南京正揚生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的Vero宿主細胞殘留DNA檢測試劑盒利用Taqman熒光探針原理，定量檢測各種生物制品及藥品的中間品、半成品和成品中殘留的Vero宿主細胞DNA，產(chǎn)品具備檢測快速、操作簡單、特異性強、檢測靈敏度高、穩(wěn)定性好、能防止PCR產(chǎn)物污染等特點。蕞低檢測限可以達到fg級別。試劑盒配套有VeroDNA定量參考品，已溯源至國家標準品。產(chǎn)品檢測方法可溯源至中國藥典方法，通則〈3407〉。

宿主細胞殘留DNA檢測的目的：①確認純化工藝合理，能有效去除宿主DNA殘余。②確認產(chǎn)品中雜質(zhì)含量符合標準要求。非特異性的DNA檢測結(jié)果不能區(qū)分究竟是生產(chǎn)中污染、檢測污染、或是工藝缺陷引起的DNA殘余，就無法為解決方案提供有效信息。在嚴格的生產(chǎn)體系中，殘留DNA檢測是解決工藝合理性問題，任何外源污染問題都歸SOP或GMP管理體系解決。③保證生物制品的安全性，生物制品中即便是微量地來源于宿主細胞的外源性DNA都有傳遞仲瘤或病毒相關(guān)基因的可能性。 國家對Vero宿主細胞殘留DNA檢測的要求有哪些？正揚生物質(zhì)粒殘留DNA檢測產(chǎn)品

宿主細胞殘留DNA檢測在動物源性生物材料領(lǐng)域的應(yīng)用及要求：參考YY/T0606.25-2014《組織工程醫(yī)療產(chǎn)品第25部分：動物源性生物材料DNA殘留量測定法：熒光染色法》中的要求，動物源性基質(zhì)材料的脫細胞過程被認為是非常重要的，殘留DNA定量檢測是評價脫細胞過程及控制產(chǎn)品質(zhì)量的重要措施之一。但需要留意的是在去細胞化的過程中引入的添加物如：化學(xué)試劑、核酸酶、蛋白酶等會影響產(chǎn)品蕞終質(zhì)量，也應(yīng)當引起重視。用qPCR進行宿主細胞殘留DNA檢測時，哪些因素會對檢測結(jié)果準確性和方法靈敏度存在較大影響？前處理過程雜質(zhì)干擾的去除對qPCR法宿主細胞殘留DNA檢測結(jié)果有著較大影響。樣品的前處理操作步驟對DNA檢測結(jié)果的準確度影響較大，通常采用加樣回收試驗來進行驗證并確定可接受的偏離限度，內(nèi)標回收率在50-150%的范圍內(nèi)都可以接受。樣品提取步驟較為復(fù)雜，需要特別注意，操作不當不但可能影響回收率還可能引入環(huán)境污染。鄭州HEK293T細胞殘留DNA檢測常見問題美國FDA對Ecoli宿主細胞殘留DNA檢測的要求。

現(xiàn)行《中國藥典》的qPCR檢測法中，針對不同的疫苗，其宿主DNA殘留量有不同的要求，比如基于vero細胞的狂犬疫苗，DNA殘留含量要求不高于3ng/劑，基于vero細胞的脊髓灰質(zhì)炎疫苗，DNA殘留量不高于50pg/劑，基于CHO細胞的乙肝疫苗，DNA殘留量不高于10pg/劑。因此，宿主細胞殘留DNA間測對于試劑和儀器的檢測靈敏度都提出了極高的要求。而要準確檢測出宿主DNA殘留量，則需要采用標準曲線的覺對定量方法，根據(jù)《中國藥典2020》對殘留DNA檢測方法的要求，其標準曲線要求R2≥0.98，斜率在-3.1到-3.8范圍內(nèi)，每組加標樣品回收率在50%-150%之間，RSD≤30%。

南京正揚生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的HEK293宿主細胞殘留DNA檢測試劑盒利用Taqman熒光探針原理，定量檢測各種生物制品及藥品的中間品、半成品和成品中殘留的HEK293細胞DNA，產(chǎn)品具備檢測快速、操作簡單、特異性強、檢測靈敏度高、穩(wěn)定性好、能防止PCR產(chǎn)物污染等特點。蕞低檢測限可以達到fg級別。試劑盒配套有HEK293DNA定量參考品。產(chǎn)品檢測方法可溯源至中國藥典方法，通則〈3407〉。南京正揚生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的畢赤酵母宿主細胞殘留DNA檢測試劑盒利用Taqman熒光探針原理，定量檢測各種生物制品及藥品的中間品、半成品和成品中殘留的畢赤酵母宿主DNA，檢測試劑盒具備檢測快速、操作簡單、檢測特異性強、檢測靈敏度高、穩(wěn)定性好、能防止PCR產(chǎn)物污染等特點。蕞低檢測限可以達到fg級別。試劑盒配套有畢赤酵母DNA定量參考品。產(chǎn)品檢測方法可溯源至中國藥典方法，通則〈3407〉。Vero宿主細胞殘留DNA檢測的質(zhì)量控制。

用qPCR法進行宿主細胞殘留DNA檢測時，出現(xiàn)擴增曲線異常的可能原因是什么？①軟件參數(shù)設(shè)置不當可能引起標曲參數(shù)或檢測結(jié)果異常。如擴增曲線信號蕞早出現(xiàn)在14個循環(huán)左右，基線卻設(shè)置為3-15，導(dǎo)致儀器將14個循環(huán)出現(xiàn)的熒光信號默認為基線部分，出現(xiàn)結(jié)果異常。建議將BaselineEnd設(shè)置為擴增信號出現(xiàn)的前一個循環(huán)，或由軟件自動設(shè)置。②擴增曲線飄起：該現(xiàn)象通常出現(xiàn)于高濃度模板情況下，擴增曲線Ct值在10以內(nèi)的樣品。針對此類樣品檢測，設(shè)置標曲時建議盡量控制標曲蕞高濃度Ct值控制在10以上。檢測樣品時建議對樣品進行稀釋后再測試。生物制品中宿主細胞殘留DNA檢測的要求。南京正揚生物宿主細胞殘留DNA檢測操作流程

畢赤酵母宿主細胞殘留DNA檢測。正揚生物質(zhì)粒殘留DNA檢測產(chǎn)品

宿主細胞殘留DNA檢測：用qPCR法進行宿主細胞殘留DNA檢測時，出現(xiàn)擴增曲線異常的可能原因是什么？①如出現(xiàn)非特異性擴增現(xiàn)象：反應(yīng)管未蓋緊或密閉性差引起溶液蒸發(fā)而造成。上機前確保管蓋密閉，反應(yīng)結(jié)束后查看八聯(lián)管或96孔板各管液面是否一致。與設(shè)備硬件相關(guān)，需咨詢硬件供應(yīng)商解決。②如出現(xiàn)擴增曲線不平滑現(xiàn)象：可能與ROX加入量不足相關(guān)，個別設(shè)備有ROX校正功能，不同型號設(shè)備對ROX的需求量會有差異，需設(shè)置實驗摸索合適的ROX加入量。正揚生物質(zhì)粒殘留DNA檢測產(chǎn)品

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