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IF=12.5宇玫博熒光標(biāo)記染料助力客戶腎缺血再灌注損傷研究
近期，來(lái)自四川大學(xué)華西醫(yī)院的魏鑫教授和宋涂潤(rùn)教授團(tuán)隊(duì)在International Journal of Surgery雜志發(fā)表了題為“Human umbilical cord mesenchymal stem cells-derived extracellular vesicles ameliorate kidney ischemia-reperfusion injury by suppression of senescent tubular epithelial cells: experimental study.”的科研論文，IF=12.5。
研究背景：
腎臟移植（Kidney transplantation）是治療終末期腎病的最佳方法，但供體腎臟短缺的問(wèn)題一直未解決。供體腎臟在移植過(guò)程中不可避免地會(huì)經(jīng)歷缺血和再灌注損傷，而邊緣供體腎臟更容易受損且自我修復(fù)能力較差，導(dǎo)致移植后腎臟相關(guān)并發(fā)癥的發(fā)生率較高。細(xì)胞衰老（Cellular senescence）是細(xì)胞在受到刺激后介于正常細(xì)胞和死亡細(xì)胞之間的一種狀態(tài)，與組織損傷后的惡化和再生能力降低有關(guān)。在腎缺血再灌注損傷（ischemia/reperfusion Injury，IRI）中，細(xì)胞衰老的作用具有雙重調(diào)節(jié)功能，調(diào)節(jié)衰老細(xì)胞可能是改善供體腎臟結(jié)果的潛在治療靶點(diǎn)。人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞衍生的外泌體（HUMSC-EVs）在免疫調(diào)節(jié)和組織微環(huán)境穩(wěn)態(tài)中起重要作用，能夠通過(guò)減少氧化損傷、炎癥細(xì)胞因子表達(dá)、抑制細(xì)胞凋亡等機(jī)制改善腎臟IRI的預(yù)后。本文旨在研究HUMSC-EVs通過(guò)抑制腎小管上皮細(xì)胞衰老來(lái)實(shí)現(xiàn)保護(hù)腎臟IRI的機(jī)制，并探討了HUMSC-EVs與達(dá)沙替尼（dasatinib）和槲皮素（quercetin）聯(lián)合治療的潛在效果。
研究成果及意義：
在本研究中，作者首先通過(guò)超速離心法分離得到HUMSC-EVs，并通過(guò)納米粒子示蹤分析（NTA）、透射電鏡（TEM）和標(biāo)志蛋白（WB）對(duì)其進(jìn)行鑒定。隨后作者使用人腎-2細(xì)胞（HK-2）模擬缺氧再氧合（H/R）模型來(lái)模擬腎臟IRI，檢測(cè)HUMSC-EVs對(duì)HK-2細(xì)胞的影響。結(jié)果表明，H/R處理的HK-2細(xì)胞表現(xiàn)出細(xì)胞增殖能力下降、細(xì)胞衰老標(biāo)志物（p53、p21、p16、SA-β-gal）表達(dá)增加、細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期停滯。又通過(guò)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序探索其潛在調(diào)節(jié)機(jī)制，研究表明，HUMSC-EVs處理能顯著提高細(xì)胞數(shù)量、細(xì)胞活力和細(xì)胞增殖能力，減少SABG陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量，減輕細(xì)胞周期停滯，并降低細(xì)胞衰老相關(guān)蛋白（p53、p21、p-γH2AX）的表達(dá)，并且HUMSC-EVs通過(guò)調(diào)節(jié)Ras-ERK1/2信號(hào)通路來(lái)減輕HR誘導(dǎo)的HK-2細(xì)胞損傷。接著作者將成年雄性小鼠分為對(duì)照組、IRI組、HUMSC-EVs***組、衰老細(xì)胞清除劑（dasatinib和quercetin）***組和聯(lián)合***組（HUMSC-EVs和dasatinib和quercetin），檢測(cè)各組小鼠的腎功能、腎小管上皮細(xì)胞衰老特征、急性腎損傷和慢性間質(zhì)纖維化情況。IHC實(shí)驗(yàn)和WB結(jié)果表明，IRI小鼠模型表現(xiàn)出腎功能下降、腎組織損傷、間質(zhì)纖維化和細(xì)胞衰老。腎臟包膜下注射HUMSC-EVs能顯著改善腎功能，減少腎小管上皮細(xì)胞的衰老特征，減輕急性腎損傷和慢性間質(zhì)纖維化。HUMSC-EVs主要通過(guò)調(diào)節(jié)Bax/Bcl-2依賴的凋亡來(lái)實(shí)現(xiàn)腎臟保護(hù)，并通過(guò)調(diào)節(jié)Ras-pERK-Ets1-p53信號(hào)通路依賴的細(xì)胞衰老來(lái)減少腎小管萎縮和腎臟間質(zhì)纖維化?？诜ダ霞?xì)胞清除劑dasatinib和quercetin也能減輕IRI誘導(dǎo)的腎臟損傷，而HUMSC-EVs和dasatinib和quercetin的聯(lián)合治療具有更好的腎臟保護(hù)效果。最終作者認(rèn)為在急性腎損傷和慢性間質(zhì)纖維化方面，HUMSC-EVs通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞衰老和凋亡來(lái)減輕腎臟IRI。HUMSC-EVs與衰老細(xì)胞清除劑的聯(lián)合***可提供更好的腎臟保護(hù)效果，為腎臟移植中的器官保護(hù)和組織修復(fù)提供了一種潛在的治療策略，為利用HUMSC-EVs和衰老細(xì)胞清除劑***腎臟IRI提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)，可能有助于改善邊緣供體腎臟的質(zhì)量，擴(kuò)大供體器官池。
該研究中使用本公司外泌體綠色熒光染料（PK67）(貨號(hào)：UR52303) 標(biāo)記HUMSC-EV的脂質(zhì)雙層，使用N-SIM S超分辨率顯微鏡（Nikon）觀察HK-2細(xì)胞對(duì)HUMSC-EV的體外攝取，確認(rèn)了PKH 67標(biāo)記的HUMSC-EV在37°C下被HK-2細(xì)胞成功內(nèi)化。
該研究中使用本公司外泌體熒光染料DIR（貨號(hào)：UR21017）標(biāo)記HUMSC-EVS，在注射后2、7和28天進(jìn)行了體內(nèi)成像，使用IVIS SpectrumCT體內(nèi)成像系統(tǒng)（PerkinElmer）分析熒光強(qiáng)度，確認(rèn)了腎被膜下注射的DiR標(biāo)記的HUMSC-EV僅分布在腎區(qū)域中，并且解剖離體的腎臟成像系統(tǒng)顯示了相同的結(jié)果。
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參考文獻(xiàn)：Human umbilical cord mesenchymal stem cellsderived extracellular vesicles ameliorate kidney ischemia-reperfusion injury by suppression of senescent tubular epithelial cells: experimental study. International Journal of Surgery. 2025 Jan 01;111(1):394-410.
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