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湖南腦定位動物模型造模

來源: 發(fā)布時間:2024-01-03

    本發(fā)明實施例提供了由上述的方法所得到的視網(wǎng)膜色素變性疾病模型在視網(wǎng)膜色素變性性疾病研究中的應(yīng)用。進一步地,在本發(fā)明的一些實施方案中,所述研究是以非疾病的為目的。通過本發(fā)明的構(gòu)建方法得到的動物模型其具有典型視網(wǎng)膜色素變性性疾病特征,其具有非常廣闊的應(yīng)用前景,例如將其用于研究視網(wǎng)膜色素變性性疾病的發(fā)病過程、發(fā)病機制,為深入了解研究視網(wǎng)膜色素變性性疾病提供基礎(chǔ)。又或者將其用于篩選用于預(yù)防或視網(wǎng)膜色素變性性疾病藥物、用于評價藥物的療效或預(yù)后等。第三方面,本發(fā)明實施例提供了由上述的方法所得到的視網(wǎng)膜色素變性疾病模型在篩選用于預(yù)防或視網(wǎng)膜色素變性性疾病藥物中的應(yīng)用。在本發(fā)明方面提供了構(gòu)建方法的基礎(chǔ)上,本領(lǐng)域技術(shù)人員容易想到將由該方法得到的視網(wǎng)膜色素變性疾病模型用于篩選預(yù)防或視網(wǎng)膜色素變性性疾病藥物或其他類似領(lǐng)域,這也是屬于本發(fā)明的保護范圍。進一步地,在本發(fā)明的一些實施方案中,所述應(yīng)用包括:向所述視網(wǎng)膜色素變性疾病模型施用候選藥物,如果所述視網(wǎng)膜色素變性疾病模型在施用所述候選藥物前后發(fā)生如下變化中的至少一種,則指示所述候選藥物可以作為預(yù)防或視網(wǎng)膜色素變性性疾病的藥物:(1)施用所述候選藥物后。上面是我們已構(gòu)建成功的動物模型,我們還可以根據(jù)客戶實驗方案構(gòu)建其它模型,具體要求請咨詢。湖南腦定位動物模型造模

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    或者是還包括為這種過程、方法、物品或者設(shè)備所固有的要素。在沒有更多限制的情況下,由語句“包括一個……”限定的要素,并不排除在包括所述要素的過程、方法、物品或者設(shè)備中還存在另外的相同要素。以下結(jié)合實施例對本實用新型的特征和性能作進一步的詳細描述。實施例1本實用新型提供一種高原性人類疾病模型制備環(huán)境模擬系統(tǒng),包括功能設(shè)備集成底座1和設(shè)置在功能設(shè)備集成底座1上的飼養(yǎng)倉2,所述飼養(yǎng)倉2具有無極調(diào)控微負壓裝置、高原低氧環(huán)境模擬裝置、高原光照環(huán)境模擬裝置15、高原溫度環(huán)境模擬裝置16、高原濕度環(huán)境模擬裝置17、動物行為學遠程觀察單元18,所述飼養(yǎng)倉2內(nèi)設(shè)置有若干代謝籠3,飼養(yǎng)倉2前后箱體上設(shè)置有觀察窗4和若干操作窗5,飼養(yǎng)倉2左右箱體上分別設(shè)置有小物件傳遞窗6和大物件傳遞窗7,所述代謝籠3還包括設(shè)置在代謝籠3上的投料斗8、飲水瓶9和設(shè)置在代謝籠3下方的聚糞斗10、尿液排出口11、糞便排出口12。本實施例的工作原理:本裝置的各個功能均通過設(shè)置在飼養(yǎng)倉2上的功能控制面板19控制,本裝置外形采用304不銹鋼,具有良好的氣密性。實驗動物送入飼養(yǎng)倉2內(nèi)部后,關(guān)閉小物件傳遞窗6和大物件傳遞窗7,通過功能控制面板19實現(xiàn)飼養(yǎng)倉2內(nèi)部環(huán)境模擬。湖南腦定位動物模型造模缺血性腦血管病(ICVD)是威脅人類健康與生存的主要疾病之一。

