原理HE染色主要使用蘇木精和伊紅這兩種染液,其中蘇木精堿性染液為藍(lán)色,可以將組織的酸性結(jié)構(gòu)染成藍(lán)紫色(細(xì)胞核呈現(xiàn)藍(lán)色;軟骨基質(zhì)、鈣鹽顆粒呈深藍(lán);粘液呈灰藍(lán));伊紅是一種化學(xué)合成的酸性染料,在水中解離成帶負(fù)電荷的陰離子,易于蛋白質(zhì)氨基中的正電荷結(jié)合使細(xì)胞漿染色。細(xì)胞漿、肌肉、結(jié)締組織、嗜伊紅顆粒等被染成不同程度的紅色或粉紅色。材料與儀器小鼠、固定液、酒精、二甲苯、石蠟、蜂蠟蘇木精染液、伊紅酒精溶液、鹽酸酒精溶液甘油蛋白粘片劑、中性樹(shù)膠石蠟包埋機(jī)、切片機(jī)、恒溫箱、蠟杯酒精燈、解剖剪、培養(yǎng)皿、鑷子、單面刀片染色缸、蓋玻片、載玻片、玻片盤(pán)、顯微鏡溫度計(jì)、水浴鍋步驟一、制作卵巢石蠟切片1、取材小鼠腹腔注射戊巴比妥鈉(50mg/kg)進(jìn)行麻醉,頸椎脫臼法處死小鼠,取出雙側(cè)卵巢。取下所需組織,切成一小塊3~4mm厚。2、固定、洗滌、脫水(1)將切好的卵巢組織用生理鹽水洗一下,使用中性福爾馬林固定液固定30~50min。后用流水沖洗3次,每次5min。(2)卵巢組織依次經(jīng)70%、80%、90%乙醇溶液脫水,各30min。(3)再放入95%、100%乙醇溶液各2次,每次20min。3、透明、透蠟(1)使用純酒精、二甲苯等量混合液處理組織15min。分享的內(nèi)容能對(duì)大家有所幫助,想要了解更多,歡迎致電咨詢。貴州動(dòng)物科研技術(shù)服務(wù)構(gòu)建
METTL3能夠促進(jìn)肺腺細(xì)胞的生長(zhǎng)、生存和侵襲,但還不清楚它是否作為m6A調(diào)節(jié)器或效應(yīng)器發(fā)揮作用[25]。在急性髓細(xì)胞白血病(AML)患者中,m(6)A調(diào)控基因的突變或拷貝數(shù)變化與TP53突變存在密切聯(lián)系,且m(6)A調(diào)控基因的改變與AML不良預(yù)相關(guān)[26]。此外,F(xiàn)TO在AML中高表達(dá),它通過(guò)降低mRNA轉(zhuǎn)錄本中的m(6)水平,調(diào)節(jié)ASB2和RARA等靶點(diǎn)的表達(dá),增強(qiáng)了白血病基因介導(dǎo)的細(xì)胞轉(zhuǎn)化和白血病形成,并抑制全反式維甲酸(ATRA)誘導(dǎo)的AML細(xì)胞分化[27]。在脂肪形成過(guò)程中,F(xiàn)TO表達(dá)與m6A水平成負(fù)相關(guān),促進(jìn)脂肪形成[3]。在膠質(zhì)細(xì)胞瘤樣細(xì)胞中,ALKBH5通過(guò)lncRNAFOXM1介導(dǎo)FOXM1基因pre-mRNA上的m6A修飾維持膠質(zhì)瘤細(xì)胞的成瘤性[28]。此外,甲基轉(zhuǎn)移酶METTL3或METTL14的敲除,能夠改變m6A的富集和ADAM19的表達(dá),極大地促進(jìn)了膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、自我更新和形成[29]。圖2m6ARNA修飾和介導(dǎo)的功能[30]m6A的研究方向主要是通過(guò)研究m6A修飾相關(guān)的甲基化、去甲基化酶和識(shí)別蛋白的功能,進(jìn)而研究m6A修飾的生物學(xué)功能和作用機(jī)制:一般通過(guò)敲除m6A酶分子,研究下游功能基因分子的表達(dá)和m6A甲基化情況,通過(guò)介導(dǎo)相關(guān)基因異常(可變剪切、穩(wěn)定性、翻譯、miRNA調(diào)控)影響細(xì)胞表型和功能特征。湖南科研技術(shù)服務(wù)外包EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)是一種新型的細(xì)胞增殖檢測(cè)方法。
