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熒光壽命顯微成像(Fluorescence lifetime imaging microscopy,FLIM)是熒光壽命測(cè)量和熒光顯微技術(shù)的結(jié)合,已普遍應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究和其他領(lǐng)域。FLIM具有高特異性、高靈敏度、可定量測(cè)量微環(huán)境變化和分子間相互作用、不受探針濃度、激發(fā)光強(qiáng)度和光漂白影響等優(yōu)點(diǎn)。在過(guò)去的十年中,光學(xué)技術(shù)硬件和軟件、材料科學(xué)和生物醫(yī)學(xué)的迅速發(fā)展,共同促進(jìn)了FLIM技術(shù)及其應(yīng)用的巨大進(jìn)步。盡管經(jīng)過(guò)幾十年的技術(shù)發(fā)展,F(xiàn)LIM技術(shù)在實(shí)際應(yīng)用中仍然面臨著一些挑戰(zhàn),例如:FLIM的成像分辨率也會(huì)受到光衍射的限制,因此,在實(shí)際應(yīng)用中,我們經(jīng)常需要在成像速度、圖像質(zhì)量和微環(huán)境壽命精度之間進(jìn)行權(quán)衡。熒光壽命成像的優(yōu)勢(shì)是什么?湖北開放式熒光壽命成像哪家靠譜
熒光壽命通常來(lái)講是一定的,不受激發(fā)光強(qiáng)度、熒光團(tuán)濃度等因素的影響,只與熒光團(tuán)所處的微環(huán)境有關(guān),因此,利用熒光壽命顯微鏡(Fluorescence lifetime imaging microscopy, FLIM)對(duì)樣品進(jìn)行熒光壽命成像,可以對(duì)樣品所在的微環(huán)境中的許多物理參數(shù)如氧壓、溶液疏水性等及生物化學(xué)參數(shù)如pH值、離子濃度等進(jìn)行定量測(cè)量。此外,熒光壽命成像技術(shù)還可以同時(shí)獲得分子狀態(tài)和空間分布的信息。因此,熒光壽命成像在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域有廣闊的應(yīng)用前景。杭州顯微熒光壽命成像大概多少錢熒光壽命成像可用于對(duì)皮膚病的診斷,對(duì)腔體病癥早期的臨床診斷。
熒光壽命成像的優(yōu)勢(shì)是什么?熒光壽命成像具有不同于熒光強(qiáng)度成像的眾多優(yōu)點(diǎn);不需要考慮跳色的影響,從而免去了計(jì)算和去除跳色雜質(zhì)信號(hào)的麻煩;去除跳色雜質(zhì)的準(zhǔn)確性很大程度上依賴于信噪比、成像流程的設(shè)計(jì)和控制、以及跳色信號(hào)估算的算法,這些因素使得通過(guò)穩(wěn)態(tài)光強(qiáng)度測(cè)量熒光壽命成像的精確度在很多時(shí)候受到質(zhì)疑。穩(wěn)態(tài)光強(qiáng)度的熒光壽命成像測(cè)量很容易受熒光標(biāo)記光漂白或是激發(fā)光散射背景的影響,而這些因素對(duì)FLIM-FRET的測(cè)量影響相對(duì)較低。熒光壽命成像可以定量的區(qū)分參與FRET和沒有參與FRET的分子數(shù)量,這樣深入的定量分析是穩(wěn)態(tài)光強(qiáng)度方法做不到的。
熒光壽命檢測(cè)經(jīng)典方法為點(diǎn)對(duì)點(diǎn)的時(shí)間相關(guān)單光子計(jì)數(shù)(TCSPC),但由于過(guò)去檢測(cè)硬件的局限和復(fù)雜的使用而沒有被普遍地應(yīng)用于科學(xué)研究。隨著技術(shù)的發(fā)展,在顯微鏡視野內(nèi)進(jìn)行超快速全像素?zé)晒鈮勖盘?hào)采集的熒光壽命成像成為可能。熒光壽命成像提供了壽命分布的二維圖形視圖。該圖形視圖使任何觀察者都能快速區(qū)分和分離FLIM圖像中的不同壽命種群。相量FLIM分布的解釋很簡(jiǎn)單。因?yàn)槊總€(gè)物種都有特定的相量,所以可以在單個(gè)像素內(nèi)解析多個(gè)分子物種。熒光壽命成像技術(shù)可顯示單指數(shù)或多指數(shù)熒光衰減。
