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檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)如何改進(jìn)錯(cuò)誤?評(píng)價(jià)試劑的實(shí)用性。試劑的穩(wěn)定性對(duì)準(zhǔn)確度非常重要。在啟用檢測(cè)試劑盒之前,應(yīng)重復(fù)檢測(cè)陰性和陽(yáng)性對(duì)照品和樣品,試劑只在試劑符合要求后才干使用。操作前仔細(xì)閱讀檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)。嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化操作。不同批號(hào)的試劑不混合。值得改善的是,只要通過(guò)反復(fù)的試驗(yàn),如洗盤(pán)的數(shù)量,才干加以改善。加樣要準(zhǔn)確、快速。樣品添加的不準(zhǔn)確度和酶制劑用量的不確認(rèn)度直接影響顯色效果。此外,顯色深度和A值的確認(rèn)與顯色劑和終液體的加入量有關(guān),因此樣品的裝載應(yīng)慎重。檢測(cè)試劑盒需要在必定時(shí)間內(nèi)完結(jié)采樣的試驗(yàn),如果采樣速度慢,會(huì)呈現(xiàn)差錯(cuò),試劑會(huì)露出很長(zhǎng)時(shí)間,特別是當(dāng)室溫過(guò)高時(shí),保質(zhì)期會(huì)縮短乃至失效。丁胺卡那霉素給藥說(shuō)明:長(zhǎng)期用藥可能導(dǎo)致耐藥菌過(guò)度生長(zhǎng)。痰消化液(胰酶消化法)
檢測(cè)試劑盒變質(zhì)的原因:樣本因素。標(biāo)本干擾因素包括內(nèi)源性干擾因素和外源性干擾因素,前者包括類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、異嗜性抗體、自身抗體、溶菌酶等,后者包括標(biāo)本溶血、標(biāo)本被細(xì)菌污染、標(biāo)本貯存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)、標(biāo)本凝固不全、冷凍標(biāo)本的反復(fù)凍融等。操作因素。標(biāo)本干擾因素包括內(nèi)源性干擾因素和外源性干擾因素,前者包括類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、異嗜性抗體、自身抗體、溶菌酶等,后者包括標(biāo)本溶血、標(biāo)本被細(xì)菌污染、標(biāo)本貯存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)、標(biāo)本凝固不全、冷凍標(biāo)本的反復(fù)凍融等。IPTG(50mg/ml)檢測(cè)試劑盒以免疫學(xué)反應(yīng)為根底。
說(shuō)明?檢測(cè)試劑盒的具體規(guī)則:汲取液體時(shí)要選用量程和需要量挨近的微量加樣器吸,削減誤差。液體全部參加酶標(biāo)孔后,將酶標(biāo)板放在桌子上平行輕輕搖晃30s,使液體充沛混合均勻,也使其得到充沛的反響。孵育時(shí)要使蓋板膜封好酶標(biāo)板,避免水分蒸發(fā),以防曲線不成線性。實(shí)驗(yàn)前的30min將試劑盒中的所有試劑從冰箱取出,檢測(cè)試劑盒使試劑盒中的所有試劑與提取好的樣品溶液的溫度相同,酶標(biāo)板只需取出所需量。因?yàn)榈孜镲@色劑對(duì)光及其靈敏,因而要避光保存。手藝洗板時(shí)每次參加洗滌液后。應(yīng)靜置15~30s,不要將一個(gè)酶標(biāo)孑L中的洗滌液濺入另一酶標(biāo)孔中,避免穿插污染。甩去洗滌液后將酶標(biāo)板放在毛巾或吸水紙上拍干。