準(zhǔn)備碎冰和。把膜置于甲醇溶液中活化1分鐘,然后轉(zhuǎn)移至轉(zhuǎn)膜液中平衡3分鐘后備用。2、轉(zhuǎn)膜組裝轉(zhuǎn)膜三明治夾,這一步很關(guān)鍵,重要的是膠和膜之間不能有氣泡且膜與膠要保證貼合緊密(否則會(huì)翻車(chē)),可以加多點(diǎn)轉(zhuǎn)膜液泡著。組裝好后加滿轉(zhuǎn)膜液,設(shè)置電源參數(shù),我習(xí)慣恒流轉(zhuǎn)膜,200-280毫安,1-2小時(shí),根據(jù)分子量定,如50KD的分子用60分鐘就夠了。如果一個(gè)電源帶兩個(gè)轉(zhuǎn)膜大槽即四塊膠,我就會(huì)用恒壓70-110V。這個(gè)過(guò)程重要的是做好降溫。這里簡(jiǎn)單說(shuō)一下蛋白分子量與玻璃板厚度,分離膠的濃度,轉(zhuǎn)膜電源參數(shù)的選擇問(wèn)題。如果是能用1毫米的玻璃板就不用,因?yàn)檗D(zhuǎn)膜是在電場(chǎng)的作用下蛋白分子從膠上遷移到膜上,1毫米膠的蛋白遷移距離要比。選擇更薄的膠蛋白轉(zhuǎn)膜時(shí)間可以減少,從而減少發(fā)熱,以免膠變形,條帶也會(huì)更好看。然后是分離膠的濃度,如果是150—200KD的分子選10%以下的的分離膠,200—300KD的選8%的,300KD以上的選6%的,小于30KD的200mA30分鐘,30-100KD的按分子量的數(shù)值算,如70KD,250mA70分鐘;100-150KD的250mA100分鐘;150—300KD的分子轉(zhuǎn)膜條件用280毫安(以上均是對(duì)于,),120分鐘足矣,前提是膠的濃度相適應(yīng)。五、封閉孵一抗1、封閉轉(zhuǎn)膜結(jié)束后。
應(yīng)根據(jù)所檢測(cè)指標(biāo)的要求,需采取不同策略處理。在如今分子學(xué)當(dāng)?shù)赖默F(xiàn)實(shí)背景下,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)除了對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的體征及生理指標(biāo)進(jìn)行全的監(jiān)控外,各種分子檢測(cè)甚至是組學(xué)檢測(cè)也開(kāi)始大行其道,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)束之后的機(jī)制研究成為了實(shí)驗(yàn)的重頭戲。一般來(lái)說(shuō),動(dòng)物實(shí)驗(yàn)檢測(cè)對(duì)象主要包括:(1)體液中各類(lèi)因子定性及定量檢測(cè)由于此類(lèi)檢測(cè)對(duì)象多為蛋白及各類(lèi)小分子物質(zhì),因此在取樣過(guò)程中應(yīng)注意防止此類(lèi)物質(zhì)降解,在獲取后,應(yīng)及時(shí)置于溫(≤-80℃)進(jìn)行保存,在后續(xù)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,也應(yīng)當(dāng)注意保存條件的穩(wěn)定性,避免反復(fù)凍融。常用的方法便是酶聯(lián)免吸附測(cè)定(ELISA),除此之外,可利用生化分析儀及不同檢測(cè)方法的(比色法、比濁法等)方法對(duì)各類(lèi)生化指標(biāo)及因子進(jìn)行定性及定量檢測(cè)。(2)生理變化及免組化檢測(cè)常用的理檢測(cè)多使用H&E染色對(duì)細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核進(jìn)行染色標(biāo)記,以觀察細(xì)胞變化。除此之外,許多特殊染色也在理生理變化中得到了應(yīng)用,如利用Masson染色檢測(cè)纖維化變,Nissl染色檢測(cè)神經(jīng)元損傷,β-半乳糖甘酶染色檢測(cè)細(xì)胞衰老等。此外,還可以通過(guò)免組化技術(shù)對(duì)某些特異性標(biāo)記物進(jìn)行免顯色檢測(cè),達(dá)到原位定性或定量檢測(cè)的目的。。動(dòng)物疾病模型:為人類(lèi)健康保駕護(hù)航。
