熒光壽命成像是熒光基團(tuán)在通過發(fā)射熒光光子返回基態(tài)之前在其激發(fā)態(tài)下保持平均多長時(shí)間的量度。不同熒光基團(tuán)激發(fā)態(tài)停時(shí)間不同，大多數(shù)生物熒光素的熒光壽命時(shí)間在 0.2 - 20 ns。熒光壽命檢測經(jīng)典方法為點(diǎn)對(duì)點(diǎn)的時(shí)間相關(guān)單光子計(jì)數(shù)（TCSPC），但由于過去檢測硬件的局限和復(fù)雜的使用而沒有被普遍地應(yīng)用于科學(xué)研究。隨著技術(shù)的發(fā)展，在顯微鏡視野內(nèi)進(jìn)行超快速全像素?zé)晒鈮勖盘?hào)采集的熒光壽命成像成為可能。熒光壽命成像具有不同于熒光強(qiáng)度成像的眾多優(yōu)點(diǎn)：不受染料濃度的影響，無論染色或免疫熒光的效率高或低，熒光壽命都能呈現(xiàn)一致的數(shù)據(jù)，這意味著更少的實(shí)驗(yàn)數(shù)量和重復(fù)性更好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。不受光漂白的影響，熒光發(fā)射時(shí)間不受激發(fā)光強(qiáng)度的影響，因此不存在光漂白問題。不受樣本厚度和光源噪聲的影響。熒光壽命可以在頻域或者時(shí)間域測量。重慶紅外熒光壽命成像好不好

熒光壽命成像技術(shù)是如何應(yīng)用在生物醫(yī)學(xué)中的？隨著近年來對(duì)蛋白及分子功能研究的不斷深入，科研工作者除對(duì)多色成像、鈣成像等功能成像的需求日漸增多之外，對(duì)熒光壽命成像的需求也逐漸增加，而熒光壽命成像能提供除熒光強(qiáng)度、熒光光譜信息之外的熒光分子的壽命信息，可用于分子間相互作用（FRET）、分子所處微環(huán)境的離子濃度（如Ca2+、pH）及細(xì)胞代謝水平的改變等測量，并可拆分光譜重疊的熒光染料及染料和自發(fā)熒光，還可以結(jié)合熒光相關(guān)光譜對(duì)單分子實(shí)現(xiàn)熒光壽命相關(guān)光譜FLCS的測量。熒光壽命成像擴(kuò)展了傳統(tǒng)熒光成像的維度，是功能成像的理想工具，在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域有廣闊的應(yīng)用前景。深圳生物熒光壽命成像供應(yīng)熒光壽命成像不受光漂白的影響。

熒光壽命成像FLIM所面臨的挑戰(zhàn)：在數(shù)據(jù)處理上，由于曲線擬合迭代過程的需求，計(jì)算成本較其他成像方案更高。在成像原理上，熒光壽命受多種外界因素影響，這些因素包括分子相互作用、pH值、溫度和粘滯阻力等，很難對(duì)這些參數(shù)控制變量，使得測量熒光壽命存在交叉干擾問題。此外，與普通光學(xué)顯微技術(shù)類似，介質(zhì)光散射影響成像信噪比及空間分辨率，成像深度受到限制。FLIM已經(jīng)在系統(tǒng)裝置、熒光探針和數(shù)據(jù)處理算法等方面得到了較快的發(fā)展，這也使得熒光壽命成像FLIM在對(duì)細(xì)胞微環(huán)境成像和生物代謝監(jiān)測發(fā)揮出不可替代的作用。

熒光壽命成像具有什么優(yōu)勢(shì)？熒光壽命成像的優(yōu)勢(shì)：通過熒光強(qiáng)度成像可以獲得熒光分子的空間分布，較為直接和簡便，但是當(dāng)熒光分子具有相似的頻譜特性，或是同樣的熒光分子在不同環(huán)境下時(shí)，依賴強(qiáng)度進(jìn)行成像的方案便無法準(zhǔn)確反映信息。與基于光強(qiáng)的成像方式不同，F(xiàn)LIM成像適用于測量熒光分子環(huán)境的變化，或是測量分子的運(yùn)動(dòng)情況。其結(jié)果與熒光分子濃度無關(guān)，且不受影響光強(qiáng)的光散射或是光吸收影響，可以精確測量熒光淬滅過程，對(duì)生物分子微環(huán)境進(jìn)行定量測量。熒光壽命是用于幾種生物測定的穩(wěn)健參數(shù)。

熒光壽命是指分子受到光脈沖激發(fā)后返回基態(tài)之前在激發(fā)平均停留的時(shí)間，處于激發(fā)態(tài)的熒光分子在從激發(fā)到基態(tài)的過程中發(fā)射熒光釋放能量。熒光壽命取決于熒光分子所處的微環(huán)境，通過對(duì)樣品熒光壽命的測量和成像可以定量獲取樣品的功能信息。熒光壽命成像技術(shù)有兩種：時(shí)間域和頻率域。（1）時(shí)域FLIM：需要脈沖光源，所以一般在雙光子的系統(tǒng)上比較常見FLIM（熒光壽命成像Fluorescence Life-time imaging Microcopy簡稱FLIM）。（2）頻域FLIM：需要一個(gè)相位調(diào)制的光源，有用LED調(diào)制的， FLIM對(duì)很多研究都有幫助，以下為熒光壽命成像FLIM的應(yīng)用：1）細(xì)胞體自身熒光壽命分析；2）自身熒光相對(duì)熒光標(biāo)記的有效區(qū)分；3）具有相同頻譜性質(zhì)的不同熒光標(biāo)記的區(qū)分；4）活細(xì)胞內(nèi)水介質(zhì)的PH值測量；5）局部氧氣濃度測量；6）活細(xì)胞內(nèi)鈣濃度測量；7）時(shí)間分辨Forster共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）：納米級(jí)尺度上的遠(yuǎn)程測量，環(huán)境敏感的FRET探針定量測量。熒光壽命(FLT)是熒光團(tuán)在發(fā)射光子并返回基態(tài)之前花費(fèi)在激發(fā)態(tài)的時(shí)間。重慶多色熒光壽命成像怎么用

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熒光壽命顯微成像技術(shù)（FLIM）具有對(duì)生物大分子結(jié)構(gòu)、動(dòng)力學(xué)信息和分子環(huán)境等進(jìn)行高分辨高精度測量的能力，因此其重要性日漸提升，被普遍地應(yīng)用于生物學(xué)研究及臨床診斷等領(lǐng)域。熒光壽命成像的發(fā)展很好地彌補(bǔ)了基于強(qiáng)度成像的問題，對(duì)生物醫(yī)學(xué)檢測有著重要的意義。熒光的特性包含有：熒光激發(fā)和發(fā)射光譜、熒光強(qiáng)度、量子效率、熒光壽命等,其中，熒光壽命是指熒光分子在激發(fā)態(tài)上存在的平均時(shí)間（納秒量級(jí)）。分子的熒光壽命在幾納秒至幾百納秒之間，因此，測量熒光壽命需要極快響應(yīng)時(shí)間的探測器。重慶紅外熒光壽命成像好不好

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