我們?cè)跈z測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)中,有時(shí)會(huì)遇到樣品濃度挨近檢測(cè)試劑盒的靈敏度就容易發(fā)生樣本OD450值低于空白值的現(xiàn)象,特別是在血清和血漿樣本中。這就有可能是基質(zhì)效應(yīng)導(dǎo)致的結(jié)果。首先我們要知道什么是基質(zhì),基質(zhì)是指樣品中目標(biāo)分析物以外的部分。由于基質(zhì)成分會(huì)對(duì)分析過(guò)程有明顯干擾,影響分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。業(yè)內(nèi)把這些影響統(tǒng)稱為基質(zhì)效應(yīng)。這是檢測(cè)試劑盒開(kāi)發(fā)和使用中需要避開(kāi)的雷。如何判斷是否是基質(zhì)效應(yīng)呢?當(dāng)單個(gè)樣本或少量樣本值低于空白值時(shí),可能是實(shí)驗(yàn)操作出現(xiàn)問(wèn)題,這時(shí)應(yīng)增加重復(fù),進(jìn)步操作技術(shù)。當(dāng)許多樣本都低于空白值時(shí),應(yīng)思考基質(zhì)效應(yīng)的影響,建立校正曲線予以修改。基質(zhì)效應(yīng)的原因錯(cuò)綜復(fù)雜,有可能是樣品中存在的基質(zhì)導(dǎo)致原抗體的聯(lián)絡(luò)結(jié)合能力下降,便產(chǎn)生了樣本值低于空白值的現(xiàn)象。導(dǎo)致樣本值無(wú)法計(jì)算出數(shù)值,或許數(shù)值為負(fù)。檢測(cè)試劑盒太屢次的洗刷會(huì)下降信號(hào)強(qiáng)度。
注意事項(xiàng):1.全過(guò)程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。為獲得較佳的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,較好在取樣 2h內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn),樣品存放時(shí)間越長(zhǎng),細(xì)胞分離效果越差。樣品放置超過(guò) 6h后分離效果更差甚至不能達(dá)到分離目的。2.本實(shí)驗(yàn)較好不要使用高聚合材質(zhì)(如聚苯乙烯)的塑料制品,應(yīng)使用無(wú)靜電、低靜電離 心管及未經(jīng)堿處理過(guò)后的玻璃制品,因?yàn)殪o電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁、堿處理的玻璃表面 會(huì)變成毛面,影響細(xì)胞分離效果。3.吸取過(guò)多的淋巴細(xì)胞層及分離液層會(huì)導(dǎo)致分離液交界處的粒細(xì)胞被吸出從而使混雜的粒 細(xì)胞數(shù)量增加。4.分離液用量大于組織單細(xì)胞懸液樣本時(shí),分離效果更佳。注意事項(xiàng):避免反復(fù)凍融。DTT溶液(1mol/L)
檢測(cè)試劑盒保存:部分試劑保存于-20℃,部分試劑保存于2-8℃,詳細(xì)以標(biāo)簽上的標(biāo)明為準(zhǔn)。痰消化液(胰酶消化法)
說(shuō)明?檢測(cè)試劑盒的具體規(guī)則:要確保微量加樣器的準(zhǔn)確性,能夠運(yùn)用蒸餾水和電子天平進(jìn)行確認(rèn)(因?yàn)檎麴s水不含雜質(zhì),溫度環(huán)境為20%左右時(shí),lmL的水能夠看作是lg、200L的水能夠看作是0.2g)每一把微量加樣器都應(yīng)該將其高量程和低量程進(jìn)行確認(rèn)。在運(yùn)用微量加樣器時(shí),汲取不同瓶子中液體后要更換頭,即便汲取規(guī)范品溶液。汲取液體時(shí)速度不易太快,檢測(cè)試劑盒避免發(fā)生氣泡,汲取的量不夠準(zhǔn)確。將液體加到酶標(biāo)孔中時(shí),避免頭和孔內(nèi)液體觸摸,可使頭上的液滴和孑L壁觸摸,液滴會(huì)自然流下去。吸入液體時(shí)的的辦法是吸兩檔打一檔,避免因?yàn)轭^的毛細(xì)效果使得部分液體不能流出而形成的誤差。痰消化液(胰酶消化法)