熒光壽命成像中的熒光壽命是什么意思?有什么用?假定兩種衰減躍遷速率分別為Γ和knr,則激發(fā)態(tài)衰減速率可表示為:其中n(t)表示時(shí)間t時(shí)激發(fā)態(tài)分子的數(shù)目,由此可得到激發(fā)態(tài)物種的單指數(shù)衰減方程。熒光壽命定義為衰減總速率的倒數(shù):熒光強(qiáng)度正比于衰減的激發(fā)態(tài)分子數(shù),因此可將上式改寫為:其中I0是時(shí)間為零時(shí)的熒光強(qiáng)度,τ為熒光壽命。也就是說(shuō)熒光強(qiáng)度衰減到初始強(qiáng)度的1/e時(shí)所需要的時(shí)間就是該熒光物種在測(cè)定條件下的熒光壽命。事實(shí)上當(dāng)熒光物質(zhì)被激發(fā)后有些激發(fā)態(tài)分子立即返回基態(tài),有的甚至可以延遲到5倍于熒光壽命時(shí)才返回基態(tài),這樣就形成了實(shí)驗(yàn)測(cè)定的熒光強(qiáng)度衰減曲線。由于熒光壽命成像不受樣品濃度影響具有其他熒光成像技術(shù)無(wú)法代替的優(yōu)異性能。熒光壽命成像是什么樣的技術(shù)?湖北開放式熒光壽命成像哪家靠譜
熒光壽命成像和生物發(fā)光的不同之處:生物發(fā)光與熒光壽命成像產(chǎn)生光子的過(guò)程和機(jī)制是完全不同的。湖北開放式熒光壽命成像哪家靠譜
熒光壽命成像技術(shù)是怎么運(yùn)作的?通過(guò)建立檢測(cè)到的熒光事件的直方圖來(lái)確定壽命??娠@示單指數(shù)或多指數(shù)熒光衰減。數(shù)值曲線擬合表示熒光壽命和振幅(即檢測(cè)到的光子數(shù))。由于FRET減少了供體壽命,因此如果無(wú)FRET的供體壽命已知,就可以量化FRET發(fā)生的程度。該供體壽命τ作為分析FRET樣品的一定參考。因此,F(xiàn)LIM-FRET為內(nèi)部參照—這一特點(diǎn)減少了基于強(qiáng)度測(cè)量FRET時(shí)的很多缺點(diǎn)。由于其熒光壽命是染料的固有特性,因此對(duì)其他不利影響(如光漂白、圖像明暗處理、不同濃度或表達(dá)水平)具有普遍的不變性。使用基于強(qiáng)度的FRET測(cè)量的主要限制是所有可觀察的供體分子都經(jīng)歷FRET的基本假設(shè)。通常情況并非如此。湖北開放式熒光壽命成像哪家靠譜
波銘科儀,2013-06-03正式啟動(dòng),成立了拉曼光譜儀,電動(dòng)位移臺(tái),激光器,光電探測(cè)器等幾大市場(chǎng)布局,應(yīng)對(duì)行業(yè)變化,順應(yīng)市場(chǎng)趨勢(shì)發(fā)展,在創(chuàng)新中尋求突破,進(jìn)而提升愛特蒙特的市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力,把握市場(chǎng)機(jī)遇,推動(dòng)儀器儀表產(chǎn)業(yè)的進(jìn)步。波銘科儀經(jīng)營(yíng)業(yè)績(jī)遍布國(guó)內(nèi)諸多地區(qū)地區(qū),業(yè)務(wù)布局涵蓋拉曼光譜儀,電動(dòng)位移臺(tái),激光器,光電探測(cè)器等板塊。同時(shí),企業(yè)針對(duì)用戶,在拉曼光譜儀,電動(dòng)位移臺(tái),激光器,光電探測(cè)器等幾大領(lǐng)域,提供更多、更豐富的儀器儀表產(chǎn)品,進(jìn)一步為全國(guó)更多單位和企業(yè)提供更具針對(duì)性的儀器儀表服務(wù)。波銘科儀始終保持在儀器儀表領(lǐng)域優(yōu)先的前提下,不斷優(yōu)化業(yè)務(wù)結(jié)構(gòu)。在拉曼光譜儀,電動(dòng)位移臺(tái),激光器,光電探測(cè)器等領(lǐng)域承攬了一大批高精尖項(xiàng)目,積極為更多儀器儀表企業(yè)提供服務(wù)。