熒光壽命成像如何理解？熒光壽命成像主要通過(guò)TCSPC技術(shù)（Time-Correlated Single Photon Counting）實(shí)現(xiàn)。系統(tǒng)采用超短脈寬激光器作為激發(fā)光源，通過(guò)光路耦合器，將激光引入顯微光路。激光通過(guò)物鏡聚焦照射樣品池，利用光子探測(cè)裝置（PMT）對(duì)熒光信號(hào)進(jìn)行探測(cè)，再用TCSPC計(jì)數(shù)器對(duì)每一個(gè)光子進(jìn)行計(jì)數(shù)，并將其放入一個(gè)對(duì)應(yīng)的時(shí)間窗口，經(jīng)過(guò)一定時(shí)間的統(tǒng)計(jì)疊加后即得到熒光壽命曲線。幾十萬(wàn)次重復(fù)以后，不同的時(shí)間通道累積下來(lái)的光子數(shù)目不同。以光子數(shù)對(duì)時(shí)間作圖可得到熒光衰減曲線。實(shí)現(xiàn)從百ps-ns-us的瞬態(tài)測(cè)試。綜上所述由于TCSPC系統(tǒng)，一個(gè)激光脈沖只采集一個(gè)光子信號(hào)，所以激光器的重復(fù)頻率決定了系統(tǒng)的數(shù)據(jù)采集速度。重頻越高，采集速度越快，數(shù)據(jù)信噪比越好。熒光壽命成像圖像中每一個(gè)像素點(diǎn)在phasor圖上都有一個(gè)對(duì)應(yīng)的點(diǎn)。福建紅外熒光壽命成像怎么樣

熒光壽命顯微成像技術(shù)具有對(duì)生物大分子結(jié)構(gòu)、動(dòng)力學(xué)信息和分子環(huán)境等進(jìn)行高分辨高精度測(cè)量的能力，因此其重要性日漸提升，被普遍地應(yīng)用于生物學(xué)研究及臨床診斷等領(lǐng)域。熒光壽命，分子包含多個(gè)能態(tài)S0、S1、S2和三重態(tài)T1，每個(gè)能態(tài)都包含多個(gè)精細(xì)的能級(jí)。正常情況下，大部分電子處在較低能態(tài)即基態(tài)S0的較低能級(jí)上，當(dāng)分子被光束照射，會(huì)吸收光子能量，電子被激發(fā)到更高的能態(tài)S1或S2上，在S2能態(tài)上的電子只能存在很短暫的時(shí)間，便會(huì)通過(guò)內(nèi)轉(zhuǎn)換過(guò)程躍遷到S1上，而S1能態(tài)上的電子亦會(huì)在極短時(shí)間內(nèi)躍遷到S1的較低能級(jí)上，而這些電子會(huì)存在一段時(shí)間后通過(guò)震蕩弛豫輻射躍遷到基態(tài)，這個(gè)過(guò)程會(huì)釋放一個(gè)光子，即熒光。深圳熒光壽命成像熒光壽命成像能夠?qū)Σ煌N類(lèi)或處于不同狀態(tài)的生物組織提供更好的對(duì)比度。

分子的熒光壽命在幾納秒至幾百納秒之間，因此，測(cè)量熒光壽命成像需要極快響應(yīng)時(shí)間的探測(cè)器。如今主要存在兩類(lèi)方案：一是時(shí)域測(cè)量，由一束窄脈沖將熒光分子激發(fā)至較高能態(tài)S1，接著測(cè)量熒光的發(fā)射幾率隨時(shí)間的變化。典型的時(shí)域測(cè)量方法有TCSPC和時(shí)間門(mén)（TG）兩種。TCSPC利用快速秒表測(cè)量激發(fā)脈沖與探測(cè)熒光之間的時(shí)間差。使用高重復(fù)脈沖激發(fā)光激發(fā)樣品，在每一個(gè)脈沖周期內(nèi)，較多激發(fā)熒光分子發(fā)出一個(gè)光子，然后記錄光子出現(xiàn)的時(shí)刻，并在該時(shí)刻記錄一個(gè)光子，再下一個(gè)脈沖周期內(nèi)也是相同的情況，經(jīng)過(guò)多次計(jì)數(shù)可以得到熒光光子隨時(shí)間的分布曲線。相似的，TG則探測(cè)不同時(shí)間窗口內(nèi)的熒光強(qiáng)度，通過(guò)曲線擬合得到熒光壽命。二是頻域測(cè)量，對(duì)連續(xù)激發(fā)光進(jìn)行振幅調(diào)制后，分子發(fā)出的熒光強(qiáng)度也會(huì)受到振幅調(diào)制，兩個(gè)調(diào)制信號(hào)之間存在與熒光壽命相關(guān)的相位差，因此可以測(cè)量該相位差計(jì)算熒光壽命。

