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上海血液RNA外泌體分離蛋白檢測

來源: 發(fā)布時間:2023-05-21

外泌體分離方法之沉淀分離方法::基于聚合物的沉淀分離方法是利用超親水聚合物來增強小尺寸顆粒(如外泌體)的沉淀。聚乙二醇的常用濃度在8%到15%之間變化。使用這種方法,將含有外泌體的溶液與聚合物一起孵育過夜,并在約10,000×g下進一步離心。外泌體分離方法之FFF分離法:FFF目前是一種很少使用但前景不錯的一種外泌體分離方法。分離由橫流力驅(qū)動,并基于顆粒的分子量或流體動力學(xué)直徑。它包括高純度、高效率和短時間處理,但迄今為止,F(xiàn)FF在外泌體分離中的使用案例較少,還有待進一步開發(fā)。外泌體的分離純化有助于其后續(xù)研究,例如外泌體功能的解析等。上海血液RNA外泌體分離蛋白檢測

通過對外泌體以及外泌體提取相關(guān)生物試劑的研究發(fā)現(xiàn):外泌體除了蛋白質(zhì),外泌體還含有RNA。外泌體miRNA可用于各種疙瘩的判斷。目前有八種miRNA被確定為卵巢病的標(biāo)志物。此外,據(jù)報道,肺腺病者的血清和疙瘩樣本中的miRNA會增加。前列腺病的血清中外泌體miRNAmiR-141和miR-375水平會升高。研究表明,外泌體miRNA-21的血清水平升高和miRNA-1246在ESCC群體中凸現(xiàn)。有趣的是,外泌體miRNA可能是腎纖維化和心血管癥的潛在判斷標(biāo)志物。對于進行型退行型疾病,在阿爾茨海默者的生物體液中發(fā)現(xiàn)了幾種miRNA,如:miR-9、miR-107、miRNA-128、miRNA134和miRNA-137miRNA124的高表達(dá)水平。廈門外泌體分離多少錢一次分離樣品前的處理對較終外泌體分離的效果有較大影響。

細(xì)胞外泌體的來源和表征方法:細(xì)胞外泌體是直徑為30-150nm的血管外囊泡亞群。在過去的20年里,科學(xué)家已經(jīng)從包括正常細(xì)胞和病細(xì)胞在內(nèi)的許多細(xì)胞類型中分離出外泌體,并且研究了它們對其他細(xì)胞的影響。外泌體是由多種大分子組成,例如核酸、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)。細(xì)胞外泌體具有天然的特定細(xì)胞靶向特性,通常被設(shè)計用于靶向大分子(DNA和RNA)和藥物遞送系統(tǒng)(多柔比星、紫杉醇和紫杉醇)。目前常用細(xì)胞外泌體的分離方法主要是超速離心法、密度梯度離心法、超濾分離法、基于聚合物的沉淀法、親和沉淀分離法、免疫磁珠法和色譜法等。

外泌體(細(xì)胞外囊泡)目前被認(rèn)為是通過生物活性脂質(zhì)、蛋白質(zhì)以及RNA來進行細(xì)胞之間的通訊,同樣外泌體也是目前研究較深入的細(xì)胞外囊泡,外泌體的直徑只有我們頭發(fā)直徑的百萬分之一(30~150nm),當(dāng)多泡體與細(xì)胞膜融合時釋放到細(xì)胞外的時候,富含許多生物活性分子,如脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、轉(zhuǎn)移RNA以及微小RNA等就會被外泌體被釋放到細(xì)胞外,這樣一來就可以被微環(huán)境中的靶細(xì)胞吸收并且通過通過生物體液運送到遠(yuǎn)處。而外泌體與“目標(biāo)”進行交流方式主要有兩種途徑,一是通過胞吞作用被攝入到細(xì)胞內(nèi);二是通過膜融合的方式來與靶細(xì)胞膜進行融合,接著就會直接釋放其中含有的物質(zhì)以及信息至靶標(biāo)細(xì)胞,其實外泌體的作用形式是相互的靶細(xì)胞分泌含有細(xì)胞特異性RNA的外泌體作用于周圍細(xì)胞后可誘導(dǎo)其表型重組而獲得組織特異性的表型,而周圍細(xì)胞分泌的外泌體則可以通過調(diào)控蛋白表達(dá)來調(diào)控細(xì)胞的生理過程。外泌體在人體的主要作用是充當(dāng)局部和全身信號和調(diào)節(jié)系統(tǒng)。

外泌體分離方法之尺寸排阻層析法:尺寸排阻層析法也被稱為凝膠過濾層析法,這種方法是基于凝膠孔的大小和外泌體的大小,大于凝膠孔徑的顆粒被洗脫;反之,小于凝膠孔徑的顆粒將被抑制。凝膠過濾層析分離法總體上能獲得較高的純度和產(chǎn)量。建議與超濾相結(jié)合,這種方法可提供更少的蛋白質(zhì)污染和更高的外泌體回收率。凝膠過濾層析分離法的缺點是凝膠的成本過高。外泌體分離方法之聲學(xué)流體分離:聲學(xué)流體分離技術(shù)利用聲場根據(jù)粒子的大小、密度和可壓縮性來分離粒子。生物樣品在此過程中不會受到損壞,并且分離的本身是非接觸式、高效的和無標(biāo)記的。外泌體分離器材的選擇也對分離結(jié)果有一定的影響。廈門外泌體分離多少錢一次

外泌體的分析需要根據(jù)不同來源的細(xì)胞選擇適宜的分離方法。上海血液RNA外泌體分離蛋白檢測

分離外泌體的方法之免疫親和相互作用:免疫親和法是利用外泌體表面蛋白(抗原)與其靶抗體或分離配體分子之間的免疫親和相互作用原理分離純外泌體的理想方法。它有助于根據(jù)其表面標(biāo)志物分離特定類型的外泌體。基于微孔板的酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)是免疫親和分離試劑盒的一個例子,用于根據(jù)外泌體表面標(biāo)志物分離外泌體。Tetraspanin蛋白是這種分離方法的決定因素。抗CD9、抗CD63和抗CD81是免疫親和外泌體分離中使用的抗體的常見示例。免疫親和法可用于從結(jié)腸病細(xì)胞中分離外泌體,其效率高于超速離心和密度梯度分離。另外還有一種外泌體分離方法,該方法采用抗體包被的基于磁性顆粒的技術(shù)來分離外泌體。上海血液RNA外泌體分離蛋白檢測

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