我們知道WB實(shí)驗(yàn)步驟繁瑣，一次實(shí)驗(yàn)歷時(shí)也不短，從提蛋白到顯影結(jié)束可能要三天，我們就講一下這里面的一些關(guān)鍵環(huán)節(jié)。一、蛋白提取及變性1、提取蛋白很多經(jīng)驗(yàn)豐富的WB實(shí)驗(yàn)者都深有體會(huì)，蛋白提取是影響結(jié)果重要的環(huán)節(jié)之一。該過程重要的是防降解和保證蛋白濃度不要太低。防降解主要有兩點(diǎn)，一是裂解前注意保持樣品處于低溫環(huán)境中，二是裂解時(shí)加入足夠的蛋白酶抑制劑。我們習(xí)慣先用冰冷的PBS做心臟的體循環(huán)灌注，然后冰上取腦，分離各腦區(qū)(嗅球，皮層，海馬，中腦，小腦，延髓，丘腦，紋狀體)后置于，用液氮速凍后轉(zhuǎn)移至-80度冰箱長期保存。接著是保證蛋白濃度，即要加入適量的裂解液，加太少會(huì)使蛋白提取不充分，加太多會(huì)讓蛋白濃度太低，一般經(jīng)驗(yàn)是這樣的，細(xì)胞樣品例如一個(gè)六孔板的細(xì)胞加60微升的裂解液，動(dòng)物組織的話每毫克組織加10微升裂解液。還要加上超聲破碎處理，具體方案見討論部分。如果沒有超聲破碎儀，那就用1毫升注射器不斷抽吸，冰上反復(fù)抽吸1分鐘左右，注意不要產(chǎn)生過多氣泡。(需要灌注取材的視頻可以私聊獲取，由于文件過大，又比較血腥，不宜直接放到文章里。)2、蛋白變性加入上樣緩沖液后100攝氏度煮10分鐘，這里的上樣緩沖液有兩種可選。急性肺損傷(acute lung injury，ALI)。上海外包動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)室

    角膜環(huán)鉆致角膜損傷兔模型一、服務(wù)信息1、動(dòng)物模型名稱：角膜環(huán)鉆致角膜損傷兔模型2、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種屬：新西蘭兔3、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物性別：雌雄不限4、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物年齡：2~3月齡5、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體重：6、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境：SPF級(jí)二、服務(wù)項(xiàng)目服務(wù)編號(hào)服務(wù)內(nèi)容服務(wù)周期價(jià)錢DH2021角膜環(huán)鉆致角膜損傷兔模型5周詢價(jià)1、實(shí)驗(yàn)方法：角膜環(huán)鉆致兔角膜機(jī)械性損傷。耳緣靜脈注射戊巴比妥鈉聯(lián)合肌肉注射速眠新Ⅱ進(jìn)行兔麻醉。環(huán)鉆前先用2%硼酸溶液沖洗雙眼，再滴**2滴消毒，以保持結(jié)膜清潔。開瞼，滴2%利多卡因滴眼液2滴行角膜表面麻醉，用已滅菌的6mm角膜環(huán)鉆分別在兔眼角膜上作環(huán)切，并滴入2滴氯霉素眼**潤洗，用顯微眼鑷、角膜上皮鏟和精細(xì)眼剪小心去掉角膜損傷區(qū)域上皮，術(shù)畢，滴氯霉素眼**2滴。2、檢測標(biāo)準(zhǔn)：肉眼或裂隙燈下觀察到角膜有損傷。三、交付標(biāo)準(zhǔn):1.提供動(dòng)物模型構(gòu)建過程中的原始實(shí)驗(yàn)記錄及數(shù)據(jù)圖片。2.根據(jù)要求提供構(gòu)建成功的模型動(dòng)物或相關(guān)組織材料。四、服務(wù)項(xiàng)目說明：1、如有特殊要求，請另詢價(jià)。2、雙方簽訂合同后，收取70%首付后啟動(dòng)實(shí)驗(yàn)。湖南模式動(dòng)物模型建模動(dòng)物疾病模型廣泛應(yīng)用于疾病機(jī)制研究、新藥靶點(diǎn)發(fā)現(xiàn)及篩選、藥效評(píng)價(jià)、轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)等醫(yī)學(xué)前沿領(lǐng)域。

