在使用TCSPC測(cè)量熒光壽命的過(guò)程中,需要調(diào)節(jié)樣品的熒光強(qiáng)度,確保每次激發(fā)后較多只有一個(gè)熒光光子到達(dá)終止光電倍增管。TCSPC方法的突出優(yōu)點(diǎn)是靈敏度高、測(cè)量結(jié)果準(zhǔn)確、系統(tǒng)誤差小。采用該技術(shù)對(duì)樣品進(jìn)行熒光壽命成像時(shí),必須逐點(diǎn)測(cè)量樣品的熒光壽命,而每一點(diǎn)的測(cè)量時(shí)間又比較長(zhǎng),因此,通常認(rèn)為該技術(shù)不太適合熒光壽命測(cè)量。不過(guò),近年來(lái),隨著TCSPC技術(shù)和固體超快激光技術(shù)的發(fā)展,TCSPC技術(shù)已具備快速測(cè)量熒光壽命的條件。通過(guò)與激光共聚焦顯微鏡的結(jié)合,可以對(duì)樣品進(jìn)行熒光壽命成像的測(cè)量。熒光壽命可以在頻域或者時(shí)間域測(cè)量。廣州三維熒光壽命成像報(bào)價(jià)
熒光壽命成像裝置通常由激發(fā)光源、光電探測(cè)器、延遲儀器及圖像處理設(shè)備組成。門控儀器的光源通常為短脈沖的超快激光器,常見的成像設(shè)備是CCD,延遲儀器提供FLIM的控制信號(hào)。由于光電探測(cè)器和CCD等器件輸出的是光強(qiáng)度信息,熒光壽命圖像可以通過(guò)Rapid Lifetime Determination (RLD)和Weighted Nonlinear Least Square (WNLLS)兩種處理方法利用熒光強(qiáng)度圖像通過(guò)反演得出。熒光壽命成像(FLIM)有時(shí)域和頻域測(cè)量法,時(shí)域測(cè)量中主要有TCSPC技術(shù)、門控探測(cè)技術(shù)、條紋相機(jī)探測(cè)技術(shù)和頻閃技術(shù);頻域測(cè)量法中主要是調(diào)制技術(shù)。每一種測(cè)量技術(shù)在測(cè)量樣品成像的過(guò)程中都有優(yōu)勢(shì)和劣勢(shì),在實(shí)際測(cè)量樣品的熒光壽命時(shí),需要根據(jù)實(shí)際的樣品裝填而綜合考慮選擇合適的熒光壽命測(cè)量技術(shù)。廣州分子熒光壽命成像費(fèi)用熒光壽命取決于熒光分子所處的微環(huán)境,通過(guò)對(duì)樣品熒光壽命的測(cè)量和成像可以定量獲取樣品的功能信息。
影響熒光壽命成像測(cè)量的因素有哪些?散射光的影響: 主要是瑞利散射光和拉曼散射光的影響較大。校正辦法:先用短的激發(fā)光激發(fā),檢出溶液的拉曼峰,然后進(jìn)行熒光光譜校正。因?yàn)闊晒夤庾V不隨激發(fā)光波長(zhǎng)的改變而改變,而拉曼光卻隨之改變。高濃度樣品的影響:1)當(dāng)激發(fā)光照射高濃度樣品時(shí),在激發(fā)光入口附近產(chǎn)生熒光,但這些熒光并不能進(jìn)入熒光檢測(cè)器。2)高濃度的分子之間相互作用而發(fā)生活性阻礙現(xiàn)象。3)熒光的再吸收:即熒光光譜的短波長(zhǎng)端和激發(fā)光譜的長(zhǎng)波長(zhǎng)端如果相互重疊,則發(fā)生熒光再吸收。
熒光壽命成像顯微術(shù)(FLIM)是一種利用熒光染料固有特性的成像技術(shù)。除了具有特有的發(fā)射光譜外,每個(gè)熒光分子還有特有的壽命,它反映了熒光基團(tuán)在發(fā)射光子之前處于激發(fā)態(tài)的時(shí)間。除了標(biāo)準(zhǔn)的熒光強(qiáng)度測(cè)量外,壽命分析還可以提供其他信息。過(guò)去,壽命成像一直是一種緩慢、復(fù)雜的專業(yè)化技術(shù)。只有經(jīng)驗(yàn)豐富的顯微鏡**或物理學(xué)家才會(huì)使用這種技術(shù)。熒光壽命成像提供了額外的信息,有助提高共聚焦成像的質(zhì)量。它非常適合用于區(qū)分熒光發(fā)射光譜重疊的熒光探針,或消除不需要的背景熒光信號(hào)。熒光壽命檢測(cè)經(jīng)典方法為點(diǎn)對(duì)點(diǎn)的時(shí)間相關(guān)單光子計(jì)數(shù)(TCSPC)。
