壽命。這種無(wú)損檢測(cè)技術(shù),無(wú)需解剖或?qū)iT(mén)制造分層樣品,不但可在樣品表面,還可在樣品表面以下實(shí)現(xiàn)深度解析測(cè)量。特別適用于新材料、光子學(xué)、光伏、光催化、生物材料、納米材料和納米復(fù)合材料以及其相關(guān)的原理探究和設(shè)計(jì)優(yōu)化。熒光壽命成像圖像中每一個(gè)像素點(diǎn)在phasor圖上都有一個(gè)對(duì)應(yīng)的點(diǎn)。因此我們可以獲取每個(gè)像素點(diǎn)的壽命信息,也可以獲知每一壽命所對(duì)應(yīng)的圖像區(qū)域。熒光壽命成像不需要考慮跳色的影響,從而免去了計(jì)算和去除跳色雜質(zhì)信號(hào)的麻煩;
熒光壽命成像:作為熒光成像中除光譜和強(qiáng)度之外的新維度,當(dāng)前,熒光壽命成像主要應(yīng)用領(lǐng)域包括:用于樣品分離,如利用不同染料熒光壽命的差異將不同組織、正常與病變細(xì)胞等有效分離。熒光團(tuán)在光譜上非常相似(max 580 vs 573)無(wú)法分離,但它們?cè)跓晒鈮勖喜町惷黠@。作為生物傳感器,如評(píng)價(jià)藥物/理化條件對(duì)細(xì)胞的影響、Ca+震蕩等。充分拓展了壽光命成像的使用范圍,實(shí)現(xiàn)可相互驗(yàn)證的多維度樣品成像。實(shí)現(xiàn)真正的生物動(dòng)力學(xué)分析和功能成像。熒光壽命是熒光基團(tuán)在通過(guò)發(fā)射熒光光子返回基態(tài)之前在其激發(fā)態(tài)下保持平均多長(zhǎng)時(shí)間的量度。深圳植物熒光壽命成像供貨商
利用熒光壽命成像顯微鏡技術(shù)可實(shí)現(xiàn)可以實(shí)時(shí)監(jiān)控發(fā)光納米顆粒在活細(xì)胞內(nèi)的穩(wěn)定性。湖北動(dòng)物熒光壽命成像哪家專(zhuān)業(yè)
熒光壽命成像技術(shù)(Fluorescence Lifetime ImagingMicroscopy,F(xiàn)LIM)是一種在顯微尺度下展現(xiàn)熒光壽命空間分布的技術(shù),由于其不受樣品濃度影響,具有其他熒光成像技術(shù)無(wú)法代替的優(yōu)異性能,目前在生物醫(yī)學(xué)工程、光電半導(dǎo)體材料等領(lǐng)域是一種重要的表征測(cè)量手段。熒光和熒光壽命:分子包含多個(gè)單能態(tài)S0、S1、S2…和三重態(tài)T1…,每個(gè)能態(tài)都包含多個(gè)精細(xì)的能級(jí)。正常情況下,大部分電子處在*低能態(tài)即基態(tài)S0 的*低能級(jí)上,當(dāng)分子被光束照射,會(huì)吸收光子能量,電子被激發(fā)到更高的能態(tài)S1 或S2 上,在S2 能態(tài)上的電子只能存在很短暫的時(shí)間,便會(huì)通過(guò)內(nèi)轉(zhuǎn)換過(guò)程躍遷到S1 上,而S1 能態(tài)上的電子亦會(huì)在極短時(shí)間內(nèi)躍遷到S1 的*低能級(jí)上,而這些電子會(huì)存在一段時(shí)間后通過(guò)震蕩弛豫輻射躍遷到基態(tài),這個(gè)過(guò)程會(huì)釋放一個(gè)光子,即熒光。此外,亦會(huì)有電子躍遷至三重態(tài)T1 上,再由T1 躍遷至基態(tài),我們稱之為磷光。湖北動(dòng)物熒光壽命成像哪家專(zhuān)業(yè)
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