    通過無極調(diào)控微負(fù)壓裝置來調(diào)節(jié)飼養(yǎng)倉2內(nèi)的壓力，通過高原低氧環(huán)境模擬裝置來調(diào)整飼養(yǎng)倉2內(nèi)氧含量，當(dāng)需要燈光時(shí)，通過高原光照環(huán)境模擬裝置15開啟紫外燈以及照明燈，通過高原溫度環(huán)境模擬裝置16來進(jìn)行調(diào)溫，通過高原濕度環(huán)境模擬裝置17調(diào)節(jié)飼養(yǎng)倉2內(nèi)濕度，通過動(dòng)物行為學(xué)遠(yuǎn)程觀察單元18可以監(jiān)控動(dòng)物的行為，飼養(yǎng)倉2內(nèi)若干代謝籠3配備投料斗8、飲水瓶9可以進(jìn)行攝食量、飲水量測定，聚糞斗10、尿液排出口11、糞便排出口12便于模型動(dòng)物的尿液和糞便常規(guī)檢測，并且本系統(tǒng)設(shè)置的多個(gè)代謝籠3可以同時(shí)培養(yǎng)多種動(dòng)物，造模動(dòng)物多。實(shí)施例2在實(shí)施例1的基礎(chǔ)上提供的一種高原性人類疾病模型制備環(huán)境模擬系統(tǒng)，所述無極調(diào)控微負(fù)壓裝置包括進(jìn)風(fēng)系統(tǒng)13、排風(fēng)系統(tǒng)14和霍尼威爾或西門子調(diào)控模塊，所述進(jìn)風(fēng)系統(tǒng)13設(shè)置在功能設(shè)備集成底座1內(nèi)，所述排風(fēng)系統(tǒng)14設(shè)置在飼養(yǎng)倉2頂部。本實(shí)施例的工作原理：本系統(tǒng)進(jìn)風(fēng)系統(tǒng)13內(nèi)集成有進(jìn)風(fēng)風(fēng)機(jī)單元、排風(fēng)系統(tǒng)14集內(nèi)成有排風(fēng)風(fēng)機(jī)單元。由于飼養(yǎng)倉2能夠密封，通過改變風(fēng)機(jī)風(fēng)量的方式來調(diào)節(jié)壓差，進(jìn)風(fēng)風(fēng)機(jī)單元和排風(fēng)風(fēng)機(jī)單元均與飼養(yǎng)倉2連通，通過調(diào)節(jié)進(jìn)、排風(fēng)的壓力差值，系統(tǒng)內(nèi)環(huán)境能夠形成(～)微負(fù)壓，系統(tǒng)配置霍尼威爾或西門子調(diào)控模塊。

    e：不同光強(qiáng)下gm20541基因敲除小鼠的暗適應(yīng)視網(wǎng)膜電圖b波統(tǒng)計(jì)；scotopicamplitude：暗光測定峰值；flashintensity：閃光強(qiáng)度；a-wave：a波；b-wave：b波。圖6：光適應(yīng)視網(wǎng)膜電圖(erg)檢測結(jié)果；圖中：a-b：不同光強(qiáng)下gm20541基因敲除小鼠的光適應(yīng)視網(wǎng)膜電圖軌跡圖；c：20cd·s/m2光強(qiáng)下gm20541基因敲除小鼠的光適應(yīng)閃爍(flicker)視網(wǎng)膜電圖軌跡圖；d：不同光強(qiáng)下gm20541基因敲除小鼠的光適應(yīng)視網(wǎng)膜電圖a波統(tǒng)計(jì)；e：不同光強(qiáng)下gm20541基因敲除小鼠的光適應(yīng)視網(wǎng)膜電圖b波統(tǒng)計(jì)；f：20cd·s/m2光強(qiáng)下gm20541基因敲除小鼠的光適應(yīng)閃爍(flicker)視網(wǎng)膜電圖統(tǒng)計(jì)。sixko或cko表示gm20541基因敲除純合子小鼠；ctr是指野生型；het是指雜合子。圖7：視網(wǎng)膜前體細(xì)胞特異敲除gm20541基因小鼠視網(wǎng)膜切片免疫組化染色結(jié)果；小鼠年齡：4個(gè)月；os：outer-segment(外節(jié))；is：inner-segment(內(nèi)節(jié))；onl：outernuclearlayer(外核層)；inl：innernuclearlayer(內(nèi)核層)；圖中：a：視網(wǎng)膜前體細(xì)胞特異敲除gm20541基因小鼠視網(wǎng)膜石蠟切片的h&e染色結(jié)果，外核層及內(nèi)核層均變?。籦：對不同部位的gm20541敲除鼠視網(wǎng)膜外核層厚度統(tǒng)計(jì)。圖8：視網(wǎng)膜前體細(xì)胞特異敲除gm20541基因小鼠ihc染色結(jié)果。裸鼠皮下成瘤：前肢近腋后皮下注射細(xì)胞懸液； 裸鼠原位瘤：胰腺成瘤；尾靜脈注射成瘤。