在人類(lèi)疾病研究中數(shù)據(jù)表明,常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型按產(chǎn)生原因分為以下5類(lèi):自發(fā)性動(dòng)物模型、誘發(fā)型動(dòng)物模型、遺傳工程動(dòng)物模型、生物醫(yī)學(xué)動(dòng)物模型和陰性動(dòng)物模型。下面上海研錄帶大家一起看看吧:1、自發(fā)性動(dòng)物模型:是指動(dòng)物未經(jīng)任何有意識(shí)的人工處理,在自然條件下或基因突變條件下所產(chǎn)生的疾病模型。主要包括突變型的遺傳病模型和近郊系的疾病模型。2、誘發(fā)型動(dòng)物模型:亦稱實(shí)驗(yàn)性動(dòng)物模型。是使用物理、化學(xué)或生物致病因素誘導(dǎo)動(dòng)物產(chǎn)生某些類(lèi)似人類(lèi)疾病表現(xiàn)而制備的動(dòng)物模型。此模型具有制備方法簡(jiǎn)單,實(shí)驗(yàn)條件容易控制,重復(fù)性好等特點(diǎn),廣泛應(yīng)用于藥物篩選、毒理、傳染病、病理機(jī)制的研究。3、遺傳工程動(dòng)物模型:是利用遺傳工程技術(shù)對(duì)動(dòng)物基因組進(jìn)行修飾,用于研究基因功能或疾病機(jī)制的動(dòng)物模型。也稱基因修飾動(dòng)物模型,是指利用胚胎工程和基因工程等生物技術(shù)有目的的干預(yù)動(dòng)物的遺傳組成,導(dǎo)致動(dòng)物出現(xiàn)新的性狀,并使其能夠有效地遺傳下去,形成新的可供生命科學(xué)研究的和其他目的所用的動(dòng)物模型。4、生物醫(yī)學(xué)動(dòng)物模型:也是指利用健康生物的特定生物學(xué)特征,研究人類(lèi)疾病相似表現(xiàn)得模型。這類(lèi)動(dòng)物模型與人類(lèi)疾病存在一定的差異,研究者應(yīng)加以比較,從中獲得有關(guān)材料。細(xì)胞轉(zhuǎn)染又分為瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染是指外源基因進(jìn)入受體細(xì)胞后.山西病理科研技術(shù)服務(wù)實(shí)驗(yàn)
ELISA試劑盒在國(guó)內(nèi)有許多種叫法,例如:ELISA檢測(cè)試劑盒、ELISAKit。貴州動(dòng)物科研技術(shù)服務(wù)構(gòu)建
科手術(shù)設(shè)備|細(xì)胞/組織支持系統(tǒng)|膜片鉗|輔助設(shè)備|其它常用耗材燒杯|漏斗|量筒|廣口罐|研缽和研杵|手套|移液管|移液器(Pipette)單道手動(dòng)移液器|單道電動(dòng)移液器|多道手動(dòng)移液器多道電動(dòng)移液器|正置換移液器|瓶口分液器吸頭(Tips)濾芯吸頭(滅菌)|濾芯吸頭(未滅菌)|普通吸頭(滅菌)普通吸頭(未滅菌)|多道移液器吸頭液體工作站吸頭|其它瓶(Bottle)離心瓶|稱量瓶|存儲(chǔ)瓶|比重瓶|血清瓶|滴瓶吸氣瓶|細(xì)胞培養(yǎng)瓶|培養(yǎng)基瓶|其它瓶(Flask)藍(lán)蓋瓶|燒瓶|平底燒瓶|克氏(長(zhǎng)頸)燒瓶|碘測(cè)定燒瓶|蒸餾燒瓶|容量瓶|過(guò)濾瓶|其它管(Tube&Vial)離心管|微離心管|樣品儲(chǔ)存管|凍存管|反應(yīng)管聚乙烯保存管|細(xì)胞培養(yǎng)管|自動(dòng)上樣管|其它PCR耗材PCR管|PCR條板|PCR板|實(shí)時(shí)定量PCR毛細(xì)管其它微孔板微孔板(96孔)|微孔板(384孔)|微孔板。貴州動(dòng)物科研技術(shù)服務(wù)構(gòu)建