怎樣減少檢測試劑盒誤差?檢驗技師應具備從事實驗室操作的基本素質和實踐經驗。能熟練操作實驗儀器、器械,具有一定總結和分析問題的能力,對實驗中出現的意外情況能及時妥善解決。使用校對過的微量移液器,排除自然誤差。移液器準確與否對定量檢測尤為重要。仔細閱讀說明書,嚴格按照說明書要求進行規(guī)范化操作。不同批號的試劑不可混用。值得改進的地方,反復試驗確定成立后才能改進。洗滌徹底,如若洗板不徹底,酶結合物本底顯色會呈現假陽性。洗滌液要新鮮,現用現配,陳舊的洗滌液會出現本底增高現象,也可能出現假陽性。磷酸緩沖鹽溶液具有鹽平衡。淀粉樣物質染色液(改良Stores剛果紅法)
甘油三酯檢測試劑盒的操作注意事項:試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存;實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質;不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用;使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器;使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻檢測試劑盒里的各種成份及樣品;洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。亮抑酶肽溶液(leupeptin,1mg/ml)檢測試劑盒在沒有促凝劑和抗凝劑存在的狀況下,正常血液搜集后1/2~2h初步凝聚。
我們在檢測試劑盒實驗中,有時會遇到樣品濃度挨近檢測試劑盒的靈敏度就容易發(fā)生樣本OD450值低于空白值的現象,特別是在血清和血漿樣本中。這就有可能是基質效應導致的結果。首先我們要知道什么是基質,基質是指樣品中目標分析物以外的部分。由于基質成分會對分析過程有明顯干擾,影響分析結果的準確性。業(yè)內把這些影響統稱為基質效應。這是檢測試劑盒開發(fā)和使用中需要避開的雷。如何判斷是否是基質效應呢?當單個樣本或少量樣本值低于空白值時,可能是實驗操作出現問題,這時應增加重復,進步操作技術。當許多樣本都低于空白值時,應思考基質效應的影響,建立校正曲線予以修改。基質效應的原因錯綜復雜,有可能是樣品中存在的基質導致原抗體的聯絡結合能力下降,便產生了樣本值低于空白值的現象。導致樣本值無法計算出數值,或許數值為負。
標準物質在計量學中的作用:標準物質所提供特性量值的不確定度必須已知且滿足測量需求。因此,標準物質可以按不確定度等級(越小越好,但評定必須合理)和依據不確定度報告的可靠性和驗證結果進行分級分類。在物理計量中,測量標準一般按層級水平劃分。測量基準的不確定度小且處于計量溯源層級的高大上,次級標準通過與一個或多個基準直接比較導出或驗證,依此類推。這個層級體系用來建立測量系統的準確度。這些測量系統用工作標準校準,而工作標準則用參考標準校準,依此類推。理想情況下,所有這些溯源鏈止于基準。通過這個過程,就可校正測量系統的重要偏差,同時,測量不確定度追溯至基準的不確定度和相關比較測量的不確定度??蒲袑嶒炛性噭┤∮脩⒁馐马棧鹤x數時量筒必須放平穩(wěn)。
殺滅曲線的建立:通過建立殺滅曲線(劑量反應曲線),確定能夠殺死未轉染宿主細胞的較低濃度,從而篩選得到穩(wěn)定表達目的蛋白的細胞株。建立殺滅曲線至少選擇5個濃度。1、按照20-25%的細胞密度將未轉化的細胞鋪在合適的培養(yǎng)板上,37℃,CO2過夜培養(yǎng)(需要更高密度,可增加接種量)。2、根據細胞類型,設定合適的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例,可設定50,100,250,500,750,1000μg/mL。3、第2天換用新鮮配制的含有相應濃度藥物的培養(yǎng)基,每個濃度做三個平行孔。4、接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。5、按照每2天進行活細胞計數,來確定殺滅未轉染細胞的恰當濃度。通常7-10天內能夠殺死絕大多數細胞的較低濃度為篩選用的工作濃度。檢測試劑盒洗刷次數越多,布景越低。奧氏試劑(Offner's Reagent)
試劑的穩(wěn)定性對準確度非常重要。淀粉樣物質染色液(改良Stores剛果紅法)
G418又稱遺傳霉素,新霉素,對細菌、酵母、高等植物、原生生物、哺乳動物細胞具有氨基苷類毒性,對真核細胞進行篩選。G418(G418,G 418,G-418,Geneticin)是一種氨基糖苷類 ,這種氨基糖類的結構和新霉素、慶大霉素、卡那霉素相似,在分子遺傳試驗中,是穩(wěn)定轉染常用的抗性篩選試劑。它通過克制轉座子Tn601,Tn5的基因,干擾核糖體功能而阻斷蛋白質合成,對原核和真核等細胞產生東西,包括細菌、酵母、植物和哺乳動物細胞 ,也包括原生動物和蠕蟲。當neo基因被整合進真核細胞DNA后 ,則能啟動neo基因編碼的序列轉錄為mRNA ,從而獲得抗性產物氨基糖苷磷酸轉移酶的表達 ,使細胞獲得抗性而能在含有G418的選擇性培養(yǎng)基中生長。G418的這一選擇特性 ,已在基因轉移、基因敲除、抗性篩選以及轉基因動物等方面得以普遍應用。淀粉樣物質染色液(改良Stores剛果紅法)