    本發(fā)明實(shí)施例提供了由上述的方法所得到的視網(wǎng)膜色素變性疾病模型在視網(wǎng)膜色素變性性疾病研究中的應(yīng)用。進(jìn)一步地，在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述研究是以非疾病的為目的。通過本發(fā)明的構(gòu)建方法得到的動(dòng)物模型其具有典型視網(wǎng)膜色素變性性疾病特征，其具有非常廣闊的應(yīng)用前景，例如將其用于研究視網(wǎng)膜色素變性性疾病的發(fā)病過程、發(fā)病機(jī)制，為深入了解研究視網(wǎng)膜色素變性性疾病提供基礎(chǔ)。又或者將其用于篩選用于預(yù)防或視網(wǎng)膜色素變性性疾病藥物、用于評(píng)價(jià)藥物的療效或預(yù)后等。第三方面，本發(fā)明實(shí)施例提供了由上述的方法所得到的視網(wǎng)膜色素變性疾病模型在篩選用于預(yù)防或視網(wǎng)膜色素變性性疾病藥物中的應(yīng)用。在本發(fā)明方面提供了構(gòu)建方法的基礎(chǔ)上，本領(lǐng)域技術(shù)人員容易想到將由該方法得到的視網(wǎng)膜色素變性疾病模型用于篩選預(yù)防或視網(wǎng)膜色素變性性疾病藥物或其他類似領(lǐng)域，這也是屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。進(jìn)一步地，在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述應(yīng)用包括：向所述視網(wǎng)膜色素變性疾病模型施用候選藥物，如果所述視網(wǎng)膜色素變性疾病模型在施用所述候選藥物前后發(fā)生如下變化中的至少一種，則指示所述候選藥物可以作為預(yù)防或視網(wǎng)膜色素變性性疾病的藥物：(1)施用所述候選藥物后?？梢院喕瘜?shí)驗(yàn)操作和樣品收集。云南動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)

（arteriosclerosis，AS）是一種緩慢進(jìn)行性疾病，嚴(yán)重影響人類健康。上海外包動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)室

    橄欖油聯(lián)合酒精致肝硬化門脈高壓大鼠模型一、服務(wù)信息1、動(dòng)物模型名稱：橄欖油聯(lián)合酒精致肝硬化門脈高壓大鼠模型2、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種屬：SD大鼠3、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物性別：雄性4、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物年齡：5周5、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體重：150g-180g6、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境：SPF級(jí)二、服務(wù)項(xiàng)目服務(wù)編號(hào)服務(wù)內(nèi)容服務(wù)周期價(jià)錢DH2016橄欖油聯(lián)合酒精致肝硬化門脈高壓大鼠模型20周詢價(jià)1、實(shí)驗(yàn)方法：橄欖油聯(lián)合酒精誘導(dǎo)。按，背頸部皮下注射50％CCl4的橄欖油溶液，**注射量加倍（6mL/kg體重），2次/周，皮下注射共13周；造模前4周為10%酒精溶液喂養(yǎng)代替飲水，4周后改為30%酒精溶液灌胃（30%酒精溶液灌胃1mL/100g體重，3次/周）。繼續(xù)正常飼養(yǎng)1個(gè)月。實(shí)驗(yàn)結(jié)束測量門靜脈血流量(PBF)和腸系膜上動(dòng)脈血流量(SMABF)。處死，取肝臟進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。2、檢測標(biāo)準(zhǔn)：門靜脈及腸系膜上動(dòng)脈血流量情況與正常對照組比較均增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義肝組織病理可見肝硬化病理改變。三、交付標(biāo)準(zhǔn):1.提供動(dòng)物模型構(gòu)建過程中的原始實(shí)驗(yàn)記錄及數(shù)據(jù)圖片。2.根據(jù)要求提供構(gòu)建成功的模型動(dòng)物或相關(guān)組織材料。四、服務(wù)項(xiàng)目說明：1、如有特殊要求，請另詢價(jià)。2、雙方簽訂合同后，收取70%首付后啟動(dòng)實(shí)驗(yàn)。上海外包動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)室