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紅外熒光壽命成像技術(shù)在生物多重檢測(cè)中的應(yīng)用。相比于熒光強(qiáng)度,熒光壽命的數(shù)值具有很好的穩(wěn)定性,不依賴于生物組織穿透深度。因此可以實(shí)現(xiàn)生物多重成像和量化診斷。該團(tuán)隊(duì)利用能量延遲方法并結(jié)合對(duì)發(fā)光離子濃度的調(diào)控,實(shí)現(xiàn)NIR-II區(qū)單一波長(zhǎng)下熒光壽命三個(gè)量級(jí)以上的精確調(diào)節(jié)。將這種成像方法應(yīng)用于乳腺的精確診斷,其對(duì)標(biāo)志物的定量檢測(cè)結(jié)果與傳統(tǒng)的免疫印跡法和免疫組織化學(xué)法相比有很好的一致性。而相比于后兩者一次只能對(duì)一種標(biāo)志物進(jìn)行檢測(cè),這種新的時(shí)間維度成像方法可以原位實(shí)現(xiàn)同時(shí)定量多個(gè)標(biāo)記物,并且減少了傳統(tǒng)檢測(cè)方法在組織切片的制作、處理以及評(píng)分過(guò)程中所導(dǎo)致結(jié)果的差異性。熒光壽命成像可以定量的區(qū)分參與FRET和沒(méi)有參與FRET的分子數(shù)量。珠海單分子熒光壽命成像哪個(gè)牌子好
熒光壽命成像技術(shù)用于表征DNA壓縮和基因活性。研究團(tuán)隊(duì)發(fā)展了熒光壽命成像技術(shù)(FLIM),表征DNA壓縮的動(dòng)態(tài)過(guò)程,克服了以往方法的局限性。研究團(tuán)隊(duì)提出了兩種精確測(cè)量DNA壓縮程度的FLIM分析方法。第一種方法基于加入DNA的熒光探針的熒光壽命與其局部微環(huán)境折射率之間的逆二次方關(guān)系,熒光探針的壽命隨DNA壓縮密度而變化,從而可表征DNA壓縮程度。第二種方法是將熒光標(biāo)記的核苷酸整合到DNA鏈中,通過(guò)一種叫做熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)的技術(shù)獲得其熒光壽命值的變化,從而反映出DNA的壓縮程度的動(dòng)態(tài)變化過(guò)程。細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果證明,兩種FLIM分析方法都可以成功表征DNA壓縮的動(dòng)態(tài)過(guò)程。珠海單分子熒光壽命成像哪個(gè)牌子好熒光壽命成像圖像中每一個(gè)像素點(diǎn)在phasor圖上都有一個(gè)對(duì)應(yīng)的點(diǎn)。
熒光壽命成像主要應(yīng)用領(lǐng)域包括:用于樣品分離,如利用不同染料熒光壽命的差異將不同組織、正常與病變細(xì)胞等有效分離。熒光團(tuán)在光譜上非常相似(max 580 vs 573)無(wú)法分離,但它們?cè)跓晒鈮勖喜町惷黠@。作為生物傳感器,如評(píng)價(jià)藥物/理化條件對(duì)細(xì)胞的影響、Ca+震蕩等。充分拓展了壽光命成像的使用范圍,實(shí)現(xiàn)可相互驗(yàn)證的多維度樣品成像。實(shí)現(xiàn)真正的生物動(dòng)力學(xué)分析和功能成像。熒光壽命成像的發(fā)展很好地彌補(bǔ)了基于強(qiáng)度成像的問(wèn)題,對(duì)生物醫(yī)學(xué)檢測(cè)有著重要的意義。
熒光壽命成像FLIM所面臨的挑戰(zhàn):在數(shù)據(jù)處理上,由于曲線擬合迭代過(guò)程的需求,計(jì)算成本較其他成像方案更高。在成像原理上,熒光壽命受多種外界因素影響,這些因素包括分子相互作用、pH值、溫度和粘滯阻力等,很難對(duì)這些參數(shù)控制變量,使得測(cè)量熒光壽命存在交叉干擾問(wèn)題。此外,與普通光學(xué)顯微技術(shù)類似,介質(zhì)光散射影響成像信噪比及空間分辨率,成像深度受到限制。FLIM已經(jīng)在系統(tǒng)裝置、熒光探針和數(shù)據(jù)處理算法等方面得到了較快的發(fā)展,這也使得熒光壽命成像FLIM在對(duì)細(xì)胞微環(huán)境成像和生物代謝監(jiān)測(cè)發(fā)揮出不可替代的作用。熒光壽命成像中的熒光壽命是什么意思?
熒光壽命成像分析是什么?熒光壽命是用于幾種生物測(cè)定的穩(wěn)健參數(shù)。它有可能替代傳統(tǒng)的測(cè)量技術(shù),如吸收法、冷光法或熒光強(qiáng)度法。熒光團(tuán)物理化學(xué)環(huán)境的任何變化都會(huì)導(dǎo)致熒光壽命的改變??赏ㄟ^(guò)各種機(jī)制來(lái)研發(fā)基于壽命的分析,例如簡(jiǎn)單的結(jié)合測(cè)定,涉及到兩個(gè)組分的結(jié)合(一個(gè)被熒光標(biāo)記)而引起FLT的變化。另一種機(jī)制是猝滅釋放型測(cè)定,涉及大量過(guò)量存在的猝滅物質(zhì),其具有低而有限的熒光。一旦熒光化合物被釋放(通過(guò)酶促反應(yīng)或與互補(bǔ)DNA結(jié)合),系統(tǒng)的壽命就會(huì)改變。FLT可與FRET(熒光共振能量轉(zhuǎn)移)分析結(jié)合用于能量轉(zhuǎn)移效率測(cè)量。影響熒光壽命成像測(cè)量的因素:高濃度樣品,高濃度的分子之間相互作用而發(fā)生活性阻礙現(xiàn)象。上海動(dòng)物熒光壽命成像使用方法
熒光壽命成像技術(shù)是怎么運(yùn)作的?珠海單分子熒光壽命成像哪個(gè)牌子好
熒光壽命成像有什么作用?熒光壽命可以在頻域或者時(shí)間域測(cè)量。時(shí)間域測(cè)量方法涉及用短光脈沖照射樣品(比色皿、細(xì)胞或組織),然后隨時(shí)間測(cè)量發(fā)射強(qiáng)度。FLT由衰減曲線的斜率確定。有幾種熒光檢測(cè)方法可用于壽命測(cè)量,其中時(shí)間相關(guān)單光子計(jì)數(shù)(TCSPC)可實(shí)現(xiàn)簡(jiǎn)單的數(shù)據(jù)收集和增強(qiáng)的定量光子計(jì)數(shù)。頻域方法涉及高頻率入射光的正弦調(diào)制。在該方法中,發(fā)射發(fā)生在與入射光相同的頻率處,并且隨著激發(fā)光兼有相位延遲和振幅的變化(解調(diào))。壽命測(cè)量不需要波長(zhǎng)比率探針來(lái)提供眾多分析物的定量測(cè)定。壽命法通過(guò)使用光譜位移探針擴(kuò)展了分析物濃度范圍的靈敏度。珠海單分子熒光壽命成像哪個(gè)牌子好
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