熒光壽命顯微成像（Fluorescence lifetime imaging microscopy,FLIM）是熒光壽命測(cè)量和熒光顯微技術(shù)的結(jié)合，已普遍應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究和其他領(lǐng)域。FLIM具有高特異性、高靈敏度、可定量測(cè)量微環(huán)境變化和分子間相互作用、不受探針濃度、激發(fā)光強(qiáng)度和光漂白影響等優(yōu)點(diǎn)。在過(guò)去的十年中，光學(xué)技術(shù)硬件和軟件、材料科學(xué)和生物醫(yī)學(xué)的迅速發(fā)展，共同促進(jìn)了FLIM技術(shù)及其應(yīng)用的巨大進(jìn)步。盡管經(jīng)過(guò)幾十年的技術(shù)發(fā)展，F(xiàn)LIM技術(shù)在實(shí)際應(yīng)用中仍然面臨著一些挑戰(zhàn)，例如：FLIM的成像分辨率也會(huì)受到光衍射的限制，因此，在實(shí)際應(yīng)用中，我們經(jīng)常需要在成像速度、圖像質(zhì)量和微環(huán)境壽命精度之間進(jìn)行權(quán)衡。熒光壽命成像不需要考慮跳色的影響，從而免去了計(jì)算和去除跳色雜質(zhì)信號(hào)的麻煩。

熒光壽命成像：熒光壽命是熒光團(tuán)在發(fā)射熒光光子返回基態(tài)之前保持其激發(fā)態(tài)的平均時(shí)間長(zhǎng)度。這取決于熒光團(tuán)的分子組成和納米環(huán)境。熒光壽命成像將壽命測(cè)量與成像相結(jié)合：對(duì)每個(gè)圖像像素以測(cè)得的熒光壽命進(jìn)行顏色編碼，產(chǎn)生額外的圖像反差。因此，熒光壽命成像可以提供關(guān)于熒光分子空間分布的信息和有關(guān)其生化狀態(tài)或納米環(huán)境的信息。有很多技術(shù)可以在顯微鏡環(huán)境中檢測(cè)熒光壽命。常見(jiàn)的的是基于供體（受體光漂白，F(xiàn)RET AB）或受體（敏化發(fā)射，F(xiàn)RET SE）熒光強(qiáng)度的技術(shù)。熒光壽命成像可以直接檢測(cè)熒光和時(shí)間分辨的熒光壽命。遼寧三維熒光壽命成像哪家專(zhuān)業(yè)

熒光壽命成像可以定量的區(qū)分參與FRET和沒(méi)有參與FRET的分子數(shù)量。福建紅外熒光壽命成像怎么樣

熒光壽命成像技術(shù)用于表征DNA壓縮和基因活性。研究團(tuán)隊(duì)發(fā)展了熒光壽命成像技術(shù)（FLIM），表征DNA壓縮的動(dòng)態(tài)過(guò)程，克服了以往方法的局限性。研究團(tuán)隊(duì)提出了兩種精確測(cè)量DNA壓縮程度的FLIM分析方法。第一種方法基于加入DNA的熒光探針的熒光壽命與其局部微環(huán)境折射率之間的逆二次方關(guān)系，熒光探針的壽命隨DNA壓縮密度而變化，從而可表征DNA壓縮程度。第二種方法是將熒光標(biāo)記的核苷酸整合到DNA鏈中，通過(guò)一種叫做熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）的技術(shù)獲得其熒光壽命值的變化，從而反映出DNA的壓縮程度的動(dòng)態(tài)變化過(guò)程。細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果證明，兩種FLIM分析方法都可以成功表征DNA壓縮的動(dòng)態(tài)過(guò)程。福建紅外熒光壽命成像怎么樣

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