“做miRNA下調(diào)，QPCR檢測miRNA，表達(dá)水平無變化”，這到底是怎么回事？現(xiàn)有miRNA抑制手段，無論是基于載體構(gòu)建的、還是化學(xué)合成的，本質(zhì)上都是用跟成熟體互補的反義miRNA（miRNA海綿體屬于不完全互補的反義RNA重復(fù)），其可以通過結(jié)合miRNA，阻斷其與靶基因結(jié)合，但并不能有效引發(fā)miRNA的降解，原因有兩方面：其一是反義RNA與miRNA結(jié)合后，序列很短，導(dǎo)致Dicer酶（細(xì)胞內(nèi)降解雙鏈RNA的主角）不能有效結(jié)合；其二是miRNA與Ago2以RISC復(fù)合物的形式存在，該復(fù)合物也會導(dǎo)致Dicer酶無法高效結(jié)合。因此，如果以反義RNA技術(shù)抑制miRNA功能，QPCR可以做，如果檢測出表達(dá)水平下降還好，即便未檢測到，也不表示抑制無效，正確的做法是直接檢測目的基因蛋白水平是否有上調(diào)。但若實驗者不清楚靶基因的情況下，不檢測到miRNA下調(diào)，心里是沒底的。瑞普信生物技術(shù)有限公司專業(yè)的第三方檢測Western Blot。云南慢病毒第三方檢測中心

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