dPCR的結果統(tǒng)計方式有2種,一種是采用標記多種顏色,通過不同檢測通道分辨不同顏色和強度,再根據分散液滴的數(shù)量計算待測基因的含量;另一種采用概率統(tǒng)計的數(shù)據處理方法,即通過泊松分布的方法對結果進行分析。應用概率統(tǒng)計分析數(shù)據和對數(shù)據處理方法的模型直接關系著結果的準確性和分析時間的長短。常用的統(tǒng)計方法是假設每個微反應單元的體積相同,根據泊松統(tǒng)計計算拷貝數(shù),公式為:M=-Vx1n(1-x/)其中M是目標總拷貝數(shù)量;V是微反應單元數(shù)量;x是發(fā)光的微反應單元數(shù)量。臻準推出新款數(shù)字PCR產品:AccuONE2.0數(shù)字PCR系統(tǒng)。上海國產數(shù)字PCR生命科學用品
目前全球數(shù)字PCR的市場規(guī)模約1.5億-2.5億美元,約占熒光定量PCR市場規(guī)模(約20億美元)的10%,但增長趨勢明顯,有望逐步替代熒光定量PCR技術。目前國際市場有伯樂、賽默飛、凱杰、Stilla、羅氏等主要數(shù)字PCR玩家。根據MordorIntelliaence研究報告預測,2019-2024年全球qPCR和dPCR市場將以8.8%的年復合增長率增長,從2014年的41.13億美元增長到2024年的62.7億美元。其中,dPCR的增速更快達11.9%,將從2014年的4.75億美元,增長到2024年8.34億美元,為PCR檢測帶來極大的市場。但其預測的發(fā)展趨勢仍有參考價值。德國全自動數(shù)字PCR熒光通道數(shù)字PCR的應用甚廣,除了可應用于進行突變的檢測以外,也可運用于基因擴增的檢測。
相比于qPCR,dPCR在轉基因檢測中具有以下優(yōu)勢:(1)檢測靈敏度高:理論上dPCR的靈敏度可達1個拷貝,而實際應用中dPCR的小檢出限和比較低定量限數(shù)值非常接近,所以dPCR可以在非常低的目標拷貝數(shù)下得到精確的結果;通常轉基因比參考基因(內源基因)濃度低很多;(2)前處理簡單且受基質成分干擾較?。篸PCR反應效率和精密度受到食品基質成分干擾影響較小,可應用于混合基質樣品中低豐度DNA的檢測;(3)dPCR對抑制劑的敏感性較低:由于dPCR結果表示為“有熒光“或“無熒光”,即使存在抑制劑降低了熒光強度仍可以表示為“有熒光;(4)適合多重轉基因檢測:食品或飼料提取的DNA中可能包含多種轉基因片段,可以進行多重dPCR檢測,提高分析效率。同時,dPCR可以直接溯源至SI國際單位制摩爾,適合單一、雙重及多重轉基因標準物質研究,一次可識別不同的轉基因區(qū)域。下面詳細進行說明。
相比于cPCR技術和第二代qPCR技術,dPCR技術具有定量,可溯源至SI國際單位制摩爾;基質成分干擾較小[51];靈敏度高;對抑制劑的敏感性較低;適合多重轉基因檢測[52.53],可提高分析效率;實驗條件優(yōu)化簡單[54]對實驗條件優(yōu)化的要求較低,適合多重基因檢測等優(yōu)勢,可為轉基因農作物提供準確的量值保證,目前dPCR儀器的價格仍然十分昂貴,但隨著系統(tǒng)加工工藝的改進以及使用較便宜的材料,聚合成更小的體積[556],其價格將會不斷的降低,使其應用到更多的檢測中。數(shù)字PCR的兩大應用場景在于基因檢測、無創(chuàng)出生缺陷篩查。
面對日益嚴格的限量標準和可預期降低的儀器購置成本,數(shù)字PCR將在食品檢測領域起到越來越重要的作用:同時,數(shù)字PCR技術帶來的量值的溯源方式,也將成為轉基因標準物質的主要研究方向。發(fā)展dPCR協(xié)同分析和自動化程度,使其具有更好兼容性、更低廉的成本,可使數(shù)據結果不間斷地納入到全食品安全全產業(yè)鏈中,從而在未來的食品檢測中得到更廣的應用。dPCR多重檢測可在不使用標準曲線的情況下,在同一分析過程中同時測定單一或多個轉基因與參考基因的比率,提高檢測的效率節(jié)省重復操作。拷貝數(shù)變異、突變檢測、基因相對表達研究、二代測序結果驗證、miRNA表達分析、單細胞基因表達分析等。華南地區(qū)醫(yī)療系統(tǒng)認證數(shù)字PCR價格
數(shù)字PCR技術min檢測下限可到2copies/ml,比qPCR靈敏度提升了100倍。上海國產數(shù)字PCR生命科學用品
數(shù)字PCR實驗步驟包括:1)試劑配制:將10xdPCRBuffer、dPCR酶、引物和探針、無核酸酶水混合成dPCR預混液,并分裝到8聯(lián)排管中或96孔板中;將各待測樣本的核酸模板、陽性對照、陰性對照分別加入相應的8聯(lián)排管中或96孔板中;2)芯片進樣:在小海龜BioDigital·青全自動樣品處理系統(tǒng)上進行芯片上反應液進樣和液滴生成;3)芯片擴增:在小海龜BioDigital·青PCR擴增儀上進行芯片上PCR擴增反應;4)芯片閱讀:在小海龜BioDigital·青生物芯片閱讀儀上進行芯片上熒光信號閱讀;5)數(shù)據分析:使用生物芯片數(shù)據分析·青軟件進行數(shù)據分析和報告導出;上海國產數(shù)字PCR生命科學用品
廣州雙螺旋科學儀器有限公司是一家從事數(shù)字PCR,純水機,病理切片機,倍性分析儀研發(fā)、生產、銷售及售后的服務型企業(yè)。公司坐落在廣州市黃埔區(qū)銳豐三街4號617房,成立于2015-04-17。公司通過創(chuàng)新型可持續(xù)發(fā)展為重心理念,以客戶滿意為重要標準。在孜孜不倦的奮斗下,公司產品業(yè)務越來越廣。目前主要經營有數(shù)字PCR,純水機,病理切片機,倍性分析儀等產品,并多次以精細化學品行業(yè)標準、客戶需求定制多款多元化的產品。我們以客戶的需求為基礎,在產品設計和研發(fā)上面苦下功夫,一份份的不懈努力和付出,打造了臻準,美國艾科浦,銳訊生物,Sysmex,Eprerdia產品。我們從用戶角度,對每一款產品進行多方面分析,對每一款產品都精心設計、精心制作和嚴格檢驗。廣州雙螺旋科學儀器有限公司以市場為導向,以創(chuàng)新為動力。不斷提升管理水平及數(shù)字PCR,純水機,病理切片機,倍性分析儀產品質量。本公司以良好的商品品質、誠信的經營理念期待您的到來!