熒光壽命顯微成像（Fluorescence lifetime imaging microscopy,FLIM）是熒光壽命測(cè)量和熒光顯微技術(shù)的結(jié)合，熒光壽命顯微成像具有高特異性、高靈敏度、可定量測(cè)量微環(huán)境變化和分子間相互作用、不受探針濃度、激發(fā)光強(qiáng)度和光漂白影響等優(yōu)點(diǎn)。在過去的十年中，光學(xué)技術(shù)硬件和軟件、材料科學(xué)和生物醫(yī)學(xué)的迅速發(fā)展，共同促進(jìn)了FLIM技術(shù)及其應(yīng)用的巨大進(jìn)步。熒光壽命成像（FLIM）對(duì)細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)及調(diào)控，蛋白間的相互作用等生物研究發(fā)揮著很大作用。熒光壽命成像具有200 nm的空間分辨率和皮秒量級(jí)的時(shí)間分辨率。浙江化學(xué)熒光壽命成像哪個(gè)牌子好

熒光壽命成像（FLI）：這種技術(shù)相對(duì)較新，涉及到同時(shí)在圖像的每個(gè)像素處確定熒光衰減時(shí)間的空間分布。它基于熒光團(tuán)的熒光壽命取決于其分子環(huán)境而并非濃度的事實(shí)。它可以用于無法控制局部探針濃度的熒光顯微鏡中。熒光壽命成像(FLIM)可用于測(cè)量分子環(huán)境參數(shù)，通過熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)進(jìn)行的蛋白質(zhì)相互作用，并可以通過細(xì)胞和組織的自發(fā)熒光來測(cè)量其代謝狀態(tài)。分子環(huán)境參數(shù)可以通過因熒光淬滅或熒光團(tuán)的構(gòu)象變化而引起的壽命變化來測(cè)量。FLIM可用于多種生物應(yīng)用，包括組織表面掃描、組織類型繪圖、光動(dòng)力治理、DNA芯片分析、皮膚成像等。重慶三維熒光壽命成像哪家專業(yè)熒光壽命成像通常用于研究生物分子間相互作用、細(xì)胞中的信號(hào)事件或區(qū)分光譜重疊的熒光團(tuán)。

門控探測(cè)法適用于單組分熒光強(qiáng)度衰減的測(cè)量和熒光壽命成像。熒光壽命可通過在兩個(gè)不同延遲時(shí)刻開啟的相同寬度的門內(nèi)記錄的熒光強(qiáng)度信息求得，通常情形下，在條件允許的情況下，采用多門控探測(cè)，即選取多個(gè)窗口獲取多幅圖像（通常為5~10幅）來反演壽命圖像。一般使用門控微通道板像增強(qiáng)器（MCP Intensifier）或者增強(qiáng)型CCD（Intensified CCD）相機(jī)，實(shí)現(xiàn)樣品的寬場(chǎng)（full-field）熒光壽命成像。通過在樣品受到超短光脈沖激發(fā)后的不同時(shí)刻（時(shí)間窗口）選通像增強(qiáng)器或CCD相機(jī)，獲得一組熒光強(qiáng)度圖像，然后利用公式，逐點(diǎn)計(jì)算出樣品上各點(diǎn)的熒光壽命并成像。

熒光分子受激發(fā)后發(fā)光，熒光壽命量化了發(fā)光的衰減率。該特征時(shí)間不但取決于特定的熒光團(tuán)，還取決于其環(huán)境，分子相互作用影響弛豫過程并改變熒光團(tuán)的壽命。熒光壽命是微環(huán)境的相對(duì)參數(shù)，不受環(huán)境吸收、樣本濃度等因素影響，因此能夠?qū)ι锝M織環(huán)境中的 p H 值水平、離子濃度、氧分子濃度等微環(huán)境狀態(tài)進(jìn)行高精度檢測(cè)。熒光壽命顯微成像（FLIM），可以定位不同的分子及濃度分布，在生物，材料，半導(dǎo)體領(lǐng)域具有重要的應(yīng)用價(jià)值。熒光壽命成像原理及應(yīng)用說明：熒光壽命是指分子受到光脈沖激發(fā)后返回基態(tài)之前在激發(fā)平均停留的時(shí)間，處于激發(fā)態(tài)的熒光分子在從激發(fā)到基態(tài)的過程中發(fā)射熒光釋放能量。熒光壽命取決于熒光分子所處的微環(huán)境，通過對(duì)樣品熒光壽命的測(cè)量和成像可以定量獲取樣品的功能信息。熒光壽命成像能夠靈敏地反應(yīng)熒光基團(tuán)生化特性以及周圍微環(huán)境的變化情況。

典型的熒光壽命成像包括從感興趣區(qū)域（ROI）的共焦圖像中提取1-，2-或3-衰減時(shí)間。限制熒光團(tuán)的衰減速率可能是任意的，而且很復(fù)雜，因?yàn)樵诩?xì)胞環(huán)境中存在幾種衰減速率。對(duì)于相量圖，關(guān)于選擇哪種衰減模型以及評(píng)估擬合優(yōu)度的挑戰(zhàn)性決定已成為過去。在相量圖中，所有原始FLIM數(shù)據(jù)在向量空間中均表示為相位和幅度。圖像中的每個(gè)像素都轉(zhuǎn)換為相量圖中的一個(gè)點(diǎn)。單獨(dú)于其在圖像中的位置，具有相似衰減特征的像素在相量圖中形成群集?？梢栽诖岁嚵兄羞x擇不同的相量簇，并在標(biāo)注中反向注釋對(duì)應(yīng)的像素。在種類繁多的顯微技術(shù)中，熒光壽命顯微成像技術(shù)被普遍地應(yīng)用于生物學(xué)研究及臨床診斷等領(lǐng)域。廣東顯微熒光壽命成像有哪些

熒光壽命對(duì)依賴于熒光團(tuán)結(jié)構(gòu)的內(nèi)部因素敏感。浙江化學(xué)熒光壽命成像哪個(gè)牌子好

在基于時(shí)間相關(guān)單光子計(jì)數(shù)的熒光壽命成像實(shí)驗(yàn)中，通過選用超快激光器可以優(yōu)化脈沖持續(xù)時(shí)間，單光子探測(cè)器和時(shí)間數(shù)字轉(zhuǎn)換器的時(shí)間抖動(dòng)則成為制約時(shí)間分辨率的關(guān)鍵參數(shù)。熒光壽命成像可進(jìn)行高質(zhì)量的多色成像實(shí)驗(yàn)或?qū)崿F(xiàn)STED、PALM/STORM等超分辨率熒光顯微成像。目前TCSPC是主要應(yīng)用的熒光壽命測(cè)定技術(shù)。熒光壽命通常在ps～us量級(jí)，在如此短的時(shí)間量級(jí)上進(jìn)行測(cè)量，它是較為成熟準(zhǔn)確的測(cè)試手段。TCSPC的工作原理是使用一個(gè)同步信號(hào)源驅(qū)動(dòng)激光器，出射光脈沖照射樣品池，在利用光子探測(cè)裝置（多為PMT）對(duì)熒光信號(hào)進(jìn)行探測(cè)，每一個(gè)光子計(jì)數(shù)信號(hào)在FT1010中都會(huì)落入一個(gè)對(duì)應(yīng)的時(shí)間窗口，經(jīng)過一定時(shí)間的統(tǒng)計(jì)疊加后即得到熒光壽命曲線。幾十萬次重復(fù)以后，不同的時(shí)間通道累積下來的光子數(shù)目不同。浙江化學(xué)熒光壽命成像哪個(gè)牌子好

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