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    e:不同光強下gm20541基因敲除小鼠的暗適應(yīng)視網(wǎng)膜電圖b波統(tǒng)計;scotopicamplitude:暗光測定峰值;flashintensity:閃光強度;a-wave:a波;b-wave:b波。圖6:光適應(yīng)視網(wǎng)膜電圖(erg)檢測結(jié)果;圖中:a-b:不同光強下gm20541基因敲除小鼠的光適應(yīng)視網(wǎng)膜電圖軌跡圖;c:20cd·s/m2光強下gm20541基因敲除小鼠的光適應(yīng)閃爍(flicker)視網(wǎng)膜電圖軌跡圖;d:不同光強下gm20541基因敲除小鼠的光適應(yīng)視網(wǎng)膜電圖a波統(tǒng)計;e:不同光強下gm20541基因敲除小鼠的光適應(yīng)視網(wǎng)膜電圖b波統(tǒng)計;f:20cd·s/m2光強下gm20541基因敲除小鼠的光適應(yīng)閃爍(flicker)視網(wǎng)膜電圖統(tǒng)計。sixko或cko表示gm20541基因敲除純合子小鼠;ctr是指野生型;het是指雜合子。圖7:視網(wǎng)膜前體細胞特異敲除gm20541基因小鼠視網(wǎng)膜切片免疫組化染色結(jié)果;小鼠年齡:4個月;os:outer-segment(外節(jié));is:inner-segment(內(nèi)節(jié));onl:outernuclearlayer(外核層);inl:innernuclearlayer(內(nèi)核層);圖中:a:視網(wǎng)膜前體細胞特異敲除gm20541基因小鼠視網(wǎng)膜石蠟切片的h&e染色結(jié)果,外核層及內(nèi)核層均變??;b:對不同部位的gm20541敲除鼠視網(wǎng)膜外核層厚度統(tǒng)計。圖8:視網(wǎng)膜前體細胞特異敲除gm20541基因小鼠ihc染色結(jié)果。

    中風模型)股動脈內(nèi)皮損傷模型頸動脈結(jié)扎或部分結(jié)扎術(shù)深靜脈血栓模型下肢缺血模型門腔靜脈分流術(shù)左、右心血流動力學測試左心系統(tǒng)測壓右心系統(tǒng)測壓腹部手術(shù)膽管結(jié)扎術(shù)胃大部切除術(shù)小腸部分切除術(shù)急性腎衰模型單側(cè)腎切除術(shù)3/4腎切除術(shù)5/6腎切除術(shù)脾切除術(shù)腎上腺切除術(shù)腎上腺髓質(zhì)摘除術(shù)骨關(guān)節(jié)炎模型脾神經(jīng)切除術(shù)肝臟迷走神經(jīng)切斷術(shù)胃迷走神經(jīng)切斷術(shù)膈下迷走神經(jīng)切斷術(shù)去勢術(shù)輸精管結(jié)扎術(shù)卵巢切除術(shù)單側(cè)或雙側(cè)輸卵管結(jié)扎術(shù)子宮切除術(shù)輸尿管結(jié)扎術(shù)神經(jīng)系統(tǒng)手術(shù)單側(cè)腦內(nèi)定位插管雙側(cè)腦內(nèi)定位插管側(cè)腦室導管側(cè)腦室微量滲透泵導管第3腦室插管腓腸肌神經(jīng)切除術(shù)軟組織手術(shù)甲狀腺切除術(shù)甲狀旁腺切除術(shù)甲狀腺切除術(shù)伴甲狀旁腺再植入術(shù)胸腺切除術(shù)松果體切除術(shù)垂體切除術(shù)傳感器植入手術(shù)血壓遙測左心室壓遙測門靜脈壓遙測血壓與心電圖遙測血壓與腦電圖遙測胸內(nèi)壓遙測胸內(nèi)壓與心電圖遙測心電圖遙測腦電圖遙測肌電遙測心電圖與腦電圖遙測腦電圖與肌電遙測血糖遙測體溫與活動度遙測血管導管手術(shù)頸動脈導管顱內(nèi)給藥頸動脈導管腹主動脈導管股動脈導管股靜脈導管單側(cè)頸靜脈導管雙側(cè)頸靜脈導管門靜脈導管下腔靜脈導管非血管導管手術(shù)膽管導管胃導管十二指腸導管空腸導管回腸導管盲腸導管結(jié)腸導管膀。通過阿霉素(Adriamycin,ADR)腹腔注射給藥(Adriamycin,ADR)試圖造成小鼠心衰。

