熒光壽命成像FLIM相比于熒光強(qiáng)度成像更有優(yōu)勢(shì)。通過(guò)熒光強(qiáng)度成像可以獲得熒光分子的空間分布,較為直接和簡(jiǎn)便,但是當(dāng)熒光分子具有相似的頻譜特性,或是同樣的熒光分子在不同環(huán)境下時(shí),依賴強(qiáng)度進(jìn)行成像的方案便無(wú)法準(zhǔn)確反映信息。與基于光強(qiáng)的成像方式不同,熒光壽命成像FLIM適用于測(cè)量熒光分子環(huán)境的變化,或是測(cè)量分子的運(yùn)動(dòng)情況。其結(jié)果與熒光分子濃度無(wú)關(guān),且不受影響光強(qiáng)的光散射或是光吸收影響,可以精確測(cè)量熒光淬滅過(guò)程,對(duì)生物分子微環(huán)境進(jìn)行定量測(cè)量。熒光壽命成像(FLIM)對(duì)細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)及調(diào)控,蛋白間的相互作用等生物研究發(fā)揮著很大作用。佛山單分子熒光壽命成像制造
與熒光光譜一樣,熒光壽命也是熒光物質(zhì)的一種內(nèi)在特有性質(zhì),不受熒光物質(zhì)濃度、激發(fā)光強(qiáng)度等因素的影響。熒光壽命成像能在不受熒光強(qiáng)度影響因素影響的條件下,在納米分辨率水平對(duì)蛋白互作進(jìn)行研究,或者通過(guò) FRET 探針研究分子環(huán)境變化,更重要的是其測(cè)量數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性高、易重復(fù)。通過(guò)熒光壽命成像還可以對(duì)樣本所處的微環(huán)境進(jìn)行檢測(cè)、對(duì)樣品組份進(jìn)行分離等等。在傳統(tǒng)的熒光強(qiáng)度和熒光光譜兩個(gè)維度的基礎(chǔ)上,又增加了熒光壽命這一新的成像維度,大幅度拓展了該系統(tǒng)的應(yīng)用范圍。上海熒光壽命成像大概多少錢(qián)熒光壽命成像具有不同于熒光強(qiáng)度成像的眾多優(yōu)點(diǎn);
熒光壽命成像 (FLIM)通過(guò)建立檢測(cè)到的熒光事件的直方圖來(lái)確定壽命??娠@示單指數(shù)或多指數(shù)熒光衰減。數(shù)值曲線擬合表示熒光壽命和振幅(即檢測(cè)到的光子數(shù))。由于FRET減少了供體壽命,因此如果無(wú)FRET的供體壽命已知,就可以量化FRET發(fā)生的程度。該供體壽命τ作為分析FRET樣品的一定參考。因此,F(xiàn)LIM-FRET為內(nèi)部參照—這一特點(diǎn)減少了基于強(qiáng)度測(cè)量FRET時(shí)的很多缺點(diǎn)。由于其熒光壽命是染料的固有特性,因此對(duì)其他不利影響(如光漂白、圖像明暗處理、不同濃度或表達(dá)水平)具有普遍的不變性。使用基于強(qiáng)度的FRET測(cè)量的主要限制是所有可觀察的供體分子都經(jīng)歷FRET的基本假設(shè)。通常情況并非如此。供體分子這種變化的“非結(jié)合”組分給測(cè)量的FRET效率帶來(lái)了相當(dāng)大的不確定性,使得無(wú)法在實(shí)驗(yàn)之間進(jìn)行比較。熒光壽命成像克服了這一缺點(diǎn)。
