新技術(shù)和新概念的發(fā)展促進(jìn)了數(shù)據(jù)評(píng)估,意味著熒光壽命成像(FLIM)的速度提高了10倍,可以媲美標(biāo)準(zhǔn)共聚焦成像,且操作簡(jiǎn)單。熒光過(guò)程提供了兩個(gè)用于成像的測(cè)量參數(shù):強(qiáng)度和熒光壽命。熒光壽命是指分子停留在激發(fā)態(tài)的時(shí)間。可以通過(guò)觀察足夠大量的激發(fā)-發(fā)射事件集中來(lái)測(cè)量熒光染料的典型壽命。我們可以測(cè)量圖像中所有像素的典型壽命,并將這些數(shù)字記入數(shù)組元素。那就是熒光壽命成像。典型的熒光壽命范圍在0.2到20納秒之間。熒光壽命與熒光染料的濃度無(wú)關(guān)。無(wú)論樣品結(jié)構(gòu)只有零星熒光染料還是載滿熒光染料:壽命信號(hào)始終相同,并表明在同一環(huán)境中存在相同的熒光染料。因此,熒光壽命不受光漂白的影響。樣品深處的圖像將比表面圖像暗得多——但壽命并沒(méi)有改變。這是壽命測(cè)定的主要優(yōu)勢(shì)。熒光壽命成像(FLIM)對(duì)細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)及調(diào)控,蛋白間的相互作用等生物研究發(fā)揮著很大作用。浙江生物熒光壽命成像哪個(gè)品牌好
熒光壽命成像可以應(yīng)用到個(gè)性化化療:要針對(duì)患者所患的特殊病癥,找到較有效的抗病藥物至關(guān)重要。但是,病細(xì)胞對(duì)不同類型藥物的反應(yīng)并不是完全可預(yù)測(cè)的。因此,進(jìn)行活檢,將細(xì)胞培養(yǎng)并用不同的藥物處理。同時(shí),它們被FLIM重復(fù)成像。熒光壽命表明治理后細(xì)胞代謝狀態(tài)的早期改變。因此,通過(guò)這些測(cè)量,只需幾天即可確定較有效的藥物。熒光壽命成像將時(shí)域多指數(shù)衰減分析與相量圖相結(jié)合。時(shí)域中熒光衰減的測(cè)量需要短的激發(fā)脈沖和快速的檢測(cè)電路。樣品中的每個(gè)點(diǎn)都被依次激勵(lì)。使用時(shí)域方法,壽命是從對(duì)衰減數(shù)據(jù)的指數(shù)擬合得出的。佛山化學(xué)熒光壽命成像報(bào)價(jià)熒光壽命對(duì)依賴于熒光團(tuán)結(jié)構(gòu)的內(nèi)部因素敏感。
熒光壽命成像是什么?如果分子環(huán)境刺激激發(fā)態(tài)衰變而不發(fā)射光子,則熒光強(qiáng)度會(huì)降低(淬滅)。熒光淬滅是一條單獨(dú)的發(fā)射路徑,因此在動(dòng)力學(xué)上與熒光過(guò)程形成競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系。激發(fā)態(tài)存儲(chǔ)現(xiàn)在可以通過(guò)一個(gè)以上的過(guò)程衰變,從而縮短熒光壽命。這種壽命的改變可用于收集分子環(huán)境的信息。一種特殊類型的淬滅是將激發(fā)能量以非輻射的方式傳遞到相鄰的不同熒光染料中:“熒光共振能量轉(zhuǎn)移”,F(xiàn)RET。此時(shí),不只第1個(gè)熒光染料(供體)變暗,壽命變短,而且第二個(gè)熒光染料(受體)在“錯(cuò)誤的”激發(fā)顏色下開(kāi)始發(fā)光。由于這種效果的產(chǎn)生需要兩種熒光染料(小于10 nm)的密切接觸,因此將其用作研究分子相互作用的“分子標(biāo)尺”。它也是許多現(xiàn)代FRET生物傳感器的基礎(chǔ)。
