熒光壽命通常來(lái)講是一定的,不受激發(fā)光強(qiáng)度、熒光團(tuán)濃度等因素的影響,只與熒光團(tuán)所處的微環(huán)境有關(guān),因此,利用熒光壽命顯微鏡(Fluorescence lifetime imaging microscopy, FLIM)對(duì)樣品進(jìn)行熒光壽命成像,可以對(duì)樣品所在的微環(huán)境中的許多物理參數(shù)如氧壓、溶液疏水性等及生物化學(xué)參數(shù)如pH值、離子濃度等進(jìn)行定量測(cè)量。此外,熒光壽命成像技術(shù)還可以同時(shí)獲得分子狀態(tài)和空間分布的信息。因此,熒光壽命成像在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域有廣闊的應(yīng)用前景。光壽命成像顯微技術(shù)已在生命科學(xué)領(lǐng)域中得到了普遍的應(yīng)用。北京植物熒光壽命成像哪里有賣(mài)
熒光壽命是熒光團(tuán)在發(fā)射熒光光子返回基態(tài)之前保持其激發(fā)態(tài)的平均時(shí)間長(zhǎng)度。這取決于熒光團(tuán)的分子組成和納米環(huán)境。熒光壽命成像將壽命測(cè)量與成像相結(jié)合:對(duì)每個(gè)圖像像素以測(cè)得的熒光壽命進(jìn)行顏色編碼,產(chǎn)生額外的圖像反差。因此,熒光壽命成像可以提供關(guān)于熒光分子空間分布的信息和有關(guān)其生化狀態(tài)或納米環(huán)境的信息。有很多技術(shù)可以在顯微鏡環(huán)境中檢測(cè)熒光壽命。常見(jiàn)的的是基于供體(受體光漂白,F(xiàn)RET AB)或受體(敏化發(fā)射,F(xiàn)RET SE)熒光強(qiáng)度的技術(shù)。重慶顯微熒光壽命成像有哪些熒光壽命成像的優(yōu)勢(shì)是什么?
熒光壽命成像(FLI):這種技術(shù)相對(duì)較新,涉及到同時(shí)在圖像的每個(gè)像素處確定熒光衰減時(shí)間的空間分布。它基于熒光團(tuán)的熒光壽命取決于其分子環(huán)境而并非濃度的事實(shí)。它可以用于無(wú)法控制局部探針濃度的熒光顯微鏡中。熒光壽命成像(FLIM)可用于測(cè)量分子環(huán)境參數(shù),通過(guò)熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)進(jìn)行的蛋白質(zhì)相互作用,并可以通過(guò)細(xì)胞和組織的自發(fā)熒光來(lái)測(cè)量其代謝狀態(tài)。分子環(huán)境參數(shù)可以通過(guò)因熒光淬滅或熒光團(tuán)的構(gòu)象變化而引起的壽命變化來(lái)測(cè)量。FLIM可用于多種生物應(yīng)用,包括組織表面掃描、組織類(lèi)型繪圖、光動(dòng)力治理、DNA芯片分析、皮膚成像等。
熒光壽命顯微成像(Fluorescence lifetime imaging microscopy,FLIM)是熒光壽命測(cè)量和熒光顯微技術(shù)的結(jié)合,熒光壽命顯微成像具有高特異性、高靈敏度、可定量測(cè)量微環(huán)境變化和分子間相互作用、不受探針濃度、激發(fā)光強(qiáng)度和光漂白影響等優(yōu)點(diǎn)。在過(guò)去的十年中,光學(xué)技術(shù)硬件和軟件、材料科學(xué)和生物醫(yī)學(xué)的迅速發(fā)展,共同促進(jìn)了FLIM技術(shù)及其應(yīng)用的巨大進(jìn)步。熒光壽命成像(FLIM)對(duì)細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)及調(diào)控,蛋白間的相互作用等生物研究發(fā)揮著很大作用。熒光壽命成像圖像中每一個(gè)像素點(diǎn)在phasor圖上都有一個(gè)對(duì)應(yīng)的點(diǎn)。
影響熒光壽命成像測(cè)量的因素:高濃度樣品的影響:1)當(dāng)激發(fā)光照射高濃度樣品時(shí),在激發(fā)光入口附近產(chǎn)生熒光,但這些熒光并不能進(jìn)入熒光檢測(cè)器。2)高濃度的分子之間相互作用而發(fā)生活性阻礙現(xiàn)象。3)熒光的再吸收:即熒光光譜的短波長(zhǎng)端和激發(fā)光譜的長(zhǎng)波長(zhǎng)端如果相互重疊,則發(fā)生熒光再吸收。熒光壽命成像具有200 nm的空間分辨率和皮秒量級(jí)的時(shí)間分辨率。散射光的影響: 主要是瑞利散射光和拉曼散射光的影響較大。校正辦法:先用短的激發(fā)光激發(fā),檢出溶液的拉曼峰,然后進(jìn)行熒光光譜校正。因?yàn)闊晒夤庾V不隨激發(fā)光波長(zhǎng)的改變而改變,而拉曼光卻隨之改變。生物發(fā)光與熒光壽命成像不同點(diǎn):產(chǎn)生光子的原理不同。北京植物熒光壽命成像哪里有賣(mài)
熒光壽命成像是一種什么樣的技術(shù)?北京植物熒光壽命成像哪里有賣(mài)
熒光壽命成像是什么?如果分子環(huán)境刺激激發(fā)態(tài)衰變而不發(fā)射光子,則熒光強(qiáng)度會(huì)降低(淬滅)。熒光淬滅是一條單獨(dú)的發(fā)射路徑,因此在動(dòng)力學(xué)上與熒光過(guò)程形成競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系。激發(fā)態(tài)存儲(chǔ)現(xiàn)在可以通過(guò)一個(gè)以上的過(guò)程衰變,從而縮短熒光壽命。這種壽命的改變可用于收集分子環(huán)境的信息。一種特殊類(lèi)型的淬滅是將激發(fā)能量以非輻射的方式傳遞到相鄰的不同熒光染料中:“熒光共振能量轉(zhuǎn)移”,F(xiàn)RET。此時(shí),不只第1個(gè)熒光染料(供體)變暗,壽命變短,而且第二個(gè)熒光染料(受體)在“錯(cuò)誤的”激發(fā)顏色下開(kāi)始發(fā)光。由于這種效果的產(chǎn)生需要兩種熒光染料(小于10 nm)的密切接觸,因此將其用作研究分子相互作用的“分子標(biāo)尺”。它也是許多現(xiàn)代FRET生物傳感器的基礎(chǔ)。北京植物熒光壽命成像哪里有賣(mài)
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