1.首要原則：細胞不重要情況下立即丟棄，培養(yǎng)箱滅菌，所用培養(yǎng)基也都要丟棄，器械等重新滅菌或拆用新的。2.細菌污染一般都救不回來了，發(fā)現(xiàn)的時候培養(yǎng)基一般都很渾濁且細胞都死了3.污染且細胞很重要時：遇到念球菌污染，且細胞為基因改造細胞，非常重要。如231貼壁乳腺細胞，發(fā)現(xiàn)細胞周圍出現(xiàn)很小的串珠透亮圓點，非常像念球菌污染，此時細胞狀態(tài)尚可，且污染少。處理如下：用預熱或室溫PBS清洗3次，可適當振搖，將污染沖洗下來。隨后加入10-20%雙抗到培養(yǎng)瓶，置于37度培養(yǎng)箱1h，之后再用PBS清洗三遍，直至視野下無可見污染。此時細胞也被沖下大部分，因此此方法只適用在細胞貼壁強，狀態(tài)好，密度高時使用。之后每天再更換培養(yǎng)基，每次用PBS沖洗2遍。過幾天細胞狀態(tài)尚可時，消化離心時用500r，3min，去掉上清，重復3次。這個方法是根據(jù)文獻可利用念球菌和細胞體積重量差異實現(xiàn)分離。基本上這一步做完以后，污染就基本了，接下來就注意多觀察，勤換液就行。流式細胞周期檢測試劑盒是一種用于研究細胞周期的重要工具。海南疾病模型科研技術(shù)服務外包

    小鼠尾尖用酒精擦拭尾巴，引起輕微的血管擴張；用無菌手術(shù)刀、刀片或鋒利的剪刀，快速截斷小鼠尾尖1-2毫米。如果需要多次，之后每次需截除2-3毫米；從尾部像尾尖方向按摩，增加血流；用采集血液；結(jié)束后，按壓傷口或使用止血劑來止血；每次量大約可達。小鼠眼球取血單手保定好小鼠；必要時剪掉小鼠胡須，防止污染血液；輕壓取血側(cè)眼部皮膚，使眼球充血突出；用彎頭鑷夾取眼球并快速在摘??；同時用左手中指輕按小鼠心臟部位，以加快心臟泵血速度；當血液流盡時，用脫臼法處死小鼠；大鼠眼眶取血先將小鼠進行麻醉，大鼠翻正反射消失時不在繼續(xù)麻醉；抗凝處理過的玻璃毛細采樣管，掰成2-3厘米長度；右手食指和拇指輕按眼眶兩側(cè)皮膚，使眼球突出，毛細管從內(nèi)側(cè)的眼球與眼瞼的縫隙處進入，輕輕旋轉(zhuǎn)毛細管，稍微深入眼球后上方，血液流速快的時候4-5滴即可，溫柔的將毛細管取出；用棉簽按壓大鼠眼眶止血，每次可取血50-100微升，將血液放入冰盒中保存。小鼠心臟取血先將小鼠麻醉，稍靠右側(cè)平躺在手術(shù)板上固定；左側(cè)第三四根肋骨間觸摸心臟，跳動明顯，慢慢進針；針有回血停止進針，開始取血；一次可以300到500微升，小鼠存活，放到加熱墊上待小鼠蘇醒后放入籠中。黑龍江科研技術(shù)服務ELISA試劑盒在國內(nèi)有許多種叫法，例如：ELISA檢測試劑盒、ELISAKit。

    常見的有理染色、WesternBlot、PCR等），實驗儀器是否需要預約使用。如果需要外送公司檢測，需要提前聯(lián)系好商家，以及了解清楚樣本如何獲取，如何運輸。飼養(yǎng)動物及干預動物購買后需要將時間節(jié)點提前規(guī)劃好，比如，周需要做什么？測量體重？觀察飲食？測量需要的指標？中間有無特殊操作？比如灌胃、測量體重、做CT檢測、取血？……第幾周取材？取材需要哪些？預實驗方案就要提前設計清楚以上內(nèi)容。取材及樣品準備取材需要提前到動物房禁食、稱體重、取出動物、手術(shù)的、固定所需要的試劑和EP管，WesternBlot和PCR所需要的樣本儲存條件。比如凍存管、EP管，是否需要冰塊？是否需要液氮？取材當天需要多少人？是否需要請人幫忙？如果所需要取出的樣本較多，建議大家請人一起幫忙，流水線作業(yè)，這樣能節(jié)省時間，并且能保證樣品的質(zhì)量。如果請人，每個人需要負責哪一板塊的工作，比如誰負責，誰負責取血液，誰負責取，誰負責拍照、誰負責儲存，都需要提前規(guī)劃交代清楚。實驗指標檢測如果是需要自己做的檢測，比如常見的WesternBlot、PCR，建議提前可以看看教程（無論是視頻還是貼吧，都要自己多方參考）。有了一定的理論基礎后，再向老師、師兄師姐學習經(jīng)驗和技術(shù)。

