熒光壽命成像（Fluorescence Lifetime Imaging ，F(xiàn)LIM)）是一種重要的熒光顯微鏡技術(shù)，通常用于研究生物分子間相互作用、細(xì)胞中的信號(hào)事件或區(qū)分光譜重疊的熒光團(tuán)。此外，F(xiàn)LIM 可以提供有關(guān)電信號(hào)變化、離子和氧含量、溫度、細(xì)胞或其環(huán)境中的 pH 值的定量信息。熒光壽命成像具有不同于熒光強(qiáng)度成像的眾多優(yōu)點(diǎn)：不受染料濃度的影響，無論染色或免疫熒光的效率高或低，熒光壽命都能呈現(xiàn)一致的數(shù)據(jù)，這意味著更少的實(shí)驗(yàn)數(shù)量和重復(fù)性更好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。不受光漂白的影響，熒光發(fā)射時(shí)間不受激發(fā)光強(qiáng)度的影響，因此不存在光漂白問題。不受樣本厚度和光源噪聲的影響。熒光壽命成像系統(tǒng)是一種用于化學(xué)領(lǐng)域的分析儀器。珠海單分子熒光壽命成像哪里買

熒光壽命成像在生物醫(yī)學(xué)研究和臨床診斷應(yīng)用中的許多場(chǎng)合都對(duì)多光譜分辨提出特殊要求，如在FRET測(cè)量中，要求能同時(shí)測(cè)量供體和受體的熒光強(qiáng)度隨時(shí)間的衰減，多光譜分辨的熒光壽命成像提供了一種新的定量研究手段．目前，基于門控像增強(qiáng)器的多光譜寬場(chǎng)FLIM 技術(shù)一次只能獲得至多兩個(gè)譜段的熒光壽命圖像，而基于TCSPC的多光譜分辨FLIM的成像速度又很低，這些都限制了其應(yīng)用范圍．目前的一個(gè)研究方向是，發(fā)展光譜分辨率高、成像速度快、價(jià)格低廉的多光譜分辨熒光壽命成像顯微技術(shù)。深圳單分子熒光壽命成像哪家好不同熒光基團(tuán)激發(fā)態(tài)停時(shí)間不同，大多數(shù)生物熒光素的熒光壽命時(shí)間在 0.2 - 20 ns。

熒光壽命成像有幾點(diǎn)優(yōu)勢(shì)：1.不需要考慮跳色的影響，從而免去了計(jì)算和去除跳色雜質(zhì)信號(hào)的麻煩；去除跳色雜質(zhì)的準(zhǔn)確性很大程度上依賴于信噪比、成像流程的設(shè)計(jì)和控制、以及跳色信號(hào)估算的算法，這些因素使得通過穩(wěn)態(tài)光強(qiáng)度測(cè)量熒光壽命成像的精確度在很多時(shí)候受到質(zhì)疑。2.穩(wěn)態(tài)光強(qiáng)度的熒光壽命成像測(cè)量很容易受熒光標(biāo)記光漂白或是激發(fā)光散射背景的影響,而這些因素對(duì)FLIM-FRET的測(cè)量影響相對(duì)較低。3.熒光壽命成像可以定量的區(qū)分參與FRET和沒有參與FRET的分子數(shù)量，這樣深入的定量分析是穩(wěn)態(tài)光強(qiáng)度方法做不到的。

熒光壽命(FLT)是熒光團(tuán)在發(fā)射光子并返回基態(tài)之前花費(fèi)在激發(fā)態(tài)的時(shí)間。根據(jù)熒光基團(tuán)的不同，F(xiàn)LT可以從皮秒到數(shù)百納秒不等。熒光團(tuán)群的壽命是指經(jīng)熒光或非輻射過程的能量損失后，激發(fā)態(tài)分子數(shù)量以指數(shù)方式衰減到原始數(shù)量的N / e（36.8％）的時(shí)間。熒光壽命是熒光團(tuán)的固有屬性。FLT不依賴于熒光團(tuán)濃度、樣品吸收、樣品厚度、測(cè)量方法、熒光強(qiáng)度、光漂白和/或激發(fā)強(qiáng)度。它受外部因素影響，如溫度、極性和熒光淬滅劑的存在。熒光壽命對(duì)依賴于熒光團(tuán)結(jié)構(gòu)的內(nèi)部因素敏感。熒光壽命成像能夠靈敏地反應(yīng)熒光基團(tuán)生化特性以及周圍微環(huán)境的變化情況。

熒光壽命成像或FLIM是基于熒光樣品中不同區(qū)域的熒光的指數(shù)衰減速率的差異。由τ決定熒光壽命成像的每個(gè)像素的強(qiáng)度，這使研究人員可以查看具有不同熒光衰減率的材料之間的對(duì)比度，還可以產(chǎn)生顯示其他衰減路徑變化的圖像?？梢酝ㄟ^使用脈沖源在時(shí)域中確定熒光壽命。當(dāng)熒光物質(zhì)被超短脈沖激發(fā)時(shí)，時(shí)間分辨的熒光將呈指數(shù)衰減。時(shí)間相關(guān)單光子計(jì)數(shù)（tcspc）通常被用作熒光壽命的測(cè)量方法，因?yàn)樗a(bǔ)償了在源強(qiáng)度和單光子的脈沖幅度的變化。更具體地說，TCSPC由單個(gè)光子雪崩光電二極管（SPAD）記錄相對(duì)于激發(fā)激光脈沖的單個(gè)光子的壽命。重復(fù)記錄多個(gè)激光脈沖，并在記錄了足夠多的事件后，研究人員能夠建立所有這些記錄的時(shí)間點(diǎn)上事件數(shù)量的直方圖。然后，可以將該直方圖擬合到的指數(shù)壽命衰減函數(shù)的指數(shù)函數(shù)，并且可以相應(yīng)地提取壽命參數(shù)。熒光壽命成像可用于多種生物應(yīng)用，包括組織表面掃描、組織類型繪圖、光動(dòng)力治理、皮膚成像等。深圳單分子熒光壽命成像哪家好

市場(chǎng)上熒光壽命的測(cè)量方式可分為時(shí)域法和頻域法。珠海單分子熒光壽命成像哪里買

熒光壽命可以在頻域或者時(shí)間域測(cè)量。時(shí)間域測(cè)量方法涉及用短光脈沖照射樣品（比色皿、細(xì)胞或組織），然后隨時(shí)間測(cè)量發(fā)射強(qiáng)度。FLT由衰減曲線的斜率確定。有幾種熒光檢測(cè)方法可用于壽命測(cè)量，其中時(shí)間相關(guān)單光子計(jì)數(shù)（TCSPC）可實(shí)現(xiàn)簡(jiǎn)單的數(shù)據(jù)收集和增強(qiáng)的定量光子計(jì)數(shù)。頻域方法涉及高頻率入射光的正弦調(diào)制。在該方法中，發(fā)射發(fā)生在與入射光相同的頻率處，并且隨著激發(fā)光兼有相位延遲和振幅的變化（解調(diào)）。壽命測(cè)量不需要波長(zhǎng)比率探針來提供眾多分析物的定量測(cè)定。壽命法通過使用光譜位移探針擴(kuò)展了分析物濃度范圍的靈敏度。壽命測(cè)量可用于沒有直接探針的分析物。包括葡萄糖、抗原或基于熒光能量轉(zhuǎn)移轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制的任何親和力或免疫測(cè)定。珠海單分子熒光壽命成像哪里買

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