采用何種方法進(jìn)行RCR/RCL病毒檢測？復(fù)制型病毒（RCR/RCL）是γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒載體與慢病毒載體的一個安全性質(zhì)量控制項目，因病毒載體設(shè)計的不同，產(chǎn)生復(fù)制型病毒的風(fēng)險也會有不同，如采用四質(zhì)粒共轉(zhuǎn)體系以及含有末端自我失活（SelfInactivating，SIN）結(jié)構(gòu)的病毒載體，其病毒載體生產(chǎn)過程中產(chǎn)生RCL的風(fēng)險會明顯降低，但盡管如此，產(chǎn)生RCR/RCL的風(fēng)險仍不能完全排除，因此仍需要對病毒載體進(jìn)行RCR/RCL的檢測，且病毒載體不得檢出RCR/RCL。為什么要做復(fù)制型慢病毒檢測？上海正揚(yáng)生物病毒檢測公司
目前針對RCL復(fù)制型慢病毒檢測的方法差異很大，例如，實時定量PCR方法(Q-PCR法)會因為細(xì)胞或質(zhì)粒DNA殘留導(dǎo)致假陽性；合胞體形成測定法需要慢病毒具有完整的能力并且包含Env元件，該方法的靈敏度還未得到驗證；標(biāo)志物補(bǔ)救測定法尚不清楚來自載體生產(chǎn)過程中的RCL是否會濟(jì)活標(biāo)志物；逆轉(zhuǎn)錄酶活性測定法(PERT)不能區(qū)分RCL和載體顆粒，且細(xì)胞中固有的內(nèi)源性 病毒顆粒也會影響檢測結(jié)果的判斷；細(xì)胞培養(yǎng)法檢測時間過長。如您有需要，歡迎聯(lián)系！上海正揚(yáng)生物病毒檢測公司重組腺相關(guān)病毒檢測。
RCL/RCR病毒檢測的方法FDA推薦的RCL檢測方法是利用敏感細(xì)胞對病毒載體中可能存在的RCL進(jìn)行培養(yǎng)擴(kuò)增，并在培養(yǎng)終點進(jìn)行檢測。?擴(kuò)增期：將待測物與對HIV-1易感并且可大量擴(kuò)增病毒的細(xì)胞系(通常用C8166)孵育，細(xì)胞傳代5次以上，培養(yǎng)至少3周。?指示期：3周后收集培養(yǎng)上清，接種于C8166細(xì)胞中培養(yǎng)7d后檢測RCL標(biāo)志物。?檢測：A：P24ELLISA的方法：適用于由載體制備過程中病毒基因組之間的重組形成RCL的檢測。B：PERT法：當(dāng)RCL進(jìn)行擴(kuò)增后，也可應(yīng)用PERT檢測方法測定逆轉(zhuǎn)錄酶活性。該方法的缺點是在某些細(xì)胞中存在高背景。C：qPCR方法：采用實時定量PCR方法(Q-PCR)測定假型病毒
CAR-T的生產(chǎn)中常用慢病毒載體將CAR基因高效地導(dǎo)入T細(xì)胞中。盡管慢病毒載體具有復(fù)制缺陷，但如果在慢病毒生產(chǎn)過程中發(fā)生重組可能有形成復(fù)制型慢病毒（RCL）或復(fù)制型逆轉(zhuǎn)錄病毒（RCR）的潛在風(fēng)險。根據(jù)蕞新發(fā)布的《體外基因修飾系統(tǒng)藥學(xué)研究與評價技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》和《免疫細(xì)胞治 療產(chǎn)品藥學(xué)研究與評價技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》,復(fù)制型病毒作為重要的安全性風(fēng)險關(guān)注點，需評估制備和臨床使用的風(fēng)險。因此使用慢病毒載體相關(guān)的細(xì)胞產(chǎn)品，RCL和RCR病毒檢測作為安全性檢測在細(xì)胞藥物的研發(fā)和生產(chǎn)過程中至關(guān)重要。南京正揚(yáng)有重組腺相關(guān)病毒檢測試劑盒嗎？
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復(fù)制型逆轉(zhuǎn)錄病毒檢測適用性樣品有哪些？上海正揚(yáng)生物病毒檢測公司
南京正揚(yáng)生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的RCL復(fù)制型慢病毒/RCR復(fù)制型逆轉(zhuǎn)錄病毒檢測試劑盒的特點：①檢測試劑盒采用qRT-PCR原理，操作便捷，2-3小時可出結(jié)果。②試劑盒檢測體系經(jīng)過精心研發(fā)，可以阻止氣溶膠污染物在下一次的檢測反應(yīng)中產(chǎn)生擴(kuò)增，可以蕞大程度的減少檢測過程中污染情況的發(fā)生。③RCL和RCR病毒檢測方法成熟，試劑盒性能穩(wěn)定，檢測靈敏度高，可以快速準(zhǔn)確的獲得供試品中靶向基因的含量，幫助研究者進(jìn)行分析。歡迎聯(lián)系！上海正揚(yáng)生物病毒檢測公司