    原理HE染色主要使用蘇木精和伊紅這兩種染液，其中蘇木精堿性染液為藍色，可以將組織的酸性結(jié)構(gòu)染成藍紫色（細胞核呈現(xiàn)藍色；軟骨基質(zhì)、鈣鹽顆粒呈深藍；粘液呈灰藍）；伊紅是一種化學合成的酸性染料，在水中解離成帶負電荷的陰離子，易于蛋白質(zhì)氨基中的正電荷結(jié)合使細胞漿染色。細胞漿、肌肉、結(jié)締組織、嗜伊紅顆粒等被染成不同程度的紅色或粉紅色。材料與儀器小鼠、固定液、酒精、二甲苯、石蠟、蜂蠟蘇木精染液、伊紅酒精溶液、鹽酸酒精溶液甘油蛋白粘片劑、中性樹膠石蠟包埋機、切片機、恒溫箱、蠟杯酒精燈、解剖剪、培養(yǎng)皿、鑷子、單面刀片染色缸、蓋玻片、載玻片、玻片盤、顯微鏡溫度計、水浴鍋步驟一、制作卵巢石蠟切片1、取材小鼠腹腔注射戊巴比妥鈉（50mg/kg）進行麻醉，頸椎脫臼法處死小鼠，取出雙側(cè)卵巢。取下所需組織，切成一小塊3~4mm厚。2、固定、洗滌、脫水（1）將切好的卵巢組織用生理鹽水洗一下，使用中性福爾馬林固定液固定30~50min。后用流水沖洗3次，每次5min。（2）卵巢組織依次經(jīng)70%、80%、90%乙醇溶液脫水，各30min。（3）再放入95%、100%乙醇溶液各2次，每次20min。3、透明、透蠟（1）使用純酒精、二甲苯等量混合液處理組織15min。干貨分享｜選對實驗室常用培養(yǎng)基DMEM和1640。

    代謝組學的研究對象大都是相對分子量在1000以內(nèi)的小分子物質(zhì)，因此常用的血液樣本在取樣后，應小心操作，防止溶血，盡快分離出血清，分置于溫環(huán)境下保存。由于用于理實驗的動物采集相對其他樣品的采集，操作更繁瑣，在處理過程中許多細節(jié)容易忽略，造成數(shù)據(jù)不完美（甚至不能用）。因此接下來將重點介紹樣品采集的注意事項及其固定。樣品采集注意事項應新鮮，操作時間盡可能短，否則細胞發(fā)生死后變化、自融及現(xiàn)象。是動物心臟還在跳動時采集，樣本取出后在5分鐘以內(nèi)置于固定液內(nèi)，避免長時間暴露在空氣環(huán)境中。塊盡量小而薄。塊的厚度以不超過5mm為宜，較為理想的厚度為2mm左右，主要目的是使固定液迅速而均勻的滲入塊內(nèi)部。勿使塊受擠壓。在采集過程中，應盡量選擇較為鋒利的手術(shù)，如手術(shù)刀片等，避免操作過程中擠壓挫傷標本。擠壓過的均不可用。固定液的量一般以塊大小的20倍為宜，能夠在容器內(nèi)自由移動。盡量保持的原有形態(tài)。新鮮經(jīng)固定后，或多或少產(chǎn)生收縮現(xiàn)象（如胃腸），為此可將展平，以盡可能維持原形。保持清潔。塊上如有血液、污物、粘液、食物、糞便等，可用生理鹽水沖洗，然后再入固定液，但要注意防止損傷。要熟悉采集部位。要能準確的按解剖部位采集。實驗干貨 | 分子克隆實驗——無縫克隆。海南疾病模型科研技術(shù)服務外包

科普知識 —了解IgM、IgG、IgA、IgE四種抗體。海南疾病模型科研技術(shù)服務外包

    m6A修飾圖譜構(gòu)建及作用機制：通過m6A甲基化測序（MeRIP-Seq,miCLIP）構(gòu)建疾病細胞模型或者發(fā)病組織的m6A修飾譜，分析m6A的motif,peaks數(shù)量及分布，Peak關(guān)聯(lián)基因的特征，聯(lián)合RNA-seq研究m6A甲基化與表達的關(guān)系。m6A研究思路方案一方案二研究案例1、.(IF=)為研究ALKBH5的m6A作用機制，作者利用芯片和m6A-seq篩選到膠質(zhì)瘤增殖相關(guān)的FOXM1，通過qPCR、WB、免疫熒光、核質(zhì)分離WB/qPCR、RIP和MeRIP等實驗證明ALKBH5通過去甲基化調(diào)節(jié)FOXM1在GSCs中的表達。為研究ALKBH5對FOXM1的作用是否受其他因子的調(diào)節(jié)，作者研究了FOXM1的鄰近基因，發(fā)現(xiàn)lncRNAFOXM1-AS與FOXM1序列互補，且共表達、共定位，進一步通過RIP,RNApulldown等實驗證明lncRNAFOXM1-AS促進ALKBH5和FOXM1初級轉(zhuǎn)錄本的相互作用。通過細胞實驗進一步驗證ALKBH5在lncRNAFOXM1-AS的作用下維持FOXM1的表達和細胞增殖，從而維持GSCs的干性。圖3ALKBH5敲除細胞中m6A修飾的特征和基因表達的變化2、RNAN6-methyladenosinemethyltransferaseMETTL3promoteslivercancerprogressionHepatology,2017.(IF=)表觀遺傳改變極大地促進了人類癥的發(fā)生。傳統(tǒng)的表觀遺傳研究主要集中在DNA甲基化，組蛋白修飾和染色質(zhì)重構(gòu)。近。海南疾病模型科研技術(shù)服務外包