時(shí)域法熒光壽命的測(cè)量和熒光壽命成像主要有時(shí)間相關(guān)單光子計(jì)數(shù)法(time correlated single photon counting, TCSPC)、門控探測(cè)法(time-gated detection)、條紋相機(jī)測(cè)量法(streak-FLIM)、頻閃技術(shù)等四種常見(jiàn)的方法。TCSPC是目前測(cè)量熒光壽命的主要技術(shù),同軸脈沖光源發(fā)出的脈沖光引起起始光電倍增管產(chǎn)生電信號(hào),該信號(hào)通過(guò)恒分信號(hào)甄別器1啟動(dòng)時(shí)幅轉(zhuǎn)換器(time-amplitude converter,TAC),時(shí)幅轉(zhuǎn)換器產(chǎn)生一個(gè)隨時(shí)間線性增長(zhǎng)的電壓信號(hào)。此外,同軸脈沖光源發(fā)出的脈沖光通過(guò)激發(fā)單色器后到達(dá)樣品池,樣品產(chǎn)生的熒光信號(hào)再經(jīng)過(guò)發(fā)射單色器到達(dá)終止光電倍增管,由此產(chǎn)生的電信號(hào)經(jīng)由恒分信號(hào)甄別器2到達(dá)時(shí)幅轉(zhuǎn)換器并使其停止工作。此時(shí),時(shí)幅轉(zhuǎn)換器根據(jù)累積電壓輸出一個(gè)數(shù)字信號(hào)并在多通道分析儀(multi-channel analyzer)的相應(yīng)時(shí)間通道計(jì)入一個(gè)信號(hào),表明檢測(cè)到壽命為該時(shí)間的一個(gè)光子。經(jīng)過(guò)幾十萬(wàn)次的重復(fù)后,不同的時(shí)間通道累積下來(lái)的光子數(shù)目不相同。將熒光壽命成像與共聚焦成像技術(shù)結(jié)合起來(lái),實(shí)現(xiàn)人體三維熒光壽命成像,實(shí)現(xiàn)人體三維功能成像奠定基礎(chǔ)。
熒光分子受激發(fā)后發(fā)光,熒光壽命量化了發(fā)光的衰減率。該特征時(shí)間不但取決于特定的熒光團(tuán),還取決于其環(huán)境,分子相互作用影響弛豫過(guò)程并改變熒光團(tuán)的壽命。熒光壽命是微環(huán)境的相對(duì)參數(shù),不受環(huán)境吸收、樣本濃度等因素影響,因此能夠?qū)ι锝M織環(huán)境中的 p H 值水平、離子濃度、氧分子濃度等微環(huán)境狀態(tài)進(jìn)行高精度檢測(cè)。熒光壽命顯微成像(FLIM),可以定位不同的分子及濃度分布,在生物,材料,半導(dǎo)體領(lǐng)域具有重要的應(yīng)用價(jià)值。熒光壽命成像原理及應(yīng)用說(shuō)明:熒光壽命是指分子受到光脈沖激發(fā)后返回基態(tài)之前在激發(fā)平均停留的時(shí)間,處于激發(fā)態(tài)的熒光分子在從激發(fā)到基態(tài)的過(guò)程中發(fā)射熒光釋放能量。熒光壽命取決于熒光分子所處的微環(huán)境,通過(guò)對(duì)樣品熒光壽命的測(cè)量和成像可以定量獲取樣品的功能信息。熒光壽命是熒光基團(tuán)在通過(guò)發(fā)射熒光光子返回基態(tài)之前在其激發(fā)態(tài)下保持平均多長(zhǎng)時(shí)間的量度。遼寧熒光壽命成像采購(gòu)
熒光壽命成像能夠靈敏地反應(yīng)熒光基團(tuán)生化特性以及周圍微環(huán)境的變化情況。浙江生物熒光壽命成像哪個(gè)品牌好
在種類繁多的顯微技術(shù)中,熒光壽命顯微成像技術(shù)(FLIM)具有對(duì)生物大分子結(jié)構(gòu)、動(dòng)力學(xué)信息和分子環(huán)境等進(jìn)行高分辨高精度測(cè)量的能力,因此其重要性日漸提升,被普遍地應(yīng)用于生物學(xué)研究及臨床診斷等領(lǐng)域。熒光的特性包含有:熒光激發(fā)和發(fā)射光譜、熒光強(qiáng)度、量子效率、熒光壽命等,其中,熒光壽命是指熒光分子在激發(fā)態(tài)上存在的平均時(shí)間(納秒量級(jí))。分子的熒光壽命在幾納秒至幾百納秒之間,因此,測(cè)量熒光壽命需要極快響應(yīng)時(shí)間的探測(cè)器。熒光壽命成像的發(fā)展很好地彌補(bǔ)了基于強(qiáng)度成像的問(wèn)題,對(duì)生物醫(yī)學(xué)檢測(cè)有著重要的意義。浙江生物熒光壽命成像哪個(gè)品牌好
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