熒光壽命成像FLIM所面臨的挑戰(zhàn):在數(shù)據(jù)處理上,由于曲線擬合迭代過(guò)程的需求,計(jì)算成本較其他成像方案更高。在成像原理上,熒光壽命受多種外界因素影響,這些因素包括分子相互作用、pH值、溫度和粘滯阻力等,很難對(duì)這些參數(shù)控制變量,使得測(cè)量熒光壽命存在交叉干擾問(wèn)題。此外,與普通光學(xué)顯微技術(shù)類(lèi)似,介質(zhì)光散射影響成像信噪比及空間分辨率,成像深度受到限制。FLIM已經(jīng)在系統(tǒng)裝置、熒光探針和數(shù)據(jù)處理算法等方面得到了較快的發(fā)展,這也使得熒光壽命成像FLIM在對(duì)細(xì)胞微環(huán)境成像和生物代謝監(jiān)測(cè)發(fā)揮出不可替代的作用。結(jié)合多種先進(jìn)成像系統(tǒng),如雙光子成像、結(jié)構(gòu)光照明等,可進(jìn)一步提升熒光壽命成像FLIM的分辨率和測(cè)量精度。另一方面,提升熒光壽命解調(diào)的算法性能,將壓縮感知、深度學(xué)習(xí)等熱點(diǎn)算法與FLIM結(jié)合,也同樣對(duì)FLIM的發(fā)展起著至關(guān)重要的作用??偟膩?lái)說(shuō),熒光壽命成像FLIM的發(fā)展很好地彌補(bǔ)了基于強(qiáng)度成像的問(wèn)題,對(duì)生物醫(yī)學(xué)檢測(cè)有著重要的意義。熒光壽命顯微成像,可以定位不同的分子及濃度分布,在生物,材料,半導(dǎo)體領(lǐng)域具有重要的應(yīng)用價(jià)值。
熒光壽命成像(Fluorescence Lifetime Imaging ,F(xiàn)LIM))是一種重要的熒光顯微鏡技術(shù),通常用于研究生物分子間相互作用、細(xì)胞中的信號(hào)事件或區(qū)分光譜重疊的熒光團(tuán)。此外,F(xiàn)LIM 可以提供有關(guān)電信號(hào)變化、離子和氧含量、溫度、細(xì)胞或其環(huán)境中的 pH 值的定量信息。熒光壽命成像具有不同于熒光強(qiáng)度成像的眾多優(yōu)點(diǎn):不受染料濃度的影響,無(wú)論染色或免疫熒光的效率高或低,熒光壽命都能呈現(xiàn)一致的數(shù)據(jù),這意味著更少的實(shí)驗(yàn)數(shù)量和重復(fù)性更好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。不受光漂白的影響,熒光發(fā)射時(shí)間不受激發(fā)光強(qiáng)度的影響,因此不存在光漂白問(wèn)題。不受樣本厚度和光源噪聲的影響。熒光壽命成像能夠靈敏地反應(yīng)熒光基團(tuán)生化特性以及周?chē)h(huán)境的變化情況。浙江多色熒光壽命成像哪里買(mǎi)
熒光壽命成像可以提供熒光強(qiáng)度(光子數(shù))和光子壽命的空間分布。佛山單分子熒光壽命成像制造
熒光壽命成像顯微技術(shù)已在生命科學(xué),臨床熒光壽命領(lǐng)域中得到了普遍的應(yīng)用。成像,擴(kuò)散光學(xué)層析成像,熒光相關(guān)光譜等等。使用我們專(zhuān)有的多維時(shí)間相關(guān)單光子計(jì)數(shù)技術(shù)(TCSPC),我們的FLIM和TCSPC系統(tǒng)具有超高光子效率的特點(diǎn)。因此,科學(xué)家,醫(yī)生,研究人員和其他用戶能夠進(jìn)行TCSPC FLIM顯微鏡檢查,多波長(zhǎng)FLIM,同時(shí)FLIM和快速獲取FLIM。生命科學(xué)是我們熒光壽命成像顯微(FLIM)設(shè)備的主要應(yīng)用領(lǐng)域。我們的技術(shù)經(jīng)常用于以下領(lǐng)域:分子影像學(xué)、代謝成像、FRET成像、同時(shí)進(jìn)行NAD(P)H和pO2成像。佛山單分子熒光壽命成像制造
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