在種類繁多的顯微技術(shù)中,熒光壽命顯微成像技術(shù)(FLIM)具有對生物大分子結(jié)構(gòu)、動力學信息和分子環(huán)境等進行高分辨高精度測量的能力,因此其重要性日漸提升,被普遍地應用于生物學研究及臨床診斷等領(lǐng)域。熒光的特性包含有:熒光激發(fā)和發(fā)射光譜、熒光強度、量子效率、熒光壽命等,其中,熒光壽命是指熒光分子在激發(fā)態(tài)上存在的平均時間(納秒量級)。分子的熒光壽命在幾納秒至幾百納秒之間,因此,測量熒光壽命需要極快響應時間的探測器。熒光壽命成像的發(fā)展很好地彌補了基于強度成像的問題,對生物醫(yī)學檢測有著重要的意義。利用熒光壽命成像顯微鏡技術(shù)可實現(xiàn)可以實時監(jiān)控發(fā)光納米顆粒在活細胞內(nèi)的穩(wěn)定性。珠海三維熒光壽命成像價格
熒光壽命是熒光分子在激發(fā)態(tài)停留的時間,這個時間可以反映熒光分子的內(nèi)在屬性和所處的微環(huán)境,是一個很有用的工具。以往,熒光壽命的測量和計算是件非常復雜和耗時的工作,只有少數(shù)專業(yè)的科學家關(guān)注和使用該工具。傳統(tǒng)的多色成像實驗根據(jù)光譜差異來設(shè)計,會有串色等限制,而且需要多次采集圖像,會造成樣品的光損傷。通過熒光壽命來進行成像,只需要拍攝一次就完成圖像采集,不但減少了成像時間,而且降低了激光對樣品的損傷。熒光壽命成像使用簡單,方便快捷,不需要進行參數(shù)調(diào)節(jié)。重慶單分子熒光壽命成像好不好熒光壽命是熒光基團在通過發(fā)射熒光光子返回基態(tài)之前在其激發(fā)態(tài)下保持平均多長時間的量度。
典型的熒光壽命成像包括從感興趣區(qū)域(ROI)的共焦圖像中提取1-,2-或3-衰減時間。限制熒光團的衰減速率可能是任意的,而且很復雜,因為在細胞環(huán)境中存在幾種衰減速率。對于相量圖,關(guān)于選擇哪種衰減模型以及評估擬合優(yōu)度的挑戰(zhàn)性決定已成為過去。在相量圖中,所有原始FLIM數(shù)據(jù)在向量空間中均表示為相位和幅度。圖像中的每個像素都轉(zhuǎn)換為相量圖中的一個點。單獨于其在圖像中的位置,具有相似衰減特征的像素在相量圖中形成群集??梢栽诖岁嚵兄羞x擇不同的相量簇,并在標注中反向注釋對應的像素。
熒光壽命是熒光團在發(fā)射熒光光子返回基態(tài)之前保持其激發(fā)態(tài)的平均時間長度。這取決于熒光團的分子組成和納米環(huán)境。熒光壽命成像將壽命測量與成像相結(jié)合:對每個圖像像素以測得的熒光壽命進行顏色編碼,產(chǎn)生額外的圖像反差。因此,熒光壽命成像可以提供關(guān)于熒光分子空間分布的信息和有關(guān)其生化狀態(tài)或納米環(huán)境的信息。有很多技術(shù)可以在顯微鏡環(huán)境中檢測熒光壽命。常見的的是基于供體(受體光漂白,F(xiàn)RET AB)或受體(敏化發(fā)射,F(xiàn)RET SE)熒光強度的技術(shù)。測量熒光壽命需要極快響應時間的探測器。
在使用TCSPC測量熒光壽命的過程中,需要調(diào)節(jié)樣品的熒光強度,確保每次激發(fā)后較多只有一個熒光光子到達終止光電倍增管。TCSPC方法的突出優(yōu)點是靈敏度高、測量結(jié)果準確、系統(tǒng)誤差小。采用該技術(shù)對樣品進行熒光壽命成像時,必須逐點測量樣品的熒光壽命,而每一點的測量時間又比較長,因此,通常認為該技術(shù)不太適合熒光壽命測量。不過,近年來,隨著TCSPC技術(shù)和固體超快激光技術(shù)的發(fā)展,TCSPC技術(shù)已具備快速測量熒光壽命的條件。通過與激光共聚焦顯微鏡的結(jié)合,可以對樣品進行熒光壽命成像的測量。熒光壽命成像通常用于研究生物分子間相互作用、細胞中的信號事件或區(qū)分光譜重疊的熒光團。浙江生物熒光壽命成像售價
熒光壽命是微環(huán)境的相對參數(shù),不受環(huán)境吸收、樣本濃度等因素影響。珠海三維熒光壽命成像價格
熒光分析和成像技術(shù)因具有非常高的靈敏度和分子特異性而普遍的應用于生物物理、生物化學、醫(yī)學、物理、化學等領(lǐng)域,利用熒光光譜技術(shù)和熒光顯微技術(shù)可以分析樣品中熒光團的組分和分布。不過,由于熒光分析技術(shù)大多是基于熒光強度的測量,容易受到激發(fā)光強度、樣品濃度淬滅、熒光染料的分布濃度等因素的影響。熒光壽命通常來講是一定的,不受激發(fā)光強度、熒光團濃度等因素的影響,只只與熒光團所處的微環(huán)境有關(guān),因此,利用熒光壽命顯微鏡(Fluorescence lifetime imaging microscopy, FLIM)對樣品進行熒光壽命成像,可以對樣品所在的微環(huán)境中的許多物理參數(shù)如氧壓、溶液疏水性等及生物化學參數(shù)如pH值、離子濃度等進行定量測量。此外,熒光壽命成像技術(shù)還可以同時獲得分子狀態(tài)和空間分布的信息。珠海三維熒光壽命成像價格
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