熒光壽命成像開始用于組織體的在體成像,與傳統(tǒng)的使用熒光強(qiáng)度和光譜信息作為鑒別組織異常的成像方式相比,壽命成像提供了更多的生化診斷信息。熒光壽命成像已用于骨骼和牙齒的診斷。另外,采用多光子激發(fā)可顯著提高組織體的成像深度,如對(duì)人體皮膚自體熒光進(jìn)行多光子激發(fā)熒光壽命成像,成像深度達(dá)200 um,組織體的熒光壽命分布揭示了細(xì)胞代謝狀態(tài)的變化,可用于對(duì)皮膚病的診斷。對(duì)腔體中瘤的早期臨床診斷,已開發(fā)出具有實(shí)時(shí)及壽命分辨功能的內(nèi)窺鏡,并對(duì)離體膀胱樣品進(jìn)行測(cè)試,得到了黃素分子的自體熒光壽命圖像。熒光壽命成像這種技術(shù)相對(duì)較新,涉及到同時(shí)在圖像的每個(gè)像素處確定熒光衰減時(shí)間的空間分布。廣東植物熒光壽命成像多少錢
熒光壽命成像擴(kuò)展了傳統(tǒng)熒光成像的維度,是功能成像的理想工具;廣州三維熒光壽命成像報(bào)價(jià)
熒光壽命成像技術(shù)實(shí)時(shí)監(jiān)控納米顆粒在細(xì)胞內(nèi)的穩(wěn)定性:利用熒光壽命成像顯微鏡技術(shù)可實(shí)現(xiàn)可以實(shí)時(shí)監(jiān)控發(fā)光納米顆粒在活細(xì)胞內(nèi)的穩(wěn)定性。熒光壽命成像不但具有其它熒光顯微鏡所具有的高靈敏度、可檢測(cè)人體生物樣品等優(yōu)點(diǎn),它在監(jiān)控?zé)晒饧{米材料的穩(wěn)定性上還具有以下幾個(gè)優(yōu)勢(shì):(1)熒光壽命不受熒光探針的濃度的影響,可排除納米材料的胞吐及細(xì)胞分化導(dǎo)致的納米顆粒的稀釋等對(duì)測(cè)量的影響;(2)很多常見的發(fā)光材料的熒光壽命都遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于細(xì)胞的自熒光的壽命,很易去除生物自熒光對(duì)熒光成像的干擾;(3)發(fā)光材料的熒光壽命和其材料的穩(wěn)定性密切相關(guān),熒光壽命的改變可以靈敏地反映相應(yīng)材料的化學(xué)穩(wěn)定性。廣州三維熒光壽命成像報(bào)價(jià)
上海波銘科學(xué)儀器有限公司專注技術(shù)創(chuàng)新和產(chǎn)品研發(fā),發(fā)展規(guī)模團(tuán)隊(duì)不斷壯大。一批專業(yè)的技術(shù)團(tuán)隊(duì),是實(shí)現(xiàn)企業(yè)戰(zhàn)略目標(biāo)的基礎(chǔ),是企業(yè)持續(xù)發(fā)展的動(dòng)力。上海波銘科學(xué)儀器有限公司主營(yíng)業(yè)務(wù)涵蓋拉曼光譜儀,電動(dòng)位移臺(tái),激光器,光電探測(cè)器,堅(jiān)持“質(zhì)量保證、良好服務(wù)、顧客滿意”的質(zhì)量方針,贏得廣大客戶的支持和信賴。公司憑著雄厚的技術(shù)力量、飽滿的工作態(tài)度、扎實(shí)的工作作風(fēng)、良好的職業(yè)道德,樹立了良好的拉曼光譜儀,電動(dòng)位移臺(tái),激光器,光電探測(cè)器形象,贏得了社會(huì)各界的信任和認(rèn)可。