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    把膜先用TBST泡洗兩遍再用5%脫脂奶粉或者BSA室溫封閉1-2小時。注意一定要讓蛋白面充分接觸封閉液。2、孵一抗脫脂奶粉封閉的話,要用TBST泡洗三遍再轉(zhuǎn)移至一抗溶液中,BSA封閉的可以直接轉(zhuǎn)移至一抗中。如果膜的寬(膜是一個長方形,這里的寬與長相對應(yīng))不大于8毫米,我習慣置于15毫升離心管中孵育,兩條膜"背對背"式放置于一個管子里(3毫升液體即可)。如果大于8毫米,就用普通的5格的一抗孵育盒(4毫升即可)。4度過夜,一般是12-18個小時,注意放置水平,用搖床。內(nèi)參等蛋白豐度很高的如果孵久了可能出現(xiàn)條帶連在一起的情況,這時可以縮短孵育時間或者降低一抗的濃度。六、孵二抗顯影1、孵二抗室溫一個小時足矣。這步要注意的是建議用5%BSA或者脫脂奶粉稀釋二抗,這樣背景會干凈許多。也要注意膜的蛋白面要充分接觸二抗溶液,我們一般一條膜一個槽地孵。2、顯影這一步有個細節(jié)可能有些同學沒注意到,就是ECL發(fā)光液要與HRP反應(yīng)一分鐘后顯影效果才會更好,還有要注意的是顯影液要均勻覆蓋,一般第二次顯影(加新的顯影液)比一次好看。通過高脂飲食誘導構(gòu)建非酒精性脂肪肝模型。西藏模式動物模型實驗室

可以克服人類某些疾病潛伏期長,病程長和發(fā)病率低的缺點。湖南腦定位動物模型造模

    所述外顯子序列為第3外顯子序列。進一步地,在本發(fā)明的一些實施方案中,利用cre-loxp基因敲除技術(shù)敲除gm20541基因上的第3外顯子序列。上述敲除策略是采用cre-loxp敲除技術(shù)敲除gm20541基因。但在其他的實施例中,實現(xiàn)基因敲除的技術(shù)手段有很多,例如crispr/cas9技術(shù)、人工核酸酶介導的鋅指核酸酶技術(shù)(zinc-fingernucleases,zfn)、轉(zhuǎn)錄因子樣效應(yīng)物核酸酶技術(shù)(transceriptionactivator-likeeffectornucleases,talen)等。因此,在其他的實施例中采用crispr/cas9技術(shù)或其他的技術(shù)手段敲除gm20541基因,也是屬于本發(fā)明的保護范圍。進一步地,在本發(fā)明的一些實施方案中,所述目標動物為哺乳動物。進一步地,在本發(fā)明的一些實施方案中,所述哺乳動物選自小鼠、大鼠、狗、豬、猴以及猿中的任意一種。需要說明是,本發(fā)明所述的目標動物并不限于上述的動物,其他類型的哺乳動物也是可行,無論選用何種動物,只要是具有g(shù)m20541基因或其同源基因的動物,均可作為本發(fā)明所述構(gòu)建方法中的目標動物,在其前體細胞中敲除gm20541基因,使其表現(xiàn)出視網(wǎng)膜色素變性性疾病特征,作為視網(wǎng)膜色素變性疾病模型,這也是屬于本發(fā)明的保護范圍。第二方面。湖南腦定位動物模型造模