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遼寧開放式熒光壽命成像哪里有

來源: 發(fā)布時間:2022-08-24

受光學(xué)衍射極限的限制,熒光顯微技術(shù)的空間分辨率只能達(dá)到200納米左右,難以滿足生命科學(xué)研究的需要。而對于熒光壽命成像來說,其空間分辨率受衍射極限的影響尤為嚴(yán)重。熒光壽命成像是一個新興的研究領(lǐng)域,尋求具有高度原創(chuàng)性的技術(shù)原理與方案,并率先解決熒光壽命成像在生命科學(xué)應(yīng)用中存在的難題,具有重大的科學(xué)意義與應(yīng)用價值。一種熒光壽命成像方法,所述方法包括下述步驟:對標(biāo)記于樣品中的光開關(guān)染料分子進(jìn)行稀疏激勵;激發(fā)樣品中被激勵的光開關(guān)染料分子,收集被激發(fā)的光開關(guān)染料分子所發(fā)射的光子并記錄光開關(guān)染料分子的熒光圖像,對熒光圖像中的光開關(guān)染料分子進(jìn)行質(zhì)心定位;對在質(zhì)心定位處接收到的光子進(jìn)行計數(shù),確定被激發(fā)的光開關(guān)染料分子的熒光壽命;結(jié)合得到的光開關(guān)染料分子的質(zhì)心定位結(jié)果和熒光壽命,構(gòu)建熒光壽命圖像。熒光壽命成像技術(shù)是一種在顯微尺度下展現(xiàn)熒光壽命空間分布的技術(shù)。遼寧開放式熒光壽命成像哪里有

熒光壽命成像和生物發(fā)光的異同點(diǎn)是什么?生物發(fā)光與熒光壽命成像不同點(diǎn):產(chǎn)生光子的原理不同,類似于我們都是通過肉眼去觀察螢火蟲和發(fā)光水母一樣,生物發(fā)光與熒光成像在本質(zhì)上,都是機(jī)體中特定的細(xì)胞或材料發(fā)出光子,被高靈敏度的CCD檢測到形成圖像,但是生物發(fā)光與熒光壽命成像產(chǎn)生光子的過程和機(jī)制是完全不同的。生物發(fā)光與熒光成像相同點(diǎn):都需要對細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記。生物發(fā)光產(chǎn)生的光子和熒光壽命成像產(chǎn)生的光子都可以被高靈敏的CCD檢測并形成圖像,就像一個人的眼睛就可以既看到螢火蟲又可以看到發(fā)光水母一樣。除此之外,生物發(fā)光和熒光壽命成像都需要對目標(biāo)細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記,讓細(xì)胞產(chǎn)生熒光素酶或者熒光蛋白。遼寧開放式熒光壽命成像哪里有熒光壽命成像有潛力應(yīng)用于瘤識別,病變診斷等領(lǐng)域。

熒光壽命成像技術(shù)有兩種:時間域和頻率域。(1)時域FLIM:需要脈沖光源,所以一般在雙光子的系統(tǒng)上比較常見FLIM(熒光壽命成像Fluorescence Life-time imaging Microcopy簡稱FLIM),理由一是激光是脈沖的,二是買雙光子的老師一般也搭配一個FLIM。(2)頻域FLIM:需要一個相位調(diào)制的光源,有用LED調(diào)制的。熒光壽命成像FLIM的應(yīng)用:1)細(xì)胞體自身熒光壽命分析;2)自身熒光相對熒光標(biāo)記的有效區(qū)分;3)具有相同頻譜性質(zhì)的不同熒光標(biāo)記的區(qū)分;4)活細(xì)胞內(nèi)水介質(zhì)的PH值測量;5)局部氧氣濃度測量;6)活細(xì)胞內(nèi)鈣濃度測量;7)時間分辨Forster共振能量轉(zhuǎn)移(FRET):納米級尺度上的遠(yuǎn)程測量,環(huán)境敏感的FRET探針定量測量。

在基于時間相關(guān)單光子計數(shù)的熒光壽命成像實(shí)驗(yàn)中,通過選用超快激光器可以優(yōu)化脈沖持續(xù)時間,單光子探測器和時間數(shù)字轉(zhuǎn)換器的時間抖動則成為制約時間分辨率的關(guān)鍵參數(shù)。熒光壽命成像可進(jìn)行高質(zhì)量的多色成像實(shí)驗(yàn)或?qū)崿F(xiàn)STED、PALM/STORM等超分辨率熒光顯微成像。目前TCSPC是主要應(yīng)用的熒光壽命測定技術(shù)。熒光壽命通常在ps~us量級,在如此短的時間量級上進(jìn)行測量,它是較為成熟準(zhǔn)確的測試手段。TCSPC的工作原理是使用一個同步信號源驅(qū)動激光器,出射光脈沖照射樣品池,在利用光子探測裝置(多為PMT)對熒光信號進(jìn)行探測,每一個光子計數(shù)信號在FT1010中都會落入一個對應(yīng)的時間窗口,經(jīng)過一定時間的統(tǒng)計疊加后即得到熒光壽命曲線。幾十萬次重復(fù)以后,不同的時間通道累積下來的光子數(shù)目不同。熒光壽命可以在頻域或者時間域測量。

熒光壽命成像顯微術(shù)(FLIM)是一種利用熒光染料固有特性的成像技術(shù)。除了具有特有的發(fā)射光譜外,每個熒光分子還有特有的壽命,它反映了熒光基團(tuán)在發(fā)射光子之前處于激發(fā)態(tài)的時間。除了標(biāo)準(zhǔn)的熒光強(qiáng)度測量外,壽命分析還可以提供其他信息。過去,壽命成像一直是一種緩慢、復(fù)雜的專業(yè)化技術(shù)。只有經(jīng)驗(yàn)豐富的顯微鏡**或物理學(xué)家才會使用這種技術(shù)。熒光壽命成像提供了額外的信息,有助提高共聚焦成像的質(zhì)量。它非常適合用于區(qū)分熒光發(fā)射光譜重疊的熒光探針,或消除不需要的背景熒光信號。熒光壽命是微環(huán)境的相對參數(shù),不受環(huán)境吸收、樣本濃度等因素影響。三維熒光壽命成像價格表

熒光壽命取決于熒光分子所處的微環(huán)境,通過對樣品熒光壽命的測量和成像可以定量獲取樣品的功能信息。遼寧開放式熒光壽命成像哪里有

熒光壽命成像(Fluorescence Lifetime Imaging ,F(xiàn)LIM))是一種重要的熒光顯微鏡技術(shù),通常用于研究生物分子間相互作用、細(xì)胞中的信號事件或區(qū)分光譜重疊的熒光團(tuán)。此外,F(xiàn)LIM 可以提供有關(guān)電信號變化、離子和氧含量、溫度、細(xì)胞或其環(huán)境中的 pH 值的定量信息。熒光壽命成像具有不同于熒光強(qiáng)度成像的眾多優(yōu)點(diǎn):不受染料濃度的影響,無論染色或免疫熒光的效率高或低,熒光壽命都能呈現(xiàn)一致的數(shù)據(jù),這意味著更少的實(shí)驗(yàn)數(shù)量和重復(fù)性更好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。不受光漂白的影響,熒光發(fā)射時間不受激發(fā)光強(qiáng)度的影響,因此不存在光漂白問題。不受樣本厚度和光源噪聲的影響。遼寧開放式熒光壽命成像哪里有

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